西瓜枯萎病Xie颃菌的筛选研究

从健康西瓜根组织和根际土壤中分离到６８个荧光假单胞菌株。８０．８８％的菌株具有较强的皿内拮抗细菌作用；４．４１％的菌株活体和１９．１２％的菌株代谢物明显抑制西瓜枯萎菌分生孢子的萌发；５２．０８％的菌株可以不同程度抑制枯萎菌的瓜苗导管内定殖；２３．５３％的菌株可以利用几丁质作为碳源。用自然的大田土进行温室盆栽试验，Ａ６３，Ａ５１和Ａ４１菌株在各枯萎菌浓度水平下均表现出较好的防病作用。Ｄ３３，Ａ６１和     

西瓜枯萎病生防细菌的筛选、鉴定及其抑菌作用

采用平板对峙法从连作西瓜(Citrullus lanatus)的根际土壤中筛选获得1株对西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)具有较强拮抗作用的细菌BTF5菌株,并对其进行了形态观察、生理生化测定和16S r DNA序列分析鉴定.结果表明:该BTF5菌株对西瓜枯萎病菌的抑制率达63.09%,与Gen Bank中越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)具有很高的遗传相似性,同源性为99%.因此将细菌BTF5鉴定为越南伯克霍尔德氏菌.经人工培养基上连续8次传代培养,该细菌对西瓜枯萎病菌的抑制效果稳定.     

36株生防菌对辣椒疫病等4种病原真菌的拮抗作用研究

采用拮抗菌发酵液、皿内竞争及紫外线照射菌株代谢产物等方法,研究了36株生防菌对辣椒疫病、西瓜枯萎病、棉花枯萎病及黄瓜枯萎病4种病原真菌的拮抗作用。结果表明:(1)4种病原真菌在含有不同拮抗菌发酵液的平板上生长时,均受到不同程度的抑制,说明供试拮抗菌对4种病原真菌具有拮抗作用。36株供试拮抗菌对辣椒疫霉、西瓜枯萎菌、黄瓜枯萎菌和棉花枯萎菌有抑制效果的菌株数分别为30(占83.3%),27(占75%),24(占66.7%)和26(占72.2%)株。(2)36株供试拮抗菌中,与辣椒疫霉、黄瓜枯萎菌、棉花枯萎菌及西瓜枯萎菌具有竞争抑制作用的拮抗菌分别有19(52.7%),10(27.8%),6(16.8%)和11(30.6%)株。(3)菌株95W06,64G12,87W14,63G06,03GY022,31-4G02,28G14及10G27对辣椒疫霉菌具有抑制作用,其代谢产物经紫外线照射后,均失去对辣椒疫霉的抑制作用,表明此8株拮抗菌的代谢产物活性成分不稳定。(4)利用拮抗菌与病原菌的竞争抑制试验,可以从大量拮抗性菌株中快速筛选出有实际防效的生防菌。     

雷公藤内生真菌的分离及活性菌株的筛选

以传统药用植物雷公藤为试验材料，分离筛选能产抑制作物病原真菌的活性物质的内生真菌。通过组织分离法，从雷公藤组织中分离得到36株内生菌。发酵和抑菌试验结果表明，10号菌株的代谢产物对多种作物病害病原真菌有明显的抑制作用。10号内生真菌发酵代谢产物对水稻纹枯病菌、黄瓜立枯病菌、黄瓜枯萎病菌、葡萄炭疽病菌、菜豆炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、番茄早疫病菌、番茄灰霉病菌、柑橘炭疽病菌和香蕉炭疽病菌的抑制率分别为88．89％，100％，72．73％，85．00％，80．00％，60．00％，100％，100％，85．71％，66．67％。     

河北省西瓜枯萎病菌生理小种鉴定与AFLP分析

【目的】明确河北省西瓜枯萎病菌生理小种类型和遗传多样性，为西瓜抗病育种和西瓜枯萎病的综合防治提供依据。【方法】本文对采自河北省12个西瓜种植地区的46个西瓜枯萎病菌菌株和4个已知生理小种的菌株进行了致病性测定和AFLP分析。【结果】根据菌株对3个鉴别寄主表现出的致病性强弱，将河北省46个西瓜枯萎病菌菌株划分为3个不同的生理小种，即0号、1号和2号，分别占供试菌株的17.4％、65.2％和17.4％，其中1号生理小种为优势小种，分布在河北省所有西瓜种植区。21对AFLP引物对供试菌株扩增出1 157条带，其中多态性带389条，占总带数的33.6％。河北省西瓜枯萎病菌的遗传距离变化在0.33～0.95之间，平均为0.66，群体遗传多样性比较丰富。基于AFLP标记聚类分析表明，50个菌株被划分为3个类群（AFLP Groups，AGs）。AGI包含4个菌株，均为2号生理小种；AGII包括4个菌株，均为0号生理小种；AGIII包括42个菌株，以1号生理小种为主（32个），占该类群的76.2％。【结论】河北省西瓜枯萎病菌存在明显的致病性分化，其AFLP类群划分与致病性鉴定划分的生理小种之间存在一定相关性，但与菌株的地理来源无关。     

接种体含量与西瓜枯萎病发生的关系

利用温室盆栽试验，研究了枯萎菌不同接种体含量与西瓜枯萎病发生的关系以及对瓜苗生长的影响。     

果胶酶菌株与蛋白生产菌株的摇瓶混合培养

以甜菜渣为主要原料，将曲霉菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．）菌株ＸＡＰ１３１２和ＸＡＰ２３４８与蛋白生产菌产阮假丝酵母菌（Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ）菌株ＳＤ和ＳＬ混合进行摇瓶培养，结果４菌株混合培养比单菌培养或３菌混合培养效果好，培养基最佳组成成分为甜菜渣４．０％，麸粉３．０％，（ＮＨ４）２ＳＯ４１．０％，糖蜜０．２％；最佳培养条件为温度３０℃，初始ｐＨ值５．６，摇床转速２５０ｒ／ｍｉｎ，最佳产酶时间为６０ｈ。     

抗枯宁对西瓜生长及防治枯萎病作用的研究

抗枯宁是一种低毒的杀菌剂，它在防治作物病害的同时，还可为作物补充部分营养元素，保护和促进作物健壮生长。经室内毒力测定，它对西瓜枯萎菌的菌丝生长无明显抑制能力，但对该病原的小孢子具有一定的抑制萌发能力，ＥＣ５０为３１８．８ｐｐｍ，用它浸种后，对西瓜幼苗有明显地促进生长作用，幼苗生根长度明显增加，侧根数目也增多，西瓜幼苗喷洒此药后，植株体内过氧化物酶活性提高，但叶绿素含量没有明显变化。经田间药效试验表明，该药对西瓜枯萎病也具有较好的防治作用。     

压砂西瓜枯萎病生防木霉菌筛选及其拮抗机制研究

为了获得对压砂西瓜枯萎病具有生防作用的木霉菌株,从中卫香山压砂地不同作物根际土壤分离得到22株木霉,通过与西瓜枯萎病菌对峙培养,筛选出6株具有较强拮抗能力的木霉菌株,并对其发酵液抑菌活性及拮抗机制进行了研究。结果表明,6株木霉菌对枯萎病菌的抑菌率在76.92%以上,其中Ty3菌株的抑菌率最高,为83.29%,该木霉发酵液的抑菌率为84.57%,其产生的挥发性和非挥发性代谢物对病原菌的抑菌率分别为59.83%和90.60%。观察结果表明,木霉菌可通过竞争、重寄生作用及产生抗生物质等方式抑制枯萎病菌菌丝生长与扩展,显微镜下观察到木霉菌丝附着或缠绕病原菌丝上吸取营养,致使病原菌丝变形、断裂、消解。综上所述,Ty3菌株可作为压砂西瓜枯萎病生物防治的拮抗菌加以开发应用。     

1株死谷芽孢杆菌的分离、鉴定及防治西瓜枯萎病的效果

为筛选新的防治西瓜枯萎病的生防菌菌种资源,采用稀释涂布平板法从番茄植株中分离得到对西瓜枯萎病菌具有显著抑制作用的拮抗菌,采用平板对峙法研究其对病原菌的广谱抑制效果,将菌体特征结合16S r DNA序列分析及生理生化指标相结合,对生防菌进行初步鉴定,明确其分类地位,并采用温室栽培试验对其进行抗病效果初探。结果表明,从番茄中分离的1株对西瓜枯萎病菌具有显著拮抗作用的菌株wm005,对西瓜枯萎病菌、油菜菌核病菌、黄瓜立枯病菌、草莓灰霉病菌、小麦赤霉病菌、辣椒疫霉病菌、番茄枯萎病菌、水稻恶苗病菌、葡萄炭疽病菌均表现出很强的抑制作用,具有广谱抗性。根据菌体特征、16S r DNA序列分析及生理生化指标的结果,初步鉴定该菌为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis wm005)。温室栽培试验表明菌株wm005对由西瓜枯萎病菌引起的西瓜枯萎病具有显著的防治效果(防效为75.1%),高出化学药剂百菌清防效16.9百分点,说明菌株Bacillus vallismortis wm005具有很好田间应用开发的潜力。     

SC11生防菌剂及其不同复配对西瓜和茄子防病促生作用

基于时间与空间动态概念探究生防菌SC11不同剂型对茄子防病促生效果,生防菌SC11与Fo47、153粉剂复配对西瓜枯萎病的防治效果。结果表明,菌株SC11不同剂型处理对茄子黄萎病具有明显的防效,其中以种衣剂处理防效最优(69.98%),接近药剂对照多菌灵。同时,SC11不同制剂能显著增加茄子叶面积、株高或鲜质量,与对照相比,SC11种衣剂处理的叶面积、株高分别提高129.64%、100.84%,粉剂处理的株高、鲜质量增幅分别为69.64%、116.29%。SC11施用后30d施用153(C2处理),对西瓜枯萎病的防效达89.47%,远高于其他处理。SC11和Fo47同时施用时,防效最低,低于单独施用的防效。初步确定SC11不同剂型对茄子的促生作用及其对茄子黄萎病的防治效果,明确基于动态时空防治西瓜枯萎病的生防菌复配组合,间隔施用能有效提高复配防效。     

一株生防木霉的鉴定及环境pH与对羟基苯甲酸对其防病效果的影响

旨在明确西瓜枯萎病生防真菌M3菌株的分类地位及环境pH与对羟基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid, PHBA)共同作用对其防病效果的影响。采用形态学和分子生物学方法分类鉴定,确定M3菌株为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。平板试验结果表明,PHBA对M3菌株和病原菌尖镰孢菌西瓜专化型的菌落生长均具有“低浓度促进、高浓度抑制”的作用,强酸和强碱环境均不利于2种菌的生长;M3菌株和病原菌的最适生长环境pH和最适PHBA质量浓度不同,前者为6和400 mg·L^-1,后者为8和200 mg·L^-1。pH和PHBA共同作用下,M3菌株的抑菌率无显著变化。在pH 6和PHBA质量浓度400 mg·L^-1的土壤环境中,M3菌株的防病效果达到最高水平(85.72%)。总之,M3菌株的防病效果主要受土壤pH影响,其能够在PHBA积累环境中有效发挥防病作用,具有较好的生防应用潜力。     

西瓜枯萎病内生拮抗细菌YGRE24的分离鉴定及其特性研究

采用稀释涂布平板法结合平板对峙法,从表面消毒的西瓜根中筛选到一株能够高效抑制尖孢镰刀菌西瓜专化型3种生理小种的内生细菌YGRE24。菌株YGRE24对尖孢镰刀菌西瓜专化型3种生理小种的抑制率分别为54.76%、55.95%和55.24%,且其除菌后的培养液也具有明显的抑菌效果。该菌株对小麦赤霉病菌、水稻纹枯病菌等也具有很强的拮抗作用。此外,菌株YGRE24还具有溶磷、产吲哚乙酸、产铁载体的促生特性。盆栽试验表明,该菌株能够在接种病原菌的情况下促进西瓜苗的生长,使地上部分的鲜重和干重分别增加44.75%和30.32%,可以缓解病害对西瓜苗生长的影响。经形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析初步确定菌株YGRE24为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

生防菌SF1103、SF1104对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用

为探明生防菌SF1103、SF1104对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用,采用平板对峙法、菌丝混合及凹玻片孢子培养法研究其拮抗能力,采用特异平板培养法分析生防菌的产酶及次生代谢产物,并通过盆栽试验分析其对生防菌的防效。结果表明,经2株生防菌发酵液处理的病原菌的菌丝与孢子形态发生严重畸形并停止发育;2株生防菌均能分泌高活力的蛋白酶与纤维素酶,此外,SF1103具有解磷作用,SF1104能分泌嗜铁素;盆栽试验表明,使用复合菌剂处理的出苗率较对照组提高23.3%,较化学防治组提高29.4%;发病率较无防治组下降25.9%,防效达到77.8%。生防菌SF1103、SF1104对黄瓜枯萎病菌具有较强的拮抗能力,不仅能有效防治黄瓜枯萎病,并且对黄瓜的出苗生长有促进作用,有望进一步开发为生防菌剂产品。     

Inhibitory efficacy of calcium cyanamide on the pathogens of replant diseases in strawberry

Replant diseases in strawberry caused by Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum and Verticillium dahliae are serious problems for its sustainable production under continuous cropping. This research studied the inhibitory effect of calcium cyanamide on pathogenic fungi in Petri dishes and on sterilized soil. Results indicated that calcium cyanamide had an obvious inhibitory effect on three pathogens on potato dextrose agar (PDA) plates. Among them, the inhibitory effect on Rhizoctonia solani was the highest. As the concentrations of calcium cyanamide was increased from 0.1 to 10 mg/mL, the inhibition rate on mycelial growth increased from −1.43% to 100%. Inhibitory effects on Fusarium oxysporum and Verticillium dahliae also existed on Petri dishes but to a lesser extent. Similar results were also observed in sterilized soil. When the concentration of calcium cyanamide in sterilized soil was 0.1%, the inhibitory effect on Fusarium oxysporum and Verticillium dahliae was 68.46% and 54.46%, respectively. The inhibitive effect of calcium cyanamide on Fusarium oxysporum and Verticillium dahliae increased quickly as the soil moisture changed from 10% to 40% for Verticillium dahliae and from 10% to 60% for Fusarium oxysporum. This indicated that the inhibitive effect of calcium cyanamide could be influenced greatly by the moisture content in the soil.     

棉隆消毒改善发酵床垫料基质连茬栽培西瓜的效果研究

以发酵床垫料为主要原料的复合基质作为栽培基质,采用槽式栽培方式,研究连茬种植西瓜效果、种后基质理化和微生物学性状的变化特征以及棉隆消毒后旧基质连茬种植西瓜效果。结果表明：种完1茬西瓜的旧基质继续种植西瓜会出现再植障碍,整个生育期枯萎病发病率可达35%;种植西瓜对基质中尖孢镰刀菌数量影响显著,连续种植2茬西瓜后,基质中尖孢镰刀菌数量可从0升高至8.0×10³ cfu·g^-1基质;种完1茬西瓜的旧基质经棉隆消毒处理后,真菌和尖孢镰刀菌数量均显著减少,且继续种植西瓜后其产量和单果重与新配基质相比均无显著差异。     

原生质体融合提高非致病性尖镰孢FO47的生防效果

利用原生质体融合技术将非致病性尖镰孢FO47和生防放线菌SC11进行融合,通过抗药性试验和温室盆栽试验对融合菌株进行筛选,得到了3株生物防治效果有一定提高的融合菌株,其中菌株FC-10对西瓜枯萎病的防治能力较FO47提高了36.7%,菌株FC-4则在促进西瓜的生长发育方面比FO47有明显提高,另外菌株FC-3表现出了对多菌灵较高的抗药性.     

1株拮抗棉花枯、黄萎病菌的纤维素分解菌筛选

为获得具有拮抗棉花枯、黄萎病菌的棉杆促腐菌剂,进行棉杆纤维素分解菌分离及拮抗菌株的筛选,采用平板对峙法测定菌株对棉花枯、黄萎病菌菌丝生长的影响,通过生长速率法和孢子萌发法测定菌株发酵液对2种病原菌菌丝生长以及孢子萌发的影响,并对筛选得到的菌株进行鉴定。结果获得1株具有抑菌效果的棉杆纤维素分解菌SJ-3,其羧甲基纤维素酶活(CMCase)达到69.1 U/mL,滤纸酶活(FPase)达到48.5U/mL。该菌对棉花枯、黄萎病菌菌丝生长均有显著抑制,抑制率分别达到24.7%、23.1%。其发酵液具有抑菌活性,较高的发酵液浓度能增强对病原菌的抑制作用,发酵液对枯萎病菌孢子萌发的抑制作用较强,最高抑制率为21.6%,而对该病原菌菌丝生长的抑制较弱,最高抑制率仅为6.2%;发酵液对黄萎病菌的菌丝生长和孢子萌发均有较强的抑制作用,最高分别达到32.2%、21.4%。经鉴定,菌株SJ-3为普通青霉(Penicillium commune)。     

不同熏蒸处理与生物有机肥联用对西瓜枯萎病的防控效果

使用生石灰+碳铵、棉隆、辣根素3种土壤熏蒸剂和"馕播王"生物有机肥联用对5 a连作西瓜土壤进行消毒处理,比较不同处理方式对连作西瓜枯萎病的防控效果,同时分析土壤pH值与尖孢镰刀菌西瓜专化型数量之间的相关性。结果表明:不同熏蒸处理对西瓜枯萎病的防控效果差异显著,其中棉隆处理定植45 d时,枯萎病发病率最低,为25.38%,相对防效为73.14%;随着处理时间的延长,各处理土壤中尖孢镰刀菌西瓜专化型的数量逐渐降低,也以棉隆处理的土壤病菌数量最少,定植45 d时与其他处理的病原菌数量差异达到10倍数量级;土壤熏蒸处理后,pH值均有所上升,但随着枯萎病的发生,pH值又有所下降。由此得出,3种熏蒸剂对西瓜枯萎病均有一定防效,但是棉隆与生物有机肥联用的效果最优,既能减少枯萎病致病菌的数量,还能提升土壤pH值。因此,该措施可作为我国南方地区设施西瓜早春栽培枯萎病的综合防控措施之一。     

防治植物枯、黄萎病的优良放线菌株筛选

采用平板对峙法、生长速率法和组织研磨法对实验室前期获得的放线菌进行测定,以期筛选出对植物枯、黄萎病生防作用较为全面的优良放线菌株。皿内抑菌试验结果表明,菌株SC11的抑菌能力最为突出,对3种靶标菌的平均抑制率接近80%,菌株153、SE2和F46也有较好的抑菌效果,平均抑菌率均超过50%;耐药性试验结果表明,菌株153、SC11耐药性较强,菌株F46在各杀菌剂存在条件下均不能生长;盆栽试验结果表明,菌株153、SC11在不同作物上均有较强的定殖能力,对供试作物种子萌发及植株生长有明显的促进作用。经室外盆栽模拟大田试验证明,153、SC11放线菌具有较好的防病促生效果。总体来看,菌株153和SC11的生防特性较全面,抗菌、耐药、易定殖并且能够促进作物生长,具有一定的应用潜力。