抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的特性研究

应用杂交瘤技术获得了１３ 株抗传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 的单克隆抗体（ ＭｃＡｂ） ,经过检测其中有９ 株ＭｃＡｂｓ 为ＩｇＧ 类, ４ 株为Ｉｇ Ｍ , 这些ＭｃＡｂｓ 与新城疫病毒（ＮＤＶ） 、传染性支气管炎病毒 （ＩＢＶ） 和马立克氏病病毒（ ＭＤＶ） 均无交叉反应, 病毒中和试验表明, 有５株ＭｃＡｂｓ 具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔｔｉｎｇ 试验表明, 这５ 株有中和活性的ＭｃＡｂｓ 识别的抗原位点在ＶＰ２ 。传染性法氏囊病最早于１９５７ 年发现于美国东部特拉华州的甘博罗（Ｇｕ ｍ ｂｏｒｏ） 地区,１９６２ 年由Ｃｏｓｇｒｏｖｅ 首次报道, 此后该病相继在全世界许多国家和地区广泛流行。本试验对通过淋巴细胞杂交瘤获得的１３ 株单克隆抗体进行了生物学特性鉴定, 以期应用于对ＩＢＤ 的研究, 现将试验情况报告如下。     

鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的研究

用纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＣＡ毒株和Ｂ８７株混合抗原脾内免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,采用间接ＥＬＩＳＡ方法进行筛选,共检出３１个原始阳性孔,阳性率为１５．４％,选择其中３个孔,分别进行３次克隆,最后获得３株杂交瘤细胞,命名为Ｂ２８、Ｂ３４、Ｃ２８。通过与其它禽源病毒的交叉试验证明,分泌的抗体均具有高度特异性。３株细胞的平均染色体数分别为９４、８７、８９     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用

鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化；电镜观察，以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６，９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞，特异性试验表明经闪与鸡的传染性支气管炎，痘病毒，新城疫病毒马立克氏病病毒，白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得三株单抗建立单     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的研究 Ⅱ．AC─ELISA方法的建立

将所制备的腹水单抗ＡＢ７、ＢＧ９经硫酸铁盐析、透析，再经ＤＥＡＥ－纤维素柱层析纯化后，采用戊二醛二步法用辣根过氧化物酶标记单抗，建立了用于鉴别传染性法氏囊病病毒抗原型的ＡＣ－ＥＬＩＳＡ方法，并对国内的６个分离株及美国变异株１０８４Ａ进行了检测，结果表明，上述国内分离株均含有ＣＪ８０１株相一致的ＡＢ７、ＢＧ９位点，而１０８４Ａ株缺失ＡＢ７位点。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

应用杂交瘤技术获得了１３株抗传染性法氏囊病病毒的单克隆抗体,其中有９株ＭｃＡｂｓ为ＩｇＧ类,４株为ＩｇＭ类,这些ＭｃＡｂｓ与新城疫病毒,传染性支气管炎病毒和马立克氏病病均无交驻反应病毒中和试验表明,有５株ＭｃＡｂｓ具有中和活性,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｉｏｔｔｉｎｇ试验表明,这５株有中和性的ＭｃＡｂｓ识别的抗原位在ＶＰ２上。     

鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体研究成功

鸡传染性法氏囊病(即腔上囊病)是当前国内外主要的鸡传染病之一,以雏鸡发生为主,死亡率达15——30％,严重影响养禽业的发展。对此病目前尚无快速灵敏的监测方法及有效的防治措施。上海农学院第一生物研究室陆苹副研究员,研究成功的鸡法氏囊病病毒单抗,经试验测定,证明该单抗特性好,在一定条件下,其性能和效价稳定,实际应用于鸡法氏囊     

抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及其特性的研究

本实验将鸡传染性支气管炎病毒（澳大利亚Ｔ株）进行纯化，制成抗原，应用杂交瘤技术建立了５株分泌抗鸡传染性支气管炎病毒的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白的亚类分别属于ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＭ。杂交瘤细胞分泌抗体的能力稳定，长期传代对其抗体分泌能力没有影响。５株单克隆抗体与其它１２株鸡传染性支气管炎病毒标准株之间存在不同程度的交叉反应，但对鸡新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、产蛋下降综合征病毒及禽流感病毒均无交叉反应。用此杂交瘤细胞制备腹水的ＥＬＩＳＡ效价为１０－６～１０－７，抗体对热的稳定性有一定的差别。抗体纯化后，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳表明具有单克隆抗体的特征，经快速蛋白分析鉴定其纯度为８９．４９％。竞争ＥＬＩＳＡ法证明其中４株的单抗与抗原结合位点并不完全相同。采用单抗夹心ＥＬＩＳＡ法，对抗原的检测方法进行了初步探索。     

鸡传染性法氏囊病病毒SD株毒力测定

从一个免疫失败鸡场中分离到一株鸡传染性法氏囊病病毒野毒株,命名为SD株.经血清学试验、鸡胚接种、病毒形态观察等证实了分离物为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV).测定病毒效价ELD50达到10-6.5/0.2 mL;动物回归试验表明,该SD株接种4周龄鸡后引起鸡群发病率为100%,病死率达85%,剖检可见法氏囊呈"紫葡萄样...     

外源病毒检验用抗鸡传染性法氏囊病病毒特异性血清的制备与检定

为制备外源病毒检验用抗鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)的特异性血清,对300只3~4周龄的SPF鸡进行了基础免疫和加强免疫。最后一次免疫后21d采血并分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,对其进行了无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定和特异性检验。结果表明,本研究制备的抗IBDV特异性血清无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定均符合《中华人民共和国兽药典》三部(二〇一〇年版)规定;血清中和效价为1:5747,与IBDV B87株毒种中和指数为104.3,与鸡新城疫病毒La Sota株、鸡传染性支气管炎病毒H120株、鸡传染性支气管炎病毒H52株、鸡传染性喉气管炎病毒、鸡痘病毒、禽呼肠孤病毒S1133株的中和指数均不大于10,通过AGP、ELISA、HI等试验确定血清中不含其他禽源外源病毒抗体。本研究为鸡传染性法氏囊病活疫苗或毒种的外源病毒检验提供了具有良好特异性和高效价的中和用血清。     

INTERACTION BETWEEN INFECTIOUS BURSAL DISEASE VIRUS AND NEWCASTLE DISEASE VIRUS IN CHICKENS

The Australian strain of infectious bursal disease virus (IBDV), 002/73, affected the response of chickens to Newcastle disease virus (NDV). The titre of serum antibodies to NDV in chickens infected with IBDV was significantly lower than that of birds infected with NDV alone. It also appeared that IBDV affected NDV excretion from chickens as NDV was more frequently isolated from chickens infected with IBDV, IBDV infection did not alter the pathogenicity of NDV in chickens. This Australian strain of IBDV therefore appeared to be immunodepressive in one-day-old chickens.     

三株鸡传染性法氏囊病毒弱毒株的分离与分子鉴定

本试验在江苏省鸡场分离获得3株鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）,采用RT—PCR法扩增VP2基因,将产物克隆入pMD18T载体,经测序,并与IBDV代表株VP2基因的高变区序列进行分析比较。结果显示,3个分离株与超强毒株、强毒株、突变株及弱毒株的核苷酸同源性在89．5％～98．9％之间,与弱毒株Cu-1和疫苗株PBG-98同源性最高,为98．9％;推导出的氨基酸序列与代表性毒株的同源性在98．2％～99．5％之间。其中,七肽区的第三个丝氨酸残基突变为精氨酸或苏氨酸,279和284位氨基酸残基突变为天冬氨酸和苏氨酸,222、294和299位氨基酸残基分别突变为脯氨酸、亮氨酸和天冬氨酸。上述试验表明3株分离株均为临床弱毒株。     

人工感染IBDV鸡法氏囊的电镜研究

通过透射电镜系统观察了人工感染传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）后鸡法氏囊各类细胞的病理变化。感染后１２￣２４ｈ,病毒粒子主要见于髓质淋巴细胞中,细胞中可见到大量纤维样病毒发生基质及无囊膜包围的大型病毒晶格,细胞核染色质浓缩,核中出现纤维样结构。感染后３６ｈ,淋巴细胞开始大量裂解死亡。无囊膜包围的病毒晶格也出现于髓质网状细胞中,被感染的网状细胞并不裂解,而表现出细胞凋亡的特征：染色质固缩呈颗粒块状,胞     

应用Dot－ELISA快速检测传染性法氏囊病病毒

本文成功建立了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），应用于传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）的快速检测。该方法操作简便快速、特异性好、灵敏度高。同时对深圳某鸡场发生ＩＢＤ病料进行了病毒分离，用Ｄｏｒ－ＥＬＩＳＡ检测接种鸡胚的绒毛尿囊膜裂解上清呈强阳性反应。     

应用Dot－ELISA快速检测传染性法氏囊病病毒

本文成功建立了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），应用于传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）的快速检测。该方法操作简便快速、特异性好、灵敏度高。同时对深圳某鸡场发生ＩＢＤ病料进行了病毒分离，用Ｄｏｒ－ＥＬＩＳＡ检测接种鸡胚的绒毛尿囊膜裂解上清呈强阳性反应。     

传染性法氏囊病病毒强毒株HB／11的分离与鉴定

2011年8月,从河南省疑似传染性法氏囊病鸡群采集病料,通过鸡胚接种、琼脂扩散试验和RT-PCR等方法,证实分离的病毒为传染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV）,命名为HB／11株。序列分析表明,HB／11株VP2基因的核苷酸序列与GenBank中发表的部分国内外IBDV超强毒株VP2基因序列相似性在99％左右;HB／11株VP2高变区基因含有七肽基序为SWSASGS,在222、253、256、279、284、294和299位上的氨基酸残基分别是A、Q、I、D、A、I和S,具有IBDV强毒的分子特征。动物回归试验表明,30日龄鸡群接种该毒株后引起鸡群发病率为100％,死亡率为70％,剖检可见鸡传染性法氏囊病典型病变。因此该病毒为IBDV强毒株。     

雏鸡感染传染性法氏囊病病毒时血细胞动态变化

研究了感染ＩＢＤＶ免疫和未免疫３０～５９日龄ＡＡ雏鸡的外周血细胞动态变化。结果表明：ＩＢＤＶ对红细胞数（ＲＢＣ）影响各组差异不显著,均随日龄增长呈上升趋势;从以ＩＢＤＶ攻毒前１ｄ到攻毒后的头５ｄ,３组鸡的白细胞数（ＷＢＣ）均呈上升趋势,未免疫未攻毒鸡（Ｃ组）随后下降,而未免疫攻毒鸡（Ａ组）和免疫攻毒鸡（Ｂ组）则持续上升至攻毒后第７ｄ,然后下降;Ａ组在ＩＢＤＶ攻毒后,白细胞分类计数（ＤＣ）中的单核细胞和异嗜性粒细胞急剧增加,淋巴细胞第１ｄ虽有减少但随后上升,嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞第７ｄ出现峰值,以后下降。方差分析显示,Ａ组ＷＢＣ和ＤＣ均高于或显著高于Ｂ组和Ｃ组,Ｂ、Ｃ两组比较,差异不明显。     

PATHOGENICITY AND IMMUNOSUPPRESSIVE PROPERTIES OF INFECTIOUS BURSAL DISEASE VIRUS FIELD ISOLATES AND COMMERCIAL VACCINES IN INDIA

The pathogenicity and immunosuppressive properties of two field isolates of infectious bursal disease virus (IBDV) and five commercial IBDV live virus vaccines marketed in India were evaluated in this study. The pathogenicity of the wild type viruses and vaccines were based on mortality, the bursa:body weight ratio and microscopic lesions in the bursa in 3-week-old chicks that received these viruses. The immunosuppressive effects of these viruses were evaluated by measuring the antibody responses to sheep red blood cells, Brucella abortus plain antigen and Newcastle disease virus (NDV) vaccine in one-day-old chicks. One field isolate (N35/93) was found to be more pathogenic and immunosuppressive than the other (N45/92) while none of the commercial mild Lukert type vaccines were found to be pathogenic. One of the vaccine strains marked as Mild Lukert type was highly immunosuppressive; one was moderate and one could be classified as mild. Both the intermediate vaccines tested were highly immunosuppressive.     

传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定

从中国广东省发生传染性法氏囊病的鸡场分离了8株传染性囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,运用RT-PCR对分离毒株进行了鉴定,测定了8个分离株的ELD50以及其对SPF鸡的致死率。结果表明:这8株分离毒对SPF鸡的致死率均等于或超过60%,属于超强毒。运用RT-PCR方法对分离毒株进行了鉴定并对各毒株VP2基因高变区进行扩增测序,分析结果表明:这8株分离株均为IBDV超强毒株,同时也说明当前在广东省引起鸡传染性法氏囊病的主要毒株类型多为超强毒IBDV。