产紫杉醇内生真菌XT5原生质体制备与再生

以产紫杉醇内生真菌XT5为供试菌株,研究了酶系组成、酶解时间、酶解温度、菌体培养方式、菌龄等因素对产紫杉醇内生真菌XT5原生质体制备和再生的影响。结果表明：将内生真菌XT5在PDA液体培养基中静止培养12-16h,离心收集菌体,用0．7mol／L的NaCI配制成的含有2％0纤雏素酶＋1％蜗牛酶的复合酶,32℃恒温酶解2h,原生质体制备率最高;以上述条件酶解1．5h左右,采用双层平板培养法于32℃再生,获得的原生质体再生率最高为12．4％．     

产紫杉醇内生真菌XT5原生质体制备与再生

以产紫杉醇内生真菌XT5为供试菌株, 研究了酶系组成、酶解时间、酶解温度、菌体培养方式、菌龄等因素对产紫杉醇内生真菌XT5原生质体制备和再生的影响. 结果表明: 将内生真菌XT5在PDA液体培养基中静止培养12～16 h, 离心收集菌体, 用0.7 mol/L的NaCl配制成的含有2%纤维素酶+1%蜗牛酶的复合酶, 32 ℃恒温酶解2 h, 原生质体制备率最高;以上述条件酶解1.5 h左右, 采用双层平板培养法于32 ℃再生, 获得的原生质体再生率最高为12.4%.     

1株产紫杉醇内生真菌的原生质体制备与再生

对1株产紫杉醇的内生真菌的原生质体的制备与再生进行了研究.结果表明,原生质体制备的最佳条件是1.33%纤维素酶+2.66%蜗牛酶的酶解液,酶解时间6 h,稳渗剂为0.7 mol/L NaCl,酶解温度30℃,酶解pH值6.0,原生质体产量524万个/mL,原生质体细胞再生频率为21.47%.     

禾本科内生真菌研究15:禾本科内生真菌Epichloё yangzii原生质体的制备与再生

为高效获得内生真菌Epichloё yangzii Rnj5706菌株的原生质体,分别检测酶系组合、稳渗剂、pH值、酶解温度等因子对E.yangzii原生质体制备的影响。结果表明:制备E.yangzii原生质体的优化条件为液体培养48 h的鲜菌丝在pH值6.8含0.7 mol/L NaCl的酶解液(1.5%崩溃酶、1.0%蜗牛酶、1.0%纤维素酶、2.0%溶菌酶)中32℃酶解4 h,这时的原生质体得率为39.2×105个/mL酶解液。并比较不同保存时间下的原生质体的再生比率,表明随保存时间延长,再生比率急剧下降。本研究关于E.yangzii原生质体的制备和再生方法,为内生真菌遗传操作等后续研究提供了基础。     

鸡腿菇原生质体制备与再生研究

以鸡腿菇双核菌丝为材料,利用溶壁酶制备原生质体,采用单因素试验确定最佳条件。结果表明,原生质体产量最高的条件是取菌龄为5 d的液体静置培养的菌丝体,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,在酶解温度30℃、酶浓度20 g/L、菌丝量20 g/L的条件下酶解3 h,制备的原生质体量为2.5×107个/m L。将制备的原生质体稀释并涂布于再生培养基,再生率为10.9%,研究为鸡腿菇原生质体融合及优良品种选育提供研究基础。     

平菇原生质体制备及再生培养研究

平菇菌丝原生质体的释放以菌龄４～６ｄ的幼嫩菌丝,用２％Ｌｙｗａｌｚｙｍｅ采用０．６ＭＫＣｌ为渗稳剂在ｐＨ值为５．５、温度为３５℃、酶解２～２．５ｈ生长较好,可达１０７个／ｍＬ,孢子释放原生质体在１．５％溶壁酶和１．５％纤维素酶混合作用,同样外界条件下原生质体转化率可达１００％。原生质体再生以２号培养基在０．６Ｍ甘露醇的作用下,用载片悬浮滴式再生法,再生率可达１２．３％。     

禾本科内生真菌研究15:禾本科内生真菌Epichlo(e) yangzii原生质体的制备与再生

为高效获得内生真菌Epichlo? yangzii Rnj5706菌株的原生质体,分别检测酶系组合、稳渗剂、pH值、酶解温度等因子对E.yangzii原生质体制备的影响.结果表明:制备E.yangzii原生质体的优化条件为液体培养48 h的鲜菌丝在pH值6.8含0.7 mol/L NaCl的酶解液(1.5％崩溃酶、1.0％蜗牛酶、1.0％纤维素酶、2.0％溶菌酶)中32℃酶解4h,这时的原生质体得率为39.2×105个/mL酶解液.并比较不同保存时间下的原生质体的再生比率,表明随保存时间延长,再生比率急剧下降.本研究关于E.yangzii原生质体的制备和再生方法,为内生真菌遗传操作等后续研究提供了基础.     

绿色木霉原生质体制备与再生条件的探索

研究菌丝体培养时间、酶组合、酶浓度、酶解时间、酶解温度、稳渗剂类型、再生培养方式等对绿色木霉原生质体制备及再生的影响。结果表明,绿色木霉原生质体制备的优化条件为：菌丝体培养60h,用1.5%溶菌酶＋0.5%蜗牛酶的混合酶液,在pH值6.0～6.5,30～35℃,酶解4h,以0.7mol/L甘露醇为稳渗剂,原生质体的产量可达1.68×107个/ml;原生质体再生的优化条件为：PDA为再生培养基,以0.5mol/L蔗糖为稳渗剂进行双层固体培养,原生质体的再生率为6.05%～6.12%。     

金耳原生质体制备与再生研究(英文)

[目的]对金耳原生质体制备与再生体系进行研究。[方法]采用正交试验法筛选金耳原生质体制备和再生体系中酶体系、菌龄、温度、时间、渗稳剂的最佳用法。[结果]金耳原生质体的释放方式有三种类型:酶解初期的顶端释放、侧位释放和后期的原位释放。其最佳制备条件为:液体静置培养3d的菌丝体,在1%纤维素酶+1%蜗牛酶+1%溶壁酶的混合酶液中,以0.6mol/L蔗糖为渗稳剂,36℃酶解4h,得到原生质体制备率达1.76×107个/ml;最佳再生条件为:液体静置培养5d的菌丝体,在1.5%溶壁酶的酶液中,以0.6mol/L蔗糖为渗稳剂,33℃酶解3h,得到原生质体再生率达0.22%。[结论]为金耳的原生质体融合、紫外线诱变育种、基因工程研究等提供了有益支持。     

苹果腐烂病菌原生质体制备与再生条件优化

大量高质量且能再生的原生质体是真菌遗传转化、基因修饰的重要保证。本试验选用苹果腐烂病菌强致病力菌株SDAU11-175,从酶种类、菌丝年龄、酶解时间、渗透压稳定剂及再生培养基五个方面对原生质体制备及再生条件进行了优化。结果显示:获得苹果腐烂病菌原生质体最大产量的条件是菌丝年龄54 h、3%崩溃酶和3%裂解酶组合、0.7 mol/L NaCl作为渗透压稳定剂、28℃酶解3 h,所得原生质体在YPS培养基上再生效果最好,再生率可达42.21%。     

蛹虫草原生质体的制备和再生研究

研究了不同渗透压稳定剂、酶的种类及浓度、温度、pH、β-巯基乙醇预处理等条件对蛹虫草原生质体制备的影响,以及不同培养基对原生质体再生的影响。结果显示蛹虫草菌株原生质体的最佳制备和再生条件为:0.7 mol/L氯化钠作为渗透压稳定剂,纤维素酶5 mg/dL、蜗牛酶5 mg/dL、溶菌酶5 mg/dL、溶壁酶10μL混合酶解6 h,酶解温度为30℃,最佳pH 5,再生培养基为PDA(添加0.7 mol/L氯化钠)。     

灵芝原生质体的高效制备及诱变

[目的]探讨灵芝原生质体的高效制备及诱变方法。[方法]用2.5%溶壁酶、0.5%蜗牛酶和0.5%纤维素酶组成的复合酶液裂解适龄灵芝菌丝体,制备原生质体,统计其再生频率,并用制备出的原生质体进行诱变试验。[结果]采用该制备方法获得了高质量的原生质体,其再生率能稳定达到80%以上,且经复合诱变后发生基因突变的频率也较高。[结论]该研究为后续的灵芝诱变选育奠定了基础。     

1株降酚菌的原生质体制备和再生研究

为了优化组合降酚菌原生质体制备与再生的条件。以从合肥钢厂焦化废水处理池的活性污泥中驯化筛选得到1株高效降酚假单胞菌为材料,通过正交实验,探讨蔗糖浓度、溶菌酶浓度E、DTA浓度和酶解时间对该菌原生质体制备与再生的影响。原生质体制备与再生的最优条件:蔗糖浓度20%,溶菌酶浓度0.5 mg/ml,EDTA浓度0.2%,酶解时间40 min。在此条件下,它的菌株形成率为75.3%,再生率为7.8%。影响降酚假单胞菌原生质体形成率的因素顺序为蔗糖浓度>溶菌酶浓度>作用时间>EDTA浓度。     

酿酒酵母原生质体形成和再生的研究

用正交实验分析了影响酿酒酵母原生质体形成和再生的原因,发现主要是稳定剂种类和酶浓度,在本实验系统中以１７％稳定剂,１％蜗牛酶３０℃作用６０ｍｉｎ为最佳实验条件。     

禾本科植物内生真菌研究3:产生子座而无有性孢子的Neotyphodium属内生真菌-拂子茅属植物新共生体

2006年5月在南京市南郊发现了着生内生真菌子座的禾本科植物。子座长47.5~165.0mm,白色,包裹其宿主植物的旗叶叶鞘;于4月下旬形成,7月中旬完全崩溃;在自然条件下、人工交配试验中,子座上均未形成有性生殖结构。宿主植物直立,高90~120cm,有丰富的根状茎;连续2个花期均无抽穗。根据植物外部特征、叶表皮微形态特征以及rDNA-ITS序列的分析结果,将这种不抽穗的禾本科植物鉴定为拂子茅属植物(Calamagrostis sp.)。从29株着生子座的植株和87株不着生子座的植株中全部检出了内生真菌,从中分离得到了20个菌株。根据分生孢子、分生孢子梗的形态特征,分离菌株被鉴定为Neotyphodium属内生真菌。宿主植物的特殊性和菌株的子座形成能力显示了这是一个禾本科植物-内生真菌的新组合。这个组合是产生子座而不形成有性世代的第3例,并且这3例组合的宿主都是翦股颖族植物。     

冬虫夏草无性型原生质体再生条件研究

[目的]优化冬虫夏草原生质体再生条件。[方法]考察纤维素酶浓度、蜗牛酶浓度、两者混合体积配比、酶解温度、酶解时间、菌龄、稳定剂及培养基等条件对冬虫夏草无性型原生质体再生率的影响。[结果]冬虫夏草无性型原生质体再生的最佳条件为：纤维素酶浓度0．5％,蜗牛酶浓度0．5％,纤维素酶与蜗牛酶体积比1：1,酶解温度35℃,酶解时间1．5h,菌龄6d,甘露醇0．5mol,③号再生培养基（蔗糖10g,葡萄糖4g,酵母粉4g,甘露醇0．5mol,pH值6．2,琼脂18g,水加至1000ml）,在该最佳条件下原生质体再生率为0．43％。[结论]优化的冬虫夏草无性型原生质体再生条件简便、合理、可行。