灰葡萄孢BC4菌株抑菌活性成分分离及对小麦纹枯菌的作用

首先探索了利用薄层色谱分离灰葡萄孢(Botrytis cinerea)BC4菌株抑菌活性代谢产物的溶剂系统,在此基础上分离得到了该菌4个代谢产物组分;然后以小麦纹枯菌为生物测定对象,观察了这4个组分对小麦纹枯菌菌丝生长的抑制活性;同时利用显微技术进一步观察了抑菌活性组分对小麦纹枯菌菌丝生长的影响部位。结果表明:在4种不同的薄层色谱溶剂系统中,石油醚+乙酸乙酯+甲酸(5∶4∶1)为分离灰葡萄孢BC4菌株抑菌活性代谢产物的较好展开剂。对利用该溶剂系统分离得到的4个代谢产物组分进行生物活性测定的结果表明,2个组分具有生物活性,其中组分4对小麦纹枯病菌有明显的抑制生长作用,相反组分2对其生长却有促进作用,组分1和3对该病菌没有作用。利用光学显微镜观察发现,接触组分4的小麦纹枯病菌菌丝顶端外部有深色液滴,对照则没有这种现象。利用扫描电镜观察的结果表明,接触组分4的菌丝与对照明显不同,菌丝停止向前延伸生长,分支增多,菌丝体出现不规则的膨大与缢缩,有些菌丝体新生部分变薄、模糊,有熔化迹象;有些与其它菌丝体粘合或融合在一起。表明灰葡萄孢BC4菌株代谢的抑菌活性成分对小麦纹枯菌的菌丝体体壁的形成具有严重阻碍作用,与三唑酮具有相似的作用特点。     

灰葡萄孢BC7-3菌株固体发酵条件的优化

 【目的】探讨灰葡萄孢BC7-3菌株固体发酵的基本条件以提高其除草活性物质的产量。【方法】通过正交试验设计确定最优化的培养基组合,并结合生长抑制法测定外加碳源、氮源等因素对除草活性物质产生的影响,以确定最佳的发酵条件。【结果】确定了小米5 g、高粱5 g、麦麸5 g、玉米秸秆2.5 g为最佳复合培养基质;明确了该菌株在加入1%硝酸铵、1%蔗糖的培养基中,20℃黑暗条件下,接种量8%、含水量80%、静置培养15 d,得到的除草活性物质活性最强。【结论】固体发酵适合于灰葡萄孢代谢产物中除草活性物质的产生。     

灰葡萄孢培养滤液中除草活性代谢产物培养条件的优化研究

以灰葡萄孢培养滤液对反枝苋种子根芽生长的抑制率为活性指标,测定了培养滤液的除草活性,并探索了不同碳源和培养条件对培养滤液除草活性的影响。结果表明,蔗糖+葡萄糖(质量比3∶2)是较好的碳源组成;光照条件和温度是灰葡萄孢培养滤液除草活性的主效因素,在25℃和避光条件下培养得到的培养滤液活性最高;在培养液中添加8g/L乙酸钠可使培养滤液除草活性达到91.2%。     

灰葡萄孢产孢和孢子萌发条件

以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌株B05.10为试验材料,研究了培养基、温度、pH值以及某些营养因子对菌丝生长、产孢量和孢子萌发率的影响.结果表明,B05.10菌株在PSA培养基、pH 6.0,22℃培养7 d时产孢量最多达到1500×104 cfu/皿;在1水琼脂、pH 5.0,22℃条件下4 h时灰葡萄孢孢子开始出现萌发管,12 h时萌发管转变形成分枝的菌丝,添加木糖、果糖和可溶性淀粉等营养因子对提高孢子萌发率也有明显促进作用.     

灰葡萄孢BC4菌株产生天然脱落酸的研究

用柱层析和制备HPLC法从灰葡萄孢BC4菌株的PD培养滤液中分离到一种白色固体。经HPLC-ESIMS,GC-MS,IR和1HNMR鉴定为脱落酸。生物活性测定结果表明,该脱落酸的活性是标准脱落酸的2.5倍以上;用0.7μmol/L该物质的丙酮溶液处理反枝苋催芽种子,2d内反枝苋种子幼芽和幼根均无生长,而对照的反枝苋种子幼芽和幼根总长度平均为2.3cm,抑制率达100%。     

拮抗细菌R26发酵滤液对灰葡萄孢菌的抑菌活性研究

在离体条件下,测定了拮抗细菌R26对灰葡萄孢菌的抑制作用,结果表明,R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌丝生长,EC50值为10.63μL/mL;经R26发酵滤液(40μL/mL)处理后,灰葡萄孢菌体形态发生明显变化;R26发酵滤液能抑制灰葡萄孢菌孢子萌发,并能抑制芽管伸长,当浓度达80μL/mL时,对灰葡萄孢菌产孢量的抑制率达57.51%。     

与灰葡萄孢致病性相关的真菌毒素及胞外酶

植物病原菌灰葡萄孢引发的灰霉病能侵染大部分经济作物和观赏植物,是一种严重的植物病害。灰葡萄孢侵染植物使植物细胞死亡是一个复杂的过程,这个过程涉及了多种真菌毒素,胞外酶和其它小分子物质。概述与灰葡萄孢致病性相关的主要真菌毒素和胞外酶,并讨论他们作用机理,旨在为研究靶标性的抗灰霉真菌剂提供参考。     

拟南芥AtBT4对灰葡萄孢的抗性机制分析

【目的】揭示AtBT4在拟南芥抗灰葡萄孢中与SA、JA信号途经的相互关系。【方法】利用RT-PCR技术,检测用SA、SA类似物BTH、JA、ACC及灰葡萄孢处理拟南芥野生型Col-0后其AtBT4的表达情况;检测经SA和JA处理后拟南芥SA、JA途径相关突变体AtBT4的表达情况;并检测接种灰葡萄孢后拟南芥野生型Col-0、bt4突变体和回复突变体抗病相关基因的表达情况。【结果】JA处理和接种灰葡萄孢后,拟南芥野生型Col-0中AtBT4的表达明显增强。但经JA处理后,JA不敏感突变体jar1的AtBT4表达变化趋势与野生型明显不同,AtBT4的表达水平不受JA诱导。SA信号途径相关突变体eds5、sid2和npr1中AtBT4的表达明显低于野生型,但变化趋势与野生型基本一致。bt4突变体中抗病相关基因PR1、PR4、PDF1.2和BIK1的表达明显低于野生型和回复突变体。【结论】AtBT4的表达受JA和灰葡萄孢的诱导,AtBT4突变影响抗病相关基因PR1、PR4、PDF1.2和BIK1的表达,AtBT4可能通过SA、JA信号途径影响拟南芥对灰葡萄孢的抗性。     

灰葡萄孢分生孢子萌发的条件研究

灰葡萄孢分生孢子萌发的最适温度为 1 9℃ ,萌发率达 94 .3 %;在空气较多的环境中孢子萌发率较高 ,达87.8%,淹水则不利于孢子萌发 ,萌发率仅为 5.8%。 1 %蔗糖、1 %葡萄糖、1 %乳糖、1 %硫酸铵、0 .2 mol/ L磷酸二氢钾、番茄汁液都可以促进分生孢子萌发 ,以 1 %蔗糖效果最好。分生孢子在 p H3～ 9的条件下均可萌发 ,以 p H5最为适宜。孢子悬浮液在高浓度 ( 6× 1 0 5以上 )下会抑制孢子萌发 ,光照和黑暗处理对孢子的萌发影响不大     

重寄生放线菌F46和PR对灰葡萄孢的抑制作用

测定了2株重寄生放线菌对灰葡萄孢的作用效果。结果表明,重寄生放线菌F46(Streptomycessp.)和PR(Streptomycessp.)对灰葡萄孢分生孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用,镜检可以观察到F46和PR在灰葡萄孢菌丝上产生附着胞、缠绕靶标菌丝,使靶标菌丝畸形等现象;诱发接种后2株重寄生放线菌对苹果、草莓、番茄采后灰霉病均有不同程度的控制作用,在低温下的防效优于高温,提前诱发接种的防效优于同时接种。     

山西省灰霉菌对啶酰菌胺的敏感性测定

啶酰菌胺是一种较新的用于防治灰霉菌的杀菌剂,国内鲜有灰霉菌对该杀菌剂的抗性报道。为了明确山西省灰霉菌对啶酰菌胺敏感性情况,通过菌落直径法测定了山西省8个地区139株灰霉菌对该杀菌剂的敏感性。结果表明,所采菌株中137株为相对敏感菌株,2株表现为低抗,敏感菌株占98%以上,说明山西省灰霉菌对啶酰菌胺具有较高的敏感性,但啶酰菌胺具有中度抗性风险,且灰霉菌极易产生抗药性,故有必要做好抗性预防工作。     

木霉菌和灰霉菌相互作用关系的初步研究

对灰霉菌(Botrytis cinerea)和木霉菌BTW41(Trichoderma atroviride)之间相互关系作了初步研究。研究发现木霉菌具有较强的营养竞争能力,BTW41与灰霉菌的对峙菌落接触处,可见灰霉菌菌丝被木霉菌菌丝大量寄生,受到严重破坏,并且灰霉菌菌丝有消解现象。不同木霉菌株对番茄灰霉病的防效不同,BTW41的防效能够达到60.99%。施入叶片上的生防木霉菌孢子应达到一定浓度才会有效地定殖,进而起生防作用,灰霉菌对木霉菌在番茄叶片上定殖有影响。从以往所做的试验来看,木霉菌孢子浓度在108个孢子/mL以上时,对灰霉病的防效较好。     

小麦辣椒玉米套种的效应与栽培技术初报

陕西利用生物学互助的原理,研究成功麦、辣、玉三作物按4～5:2:0.5的行数比梯阶套种模式,既构建成功复合群体良好生育环境,又增收粮食4900～5200kg/hm2,辣椒干750kg/hm2,节约防病虫投入900～1200元/hm2,同时提出高效节本套种的五项关键栽培技术。     

11种木霉菌对葡萄灰霉病菌的拮抗作用

对采自宁夏14个市县的170份土样及其它材料进行分离,得到96株木霉菌株,采用形态分类方法鉴定出9种木霉菌以及2种未知名菌种,它们分别为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、绿色木霉(T.viride)、长枝木霉(T.longibrachiatum)、康氏木霉(T.koningii)、拟康氏木霉(T.pseudokoningii)、顶孢木霉(T.fertile)、黄绿木霉(T.aureoviride)、深绿木霉(T.atroviride)、钩状木霉(T.hamatum)以及T.sp1和T.sp2。竞争及对峙培养结果表明:11种木霉菌种对葡萄灰霉病菌(BotrytiscinereaPers.)均有不同程度的拮抗作用,尤其前四种木霉菌表现出了很强的竞争优势,在对峙培养中对葡萄灰霉菌的拮抗系数为Ⅰ￣Ⅱ,抑菌率达61.8%￣77.6%。在光学显微镜下可观察到木霉菌或缠绕或穿入葡萄灰霉菌菌丝生长,并发生菌丝断裂、消解以及细胞原生质浓缩等现象。     

番茄灰霉病菌对速克灵的抗性检测

对来自安徽省合肥、蚌埠、六安、和县的 5 4个番茄灰霉病菌株进行了对速克灵的抗性测定 ,并分析了番茄灰霉病菌生长特性与抗药性、致病力的相关性。结果表明 ,4个菌株为速克灵高抗型 ,占 7.4% ;无中抗型 ;5 0个菌株为敏感型 ,占 92 .6%。各菌株间生长速度、菌核干重差异较小 ,产孢量差异较大。产孢量与菌核干重相关极显著 ,其余性状间相关皆不显著     

木霉菌对灰葡萄孢菌的拮抗作用

对采自宁夏14个市县的170份土样及其它材料进行分离,得到96个木霉菌株,采用形态分类方法鉴定出9种木霉菌以及2种未知名菌种．它们分别为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、绿色木霉（T．viride）、长枝木霉（T．longibrachiatum）、康氏木霉（T．koningii）、拟康氏木霉（T．pseudokoningii）、项孢木霉（T．fertile）、黄绿木霉（T．aureoviride）、深绿木霉（T．atroviride）、钩状木霉（T．hamatum）以及T．sp1和T．sp2。拮抗作用和抑菌活性测定结果表明：11种木霉菌对葡萄、番茄和黄瓜灰霉病的致病菌——灰葡萄孢菌（Botrytis cinema Petssp．）均有不同程度的拮抗作用,其中哈茨木霉、绿色木霉、黄绿木霉、钩状木霉和T．sp1对病原菌的拮抗作用及抑菌活性显著,其生长速度比病原菌平均快1．1～3．0倍：在对峙培养中拮抗系数达Ⅰ级或Ⅱ级．其抑菌率高迭98．78％。     

灰霉病原菌对多菌灵的抗性监测

对从山西各地数十县市采集分离到的188个灰霉病菌菌株[Botrytis cinerea Pers.]对多菌灵的抗性进行了监测。毒力测定结果显示:敏感菌株的平均EC_(50)值为0.0428μg·mL~(-1),EC_(90)值为0.1280μg·mL~(-1);中抗菌株的平均EC_(50)值为11.2415μg·mL~(-1),EC_(90)值为128.4351μg·mL~(-1),中度抗性菌株的抗性倍数为262.7倍;由于大多数高抗菌株的抗性太高,无法测得其EC_(50)值,但实验表明,EC_(50)值均大于50μg·mL~(-1),且大部分高抗菌EC_(50)值大于100甚至500μg·mL~(-1),即抗性倍数在1000倍以上。山西各地灰霉菌对多菌灵的抗性均较为严重,晋中、晋南、晋东南和晋北的抗性频率分别为86％、87.2％、93.5％和100％,除晋北高抗菌株频率较低外(33.3％),其它地区高抗频率均在50％以上。从各地区的抗性情况看,晋南和晋东南较重,晋中和晋北相对则较轻。     

拮抗微生物对灰葡萄孢菌的生物防治作用及其应用前景

阐述了木霉菌、酵母菌、粘帚霉菌、芽孢杆菌等拮抗微生物对灰葡萄孢菌的拮抗机制、工业生产与商业应用的现状 ,并展望了今后的研究趋势与发展前景     

抗性灰霉病菌防治新药剂的研究

针对我国番茄灰霉病菌群体中已发现对多菌灵、乙霉威双抗菌系的情况,选择保护性杀菌剂福美双作为伴药与多菌灵及乙霉威进行三元复配,研制出防治抗性灰霉病的高效新药剂利霉康。田间药效试验证明该药剂对灰霉病菌中多菌灵抗性菌系(C~R)、乙霉威抗性菌系(D~R)及双抗菌系(C~RD~R)的防效均在80％以上,在双抗菌系流行地区的防治效果尤其显著。