α-干扰素在猪流感病毒感染急性期的作用

细胞因子,尤其是α-干扰素（IFN-α）在控制流感病毒感染过程中发挥着重要作用。为了研究IFN-α在流感过程中的作用,给感染流感病毒的模型动物猪接种IFN-α中和单克隆抗体（Abs）K9。首先确定了IFN-α中和Abs的最佳接种剂量与接种途径,据此研究Abs对猪流感病毒感染的效果。     

α-干扰素在猪流感病毒感染急性期的作用

细胞因子,尤其是α-干扰素（IFN-α）在控制流感病毒感染过程中发挥着重要作用。为了研究IFN-α在流感过程中的作用,给感染流感病毒的模型动物猪接种IFN-α中和单克隆抗体（Abs）K9。首先确定了IFN-α中和Abs的最佳接种剂量与接种途径,据此研究Abs对猪流感病毒感染的效果。给猪气管内接种半数鸡胚感染量为106的H1N1流感病毒,接种18 h后,分别给试验猪气管内和腹膜内注射高剂量的IFN-α中和Abs和对照Abs。试验猪分别于接种后0、24、30、487、2 h安乐死。在接种后24和30 h,接种K9猪的气管-肺泡灌洗液中IFN-α明显减少,并伴随IL-6和IL-12的减少,而对照抗体处理组TNF-α和IL-1的水平未受影响。最重要的是,IFN-α中和单克隆抗体处理组动物出现临床症状推迟了24 h,同时伴随IFN-α的减少,但是并没有对病毒的复制及肺脏的病变产生明显的影响。试验结果表明,IFN-α对IL-6和IL-12有诱导作用,3种细胞因子在抗猪流感中起重要作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M/GP5糖蛋白复合物以唾液酸依赖方式与Sn受体结合

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是世界范围内威胁猪健康的主要病原之一,其所引起的病毒病也是当今养猪业最重要的猪病。在过去研究多集中在病毒侵入宿主细胞必须识别的许多病毒受体和侵入介质,但病毒作用物的分子机制仍不清楚,以致难以研制出有效的疫苗。本研究的主要目的是鉴定sialoadhesin(Sn)受体作用的主要病毒作用物,Sn受体是巨噬细胞上PRRSV的主要受体。为此本试验构建了可溶性Sn,其能通过唾液酸依赖途径与PRRSV结合,从而中和巨噬细胞感染的PRRSV,因此Sn是巨噬细胞上重要的PRRSV受体。虽然唾液酸作用于GP3、GP4和GP5整个糖蛋白,但只有PRRSVM/GP5糖蛋白复合物才能作为Sn的配体。试验证明了Sn具有唾液酸结合力及GP5存在唾液酸,该研究结果不仅有助于更好的了解PRRSV的生物特性,更能为研究新的PRRSV疫苗提供了主要思路。     

α-干扰素在猪流感病毒感染期间的作用

细胞因子,尤其是α-干扰素对控制流感病毒感染起重要作用。为了研究α-干扰素对控制流感的作用,用猪α-干扰素中和单克隆抗体K9来建立猪流感病毒感染模型。首先,确定α-干扰素中和单克隆抗体最佳剂量和给药途径,基于上述结果来研究单克隆抗体对猪流感病毒感染的作用。猪气管内接种106.0EID50A/Swine/Belgium/1/98(H1N1)病毒,接毒后18h,气管内和腹腔内注射高剂量α-干扰素中和单克隆抗体和对照抗体,分别于接种后0、24、30、48、72h对动物实施安乐死。在24、30h注射单克隆抗体K9的动物支气管肺泡灌洗液中α-干扰素水平被明显抑制,这与IL-6、IL-12水平降低一致。对照单克隆抗体处理组中α-干扰素和IL-1水平未受影响。重要的是α-干扰素中和单克隆抗体处理的动物临床症状出现和高峰要延迟24h,同时伴随α-干扰素的抑制,但对病毒复制和肺部病变无明显的作用。结果表明,在流感病毒症状中,α-干扰素对IL-6、IL-12诱导及3种细胞因子起重要作用。     

鸭α-干扰素在昆虫细胞中的表达

干扰素（Interferon，IFN）是活细胞在病毒或其他干扰素诱生剂作用下产生的一种糖蛋白，当它进入未感染的细胞时，可诱导该细胞产生抗病毒蛋白质，从而抑制其他病毒在该细胞中的复制。干扰素具有抗病毒、抗肿瘤和调节免疫功能作用。无论哺乳类还是禽类，干扰素都有两大类型，即Ⅰ型（主要是α和β）和Ⅱ型（γ）干扰素。其中α干扰素（IFN-α）由白细胞产生。Ⅰ型于扰素的抗病毒作用最强，主要是通过旁分泌发挥作用。     

重组鸡α-干扰素对新城疫病毒复制的影响

毕赤酵母表达鸡α-干扰素经纯化后,以50000U、5000U和500U分别与200ELD50新城疫病毒疫苗株LaSota和中等毒力Q株等量混合,接种9～10日龄SPF鸡胚,记录鸡胚死亡情况并测定尿囊液HA效价,结果表明,高浓度重组干扰素可使病毒致死鸡胚时间延长,并使Q株在尿囊液中的HA效价下降2～3个滴度。     

鸡α-干扰素研究进展

自人类发现干扰素以来,研究者对于人类、哺乳动物及啮齿类动物干扰素进行了大量研究,取得了突破性进展。但是,以鸡干扰素为代表的禽类干扰素研究相对滞后。本文对鸡α-干扰素的结构、鸡α-干扰素的抗病毒作用以及基因工程鸡α-干扰素的应用等方面对鸡α-干扰素的研究现状作一综述。     

重组奶牛干扰素-α基因的原核表达

从健康奶牛的血液中分离白细胞，用刺激物诱导白细胞产生干扰素，采用RT—PCR扩增干扰素-α基因，构建原核表达载体pQE30-IFNα，用IPTG诱导表达。得到重组的奶牛成熟干扰素-α基因全长498bp，构建的原核表达载体诱导6h后表达量较高，表达产物的分子量约为20kD，从而获得了表达奶牛干扰素-α的基因工程菌株。     

重组牛α-干扰素的原核表达与纯化

为在大肠杆菌表达系统中高效表达牛α-干扰素(bovine interferon-α,Bo IFN-α),将经密码子优化后的牛α-干扰素成熟蛋白基因合成并克隆到表达载体p Cold II中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,获得可溶性的表达蛋白。对重组菌表达条件进行优化,结果显示在IPTG浓度为0.64 mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为9 h的条件下,可溶性目的蛋白的表达量最高。重组蛋白经镍柱纯化后的纯度为99.2%,表达量为36 mg/L菌液。重组蛋白在MDBK细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1×106U/mg。     

猪α-干扰素表达系统及其应用的研究进展

就猪α-干扰素的分子特征、生物学特性、表达系统和猪基因工程α-干扰素的应用进行综述,以期为猪α-干扰素在广谱抗病毒活性、抗肿瘤以及免疫调节的临床应用提供参考。     

鸡α-干扰素基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR方法,从ConA诱导的鸡淋巴细胞中扩增出鸡α-干扰素基因,经同源性比较,发现家禽α-干扰素核苷酸序列之间同源性较高,而与哺乳动物的同源性较低,说明家禽α-干扰素的生物学功能与哺乳动物可能存在一定差异。     

S VA及α-干扰素对P K-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15 (PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αm RNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞mi RNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异mi RNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mird...     

口服重组鸡α-干扰素对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响

通过点眼、滴鼻的方式使SPF鸡感染新城疫La Sota株,感染8 h后在饮水中添加1000 U/mL重组鸡α-干扰素,每只鸡每天饮用干扰素剂量为20000 U,分别饮用不同时间。于感染后第7天采集气管组织,制备病理切片。结果显示,连续3 d以上饮用重组鸡α-干扰素的试验鸡,其气管的病理损伤可得到明显改善;检测饮用重组鸡α-干扰素后试验鸡的新城疫抗体效价,结果表明口服高剂量的干扰素可明显下调新城疫抗体的滴度。     

重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究

为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID₅₀,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×2¹⁰ U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。     

狮头鹅α-干扰素基因的克隆与遗传分析

从狮头鹅外周血细胞中提取基因组DNA,采用巢式PCR方法扩增α-干扰素基因片段（d-Go-IFN-α）;同时从新城疫病毒（NDV）刺激培养外周血淋巴细胞提取总RNA,用RT-PCR方法扩增α-干扰素基因片段（m-Go-IFN-α）,将上述扩增片段分别克隆到pGEM-T载体并进行序列测定。结果表明,α-干扰素基因全长均为576 bp,编码192个氨基酸,比较d-Go-IFN-α和m-Go-IFN-α的核苷酸序列,可见155位核苷酸由A突变为G,相应地52位氨基酸由M突变为R,提示狮头鹅α-干扰素基因存在单链核苷酸多态性;狮头鹅与其它家禽品种α-干扰素基因的核苷酸序列同源性介于41.2%~98.3%之间,其推导的氨基酸序列同源性为13.0％～96.4％,不同鹅品种的α-干扰素具有极为相似的二级结构。     

浅谈猪流感的预防与控制

猪流行性感冒是由猪流感病毒引起的,晚秋、早春以及冬季多发的病毒性疾病。本文通过临床病例,从猪流感病原学、流行病学、临床症状、剖检变化、诊断、预防及治疗方法方面做了简单介绍。     

猪流感的发生与防控

介绍了猪流感的病原、流行病学特点、发病机制、病理变化、临床诊断及预防,提出了应对猪流感的防控措施.     

猪流感的发生与防控

介绍了猪流感的病原、流行病学特点、发病机制、病理变化、临床诊断及预防，提出了应对猪流感的防控措施。     

干扰素-τ及其在反刍动物中抗黄体溶解作用

干扰素-τ是一个在反刍动物妊娠建立过程中起着关键性作用的细胞因子,属于Ⅰ型干扰素家族。在围植入期由胚胎滋养层单核细胞合成分泌,主要作用于子宫内膜,抑制溶黄体素PGF2α的合成分泌,起到抗黄体溶解作用,保证妊娠的建立。导致牛胚胎早期死亡的一个重要原因是抗黄体溶解机制失调,因此干扰素-τ被认为是一个能有效提高妊娠率的可操控靶细胞因子。     

奶牛α-干扰素克隆表达和生物学活性分析

提取经植物血凝素诱导培养的我国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α-干扰素(BoIFN-α)成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为牛α-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达,表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛α-干扰素对VSV的抗病毒活性为4.26×105U/mL,对IBRV的抗病毒活性为8.91×104U/mL。结果表明,重组奶牛α-干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定。