脂肪酸结合蛋白4在小鼠子宫蜕膜中的表达

[目的]检测脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在小鼠子宫蜕膜细胞中的表达。[方法]获取正常的小鼠子宫蜕膜组织和人工诱导蜕膜化组织,同时利用酶消化分离小鼠子宫内膜基质细胞,进行体外诱导蜕膜化,利用实时定量PCR检测脂肪酸结合蛋白4在子宫蜕膜组织细胞中的表达。[结果]FABP 4在小鼠正常子宫蜕膜组织、人工诱导蜕膜化组织及子宫内膜蜕膜化基质细胞中的表达水平均显著高于对照组。[结论]FABP4可能参与了小鼠子宫内膜蜕膜化过程,为研究蜕膜化机理奠定了基础。     

多胺代谢相关基因在小鼠子宫蜕膜中的转录

检测多胺代谢相关基因在子宫蜕膜细胞中的转录.获取正常的小鼠子宫蜕膜组织和人工诱导蜕膜化组织,同时利用酶消化分离小鼠子宫内膜基质细胞,进行体外诱导蜕膜化,利用实时定量PCR检测多胺相关基因在子宫蜕膜组织或细胞中的转录.结果表明:多胺相关基因在小鼠正常蜕膜化组织以及人工蜕膜化组织中mRNA水平均发生了显著的变化,但基质细胞体外蜕膜化后仅有SSAT和SMS mRNA发生显著的变化.多胺相关基因在小鼠子宫蜕膜中转录水平发生了显著的变化,这可能引起细胞内多胺水平的变化,从而对细胞增殖具有调节作用.     

小鼠子宫内膜诱导蜕膜化的研究

[目的]建立体内和体外诱导小鼠子宫内膜蜕膜化的方法。[方法]利用假孕小鼠子宫角注油和激素处理体外分离的4周龄小鼠子宫内膜基质细胞进行诱导蜕膜化,通过半定量PCR和实时定量PCR检测蜕膜化标志分子蜕膜/滋养层泌乳雌激素相关蛋白。[结果]假孕第4天子宫角注油和雌激素与孕酮联合处理小鼠子宫内膜基质细胞都可显著提高蜕膜化标志分子的mRNA水平,可诱导产生蜕膜化。[结论]建立了体内和体外诱导蜕膜化的方法,为验证小鼠蜕膜化芯片奠定了基础。     

缺氧诱导因子2α在大鼠早期妊娠中的表达与调节

利用原位杂交、免疫组织化学、Western blot以及荧光定量PCR等试验技术,研究HIF-2α基因在大鼠早期妊娠1～9 d、激素处理、人工诱导蜕膜化及体外诱导人子宫基质细胞蜕膜化模型中表达情况。妊娠1～5 d子宫基质细胞中低表达;妊娠第6天在围绕着床位点子宫基质细胞中HIF-2α表达升高;妊娠第7～9天HIF-2α蜕膜中表达逐渐增强;24 h雌激素和孕酮处理HIF-2α在子宫中表达无变化。HIF-2α在人工诱导蜕膜化子宫中高表达。在体外诱导人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中,HIF-2α随诱导天数增加表达升高。体内体外试验结果表明,HIF-2α可能在早期妊娠蜕膜化过程中发挥作用。     

早孕小鼠子宫内膜MMP10的表达及其意义

目的:探讨基质金属蛋白酶10(MMP10)基因及其蛋白在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律及意义.方法:采用RT-PCR、原位杂交、免疫组化和western-blot法分别检测受孕3～7 d的小鼠子宫内膜MMP10基因和蛋白的表达及分布,并以未孕小鼠子宫内膜为对照.结果:①早孕小鼠子宫内膜组织MMP10基因和蛋白的表达较未孕小鼠均显著增加,且表达量从着床前期到着床后期逐渐增强,其中d6、d7表达最强,与其他妊娠各期比较差异有统计学意义;②MMP10基因和蛋白表达主要分布在子宫内膜间质细胞.结论:MMP10在早孕小鼠子宫内膜组织中高表达可能有利于降解细胞外基质,促进胚胎滋养细胞的侵袭,参与着床中子宫内膜的蜕膜化过程以及胚胎的早期增殖与分化.     

早孕小鼠子宫内膜MMP10的表达及其意义

目的：探讨基质金属蛋白酶10（MMP10）基因及其蛋白在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律及意义.方法：采用RT-PCR、原位杂交、免疫组化和Western-blot法分别检测受孕3-7 d的小鼠子宫内膜MMP10基因和蛋白的表达及分布,并以未孕小鼠子宫内膜为对照.结果：①早孕小鼠子宫内膜组织MMP10基因和蛋白的表达较未孕小鼠均显著增加,且表达量从着床前期到着床后期逐渐增强,其中d6、d7表达最强,与其他妊娠各期比较差异有统计学意义;②MMP10基因和蛋白表达主要分布在子宫内膜间质细胞.结论：MMP10在早孕小鼠子宫内膜组织中高表达可能有利于降解细胞外基质,促进胚胎滋养细胞的侵袭,参与着床中子宫内膜的蜕膜化过程以及胚胎的早期增殖与分化.     

C-erbB2蛋白在小鼠围着床期子宫中的表达和定位

为研究C-erbB2蛋白在小鼠围着床期子宫中的蛋白定位,通过免疫组化方法检测C-erbB2蛋白在围者床期小鼠子宫中定位情况.研究结果表明:在未孕子宫和空白对照组子宫中未见C-erbB2蛋白的表达,第1～3 d子宫中C-erbB2蛋白主要分布在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞胞膜上,子宫内膜基质细胞中未见表达,第4～5 d子宫中C-erbB2蛋白除了表达在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞胞膜上,上皮下基质细胞膜上可见弱阳性表达,第6～8 d的子宫中C-erbB2蛋白主要分布在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞以及围绕着床位点的蜕膜细胞胞膜上,各组肌层均未见阳性表达,C-erbB2蛋白在围着床期小鼠子宫组织中的表达呈规律性变化.     

SerpinB6 b过表达载体的构建及对小鼠子宫基质细胞蜕膜化的影响

试验构建丝氨酸蛋白酶抑制剂亚家族成员6b(Serine peptidase inhibitor,clade B,member 6b,SerpinB6b)基因过表达载体,研究其对小鼠子宫基质细胞蜕膜化的影响。根据Gen Bank中已发表的SerpinB6b基因序列,设计含酶切位点的特异性引物,PCR扩增并与p GEM-T载体连接,经限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,与pc DNA3. 1(+)载体融合得到SerpinB6b过表达载体。将其转染到体外分离培养的小鼠子宫基质细胞,利用荧光定量PCR法检测子宫基质细胞中SerpinB6b mRNA表达的变化,以及SerpinB6b过表达后蜕膜化标志分子Prl8a2和Prl3c1表达的变化,对照组转染pc DNA3. 1(+)空载体。结果表明:SerpinB6b过表达载体经双酶切鉴定后,结果与目的基因条带吻合,测序结果与Gen Bank中小鼠SerpinB6b基因序列同源性为100%。与对照组相比,转染SerpinB6b过表达载体后,SerpinB6b在小鼠子宫基质细胞中的表达显著升高。同时,过表达SerpinB6b可明显促进蜕膜化标志分子Prl8a2和Prl3c1 mRNA的表达。提示SerpinB6b可能在小鼠子宫基质细胞蜕膜化过程中起重要的调节作用。     

空气对小鼠胚胎移植效果的影响

小鼠是研究人类基因功能和生殖发育机理的主要模式动物,其胚胎移植技术是研究过程的必要环节,小鼠胚胎子宫移植技术包括手术法和非手术法,目前国际上主要采用手术法胚胎移植。为了研究空气对小鼠胚胎移植效果的影响,我们在妊娠3.5 d的小鼠子宫一侧注入2.0μl空气,对左右两侧子宫内胎儿的发育情况做对照试验。结果表明:空气会严重诱导小鼠子宫内膜异常蜕膜化,导致胎儿死亡。     

MHC Ⅱ在小鼠子宫的表达

探讨主要组织相容性复合物(major histocompatibility complexⅡ,MHCⅡ)在不同生长时期小鼠子宫组织中的表达和变化规律。采用免疫组化法,检测10个不同生理时期(出生后5d,15 d,30 d,60 d,妊娠1d,妊娠4 d,妊娠6 d,妊娠9 d,妊娠15 d,妊娠18 d)小鼠子宫MHCⅡ的表达水平,并进行图像分析。各检测期子宫均见MHCⅡ表达,其主要分布于子宫内膜基质细胞、上皮细胞,其他部位基本无表达。出生后5、15、306、0 d,随着日龄增加,表达依次增强,差异显著(P<0.05)。其中60 d,MHCⅡ表达最强,但进入妊娠期MHCⅡ表达减弱。妊娠1 d、妊娠4 d、妊娠6 d、妊娠9 d这几组间MHCⅡ的表达无明显差异。而妊娠18 d与其他组均差异显著(P<0.05),MHCⅡ表达量最低。不同生长时期小鼠子宫内膜上皮和基质细胞上均有MHCⅡ表达,具备了成为非专职抗原递呈细胞的必要条件之一,因而推测子宫内膜细胞可能具有抗原呈递作用,其在不同生理期的生殖免疫中作用不同。     

一氧化氮对小鼠胚胎附植影响的研究

采用子宫角注射方法研究了一氧化氮（N0）对小鼠胚胎植入的影响,并采用组织切片的方法,光镜观察了一氧化氮对小鼠子宫及其内膜形态变化及脱膜化的影响。结果表明,与对照侧相比,L-NAME 0.2 mg/只处理组植入胚胎数降低,在L-NAME中加入NO供体硝普钠（SNP）时,则不影响胚胎植入数;附植过程中,妊娠侧的子宫内膜发育明显,上皮细胞增高,腺体发达,间质疏松,间质细胞增大,发生明显的蜕膜样变。抑制侧子宫内膜柱状上皮细胞相对较低,腺体数少,子宫内膜在附植后期出现较明显退行性变化,基质变得紧密。一氧化氮作为一种内源性平滑肌松驰剂和血管扩张剂,对子宫内膜MMP-9mRNA的表达有着极为显著的调节作用,在附植过程中一氧化氮合酶受到抑制后能显著降低MMP-9基因的表达,并进一步影响子宫内膜发育和胚胎的附植。     

一氧化氮对小鼠胚胎附植影响的研究

采用子宫角注射方法研究了一氧化氮(N0)对小鼠胚胎植入的影响,并采用组织切片的方法,光镜观察了一氧化氮对小鼠子宫及其内膜形态变化及脱膜化的影响。结果表明,与对照侧相比,L-NAME 0.2 mg/只处理组植入胚胎数降低,在L-NAME中加入NO供体硝普钠(SNP)时,则不影响胚胎植入数;附植过程中,妊娠侧的子宫内膜发育明显,上皮细胞增高,腺体发达,间质疏松,间质细胞增大,发生明显的蜕膜样变。抑制侧子宫内膜柱状上皮细胞相对较低,腺体数少,子宫内膜在附植后期出现较明显退行性变化,基质变得紧密。一氧化氮作为一种内源性平滑肌松驰剂和血管扩张剂,对子宫内膜MMP-9mRNA的表达有着极为显著的调节作用,在附植过程中一氧化氮合酶受到抑制后能显著降低MMP-9基因的表达,并进一步影响子宫内膜发育和胚胎的附植。     

下调DKK2表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究RNA干扰Dickkopf-2基因(DKK2)表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计并合成3条针对DKK2基因的siRNA,在转染试剂LipofectamineTM2000介导下转染小鼠子宫内膜基质细胞,用RT-q PCR法检测转染前、后DKK2基因的表达量,筛选干扰效率最高的1条siRNA。用该siRNA转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h,利用Caspase3活性和Annexin-V FITC/PI双染法检测干扰DKK2基因对细胞凋亡的影响;用CCK8细胞计数法检测该siRNA干扰DKK2基因不同时间对小鼠子宫内膜基质细胞增殖的影响。[结果]3条siRNA均能有效抑制DKK2基因的表达,RT-q PCR结果显示DKK2基因表达水平显著降低(siRNA2,P0.05;siRNA1、siRNA3,P0.01);CCK8法结果显示siRNA干扰DKK2后对小鼠子宫内膜基质细胞有明显的抑制作用(24 h、48 h,P0.05);Caspase3活性检测和Annexin-V FITC/PI双染法结果显示,siRNA1转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h后,Caspase3活性明显增加(P0.01),细胞凋亡率明显增加(P0.01),凋亡率为18.48%。[结论]利用RNA干扰技术沉默DKK2基因的表达可以明显抑制小鼠子宫内膜基质细胞的增殖并促进凋亡。     

小鼠子宫内膜细胞对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC转化与分泌活性的影响

【目的】探索小鼠子宫内膜细胞培养上清液对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood Monouclear Cells,PBMC)的转化及分泌活性的影响。【方法】采用噻唑蓝(MTT)比色法和酶联免疫吸附测定法(ELISA),分别研究小鼠子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)和基质细胞(Endometrial Stro-mal Cells,ESCs)培养上清液,对离体培养的小鼠脾脏淋巴细胞、山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood MonouclearCells,PBMC)的增殖转化及白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)和白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)分泌活性的影响。【结果】小鼠子宫内膜基质细胞和上皮细胞培养上清液,均可无种属差异地刺激小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC的增殖转化,同时抑制植物血球凝素(Plant hemaggluti min PHA-P)诱导的小鼠淋巴细胞和山羊PBMC分泌IL-2的活性,但对PHA-P诱导的IL-4分泌有促进或协同作用。【结论】EECs和ESCs通过影响小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PB-MC的增殖转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。     

胚胎着床过程中MMPs对子宫内膜重塑的作用研究进展

胚胎着床是一种细胞侵袭和转移的正常生理过程,涉及细胞外基质的降解和重塑、胎盘绒毛血管的发生、子宫螺旋动脉的重建等,在基质金属蛋白酶、组织金属蛋白酶抑制剂以及其他许多因子的调控下,对子宫内膜细胞外基质进行有序地降解和重塑。对MMPs参与胚胎着床中子宫内膜重塑过程中的作用及其引起细胞外基质的变化情况进行了综述。     

猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的分离培养

为了获得高纯度的猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞,对猪子宫内膜进行胶原酶消化,分离基质细胞和腺上皮细胞进行体外培养,研究其生长特性.结果表明:猪子宫内膜组织在37℃、通过1 g/L胶原酶Ⅰ消化90 min可以获得游离的腺体,对腺体进行培养时上皮细胞比例可达70％以上.培养过程中采用差速消化和差速贴壁可以成功分离腺上皮细胞和基质细胞.基质细胞最适贴壁时间为25 min,腺上皮为3h.纯化的基质细胞生长迅速,可传5代以上,上皮细胞生长缓慢,并且成片脱落.     

自然流产蜕膜组织STAT1表达及其生物学意义研究

为了探讨信号传导子及转录激活子1在胚胎植入过程中的作用, 取正常妊娠(6W～11W)人工流产子宫蜕膜组织30例, 自然流产蜕膜组织30例, 利用RT-PCR, 原位杂交, 免疫组织化学, 蛋白印迹, 免疫荧光化学方法对流产组与正常妊娠蜕膜中STAT1进行定性定量检测. 结果表明: STAT1在正常妊娠6W～11W蜕膜表达呈逐渐降低趋势, 但差异无统计学意义(p＞0.05), 流产组蜕膜STAT1平均表达量显著高于正常妊娠组(p＜0.05). 说明在自然流产子宫蜕膜组织中, STAT1高表达可能通过促进蜕膜细胞过度凋亡和抑制细胞增殖而影响胚胎正常植入, 这可能是诱发流产的原因之一.     

自然流产蜕膜组织STAT1表达及其生物学意义研究

为了探讨信号传导子及转录激活子1在胚胎植入过程中的作用,取正常妊娠（6W～11W）人工流产子宫蜕膜组织30例,自然流产蜕膜组织30例,利用RT-PCR,原位杂交,免疫组织化学,蛋白印迹,免疫荧光化学方法对流产组与正常妊娠蜕膜中STAT1进行定性定量检测.结果表明：STAT1在正常妊娠6W～11W蜕膜表达呈逐渐降低趋势,但差异无统计学意义（p〉0.05）,流产组蜕膜STAT1平均表达量显著高于正常妊娠组（p〈0.05）.说明在自然流产子宫蜕膜组织中,STAT1高表达可能通过促进蜕膜细胞过度凋亡和抑制细胞增殖而影响胚胎正常植入,这可能是诱发流产的原因之一.     

早孕小鼠子宫内膜ICAM-1的表达及意义

探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜的表达及其意义 方法: 收集妊娠1-5 d的早孕小鼠子宫内膜,利用RT-PCR、免疫组织化和Western-blot方法检测ICAM-1基因及蛋白的表达及分布;着床期小鼠单侧宫角注射ICAM-1单抗,观察胚胎着床变化. 结果: 1. ICAM-1 mRNA孕D1到D3逐渐增高,D4达最高,D5开始降低;2. 子宫内膜上皮细胞,基质细胞,血管上皮细胞均有ICAM-1的表达,阳性细胞数量、表达强度和表达时间呈现一定规律性;3. ICAM-1 D1、D2、D3略有升高,D4有强表达,D5略有下降;4. 单侧宫角注射ICAM-1单抗后,该侧胚胎发生流产. 结论: ICAM-1在早孕小鼠子宫内膜的表达变化及分布,提示ICAM-1参与了胚泡着床,ICAM-1可能起调节子宫内膜的局部免疫作用.     

LPS对牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8启动子区甲基化状态的影响

为了解细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导牛子宫内膜细胞白介素6(Interleukin 6,IL-6)和白介素8(Interleukin 8,IL-8)mRNA表达上调的分子机制,利用亚硫酸氢测序(Bisulfite sequencing PCR,BSP)技术分析LPS对牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8基因启动子区甲基化状态的影响,明确DNA甲基化对LPS诱导的牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8基因表达的调控作用。用1μg/m L的LPS处理牛子宫内膜细胞24 h,用BSP技术检测IL-6和IL-8表达量及其启动子区甲基化水平。结果表明:LPS可显著提高IL-6和IL-8表达量,伴随着IL-6和IL-8启动子区DNA甲基化水平降低,尤其在IL-6启动子区-660及IL-8启动子区-120和-48位点降低最明显。结果提示,LPS可降低牛子宫内膜细胞IL-6和IL-8启动子特定位点甲基化水平。