水培条件下pH对大蒜生长趋势的影响

[目的]研究水培大蒜在不同pH条件下的生长发育及SOD活性变化。[方法]土壤溶液的pH对植物的生长发育有重要的影响,试验以不同梯度的pH水溶液水培大蒜,在不同生长阶段对其SOD活性进行测定。试验采用丙酮沉淀法分离纯化SOD沉淀,用NBT光还原法测定其活性。[结果]水培大蒜在pH为6.0时长势最好。在pH 4.55.5的生长环境下,大蒜的SOD活性相对稳定,但伴随着逐渐生长,SOD活性呈现上升趋势。酸性环境下,SOD活性相对较高。[结论]该研究可为大蒜的水培提供指导。     

水杨酸对大蒜鳞茎形成及其保护酶活性的影响

为探寻反季节栽培大蒜生产的理论和技术,实现新鲜大蒜的周年供应,丰富设施栽培结构模式和减轻连作障碍。以两个大蒜品种为试材,在反季节栽培条件下,研究了叶面水杨酸(SA)处理对大蒜鳞茎形成、产量及鳞茎形成过程中过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果表明,不同质量浓度SA处理均能促进大蒜的鳞茎比率和假茎粗,抑制大蒜的株高和假茎长的增长,增加蒜瓣质量、蒜头质量和蒜头产量,提高大蒜鳞茎中POD、SOD的活性,抑制CAT的活性,且以200 mg/L处理的效果最显著。说明SA能显著促进大蒜鳞茎膨大和质量增加,以200 mg/L处理的效果最好,SA对大蒜植株生长有抑制作用;SA能够提高大蒜鳞茎中POD、SOD的活性,抑制CAT的活性。     

大蒜SOD酶的分离纯化和肝素修饰

采用热变性法、盐析法与有机溶剂提取法进行分离纯化,建立了一套适合大蒜SOD酶分离纯化的工艺流程:大蒜SOD酶提取液经70℃加热20 min,取上清在4℃条件下先使硫酸铵的饱和度达到40%;除杂后调整硫酸铵饱和度达到80%,取沉淀透析;透析液经纤维素层析,NaCl醋酸缓冲液梯度洗脱,收集第3个蛋白峰.针对天然SOD酶的不...     

大蒜中超氧化物歧化酶提取方法研究

以大蒜为试验材料,分别采用磷酸缓冲液提取法、热变性法对其细胞溶质中的超氧化物歧化酶进行提取分离,然后再利用硫酸铵分级盐析法对经热变性和缓冲液抽提所获得的SOD粗提液进行纯化,配合透析除去残留的小分子物质,最后通过测得的SOD酶活力的大小判断提取大蒜SOD的最佳方法,并通过对2种方法中不同参数的优化,找出最佳提取条件.结果表明:热变性法粗提大蒜SOD,透析法配合硫酸铵分级盐析法纯化SOD为最理想的提纯方法.其中热变性法最适温度为60℃,磷酸缓冲液浸提法合适的缓冲液pH值为7.8.     

曲霉脱臭工艺对大蒜SOD活力的影响

研究了大蒜曲霉脱臭的工艺因素对大蒜中超氧化物歧化酶（super oxide dismutase,SOD）活力的影响,为曲霉脱臭工艺的优化提供依据。以鲜大蒜为原料,经过脱臭,利用感官评定法对大蒜的脱臭效果进行评价,以羟胺法对大蒜中SOD的活力进行测定。对处理中的蒜形、pH值、CuSO4浓度、半胱氨酸浓度以及浸泡处理时间等因素对脱臭效果和SOD活力的影响作出分析。结果表明,大蒜曲霉脱臭对产品中的SOD活力有一定的影响,其中以蒜形和处理时间对SOD活性影响较大。     

Cr6+和Pb2+重金属胁迫对大蒜发芽的影响

[目的]研究Cr6＋和Pb2＋胁迫对大蒜发芽的影响。[方法]测定了在Cr6＋和Pb2＋2种重金属胁迫下大蒜发芽过程中的根长、酶（SOD和CAT）活性及可溶性蛋白质含量。[结果]大蒜萌发过程中,Cr6＋和Pb2＋重金属浓度超过20 mg/L时对芽苗根长有明显的抑制作用;SOD和CAT对低浓度的重金属毒性具有一定的缓冲能力,在低浓度Cr6＋胁迫下SOD活性随着金属离子浓度的增加而增大,且当处理浓度为50 mg/L时达到最大,而CAT活性在Cr6＋浓度低于20 mg/L时逐渐增大;SOD和CAT活性在高浓度Cr6＋（大于50 mg/L）或在Pb2＋胁迫下随重金属离子浓度的增加而持续降低;在重金属（Cr2＋、Pb2＋）溶液各个浓度作用下随着时间延长可溶性蛋白质含量均表现出下降趋势,且随着浓度的提升下降趋势明显。另外,大蒜对Cr6＋毒性的耐受性远高于对Pb2＋。[结论]为深入探讨重金属对植物的毒害机制提供了理论依据。     

Cr~（6＋）和Pb~（2＋）重金属胁迫对大蒜发芽的影响（摘要）

[目的]研究Cr6＋和Pb2＋胁迫对大蒜发芽的影响。[方法]测定了在Cr6＋和Pb2＋2种重金属胁迫下大蒜发芽过程中的根长、酶（SOD和CAT）活性及可溶性蛋白质含量。[结果]大蒜萌发过程中,Cr6＋和Pb2＋重金属浓度超过20mg/L时对芽苗根长有明显的抑制作用;SOD和CAT对低浓度的重金属毒性具有一定的缓冲能力,在低浓度Cr6＋胁迫下SOD活性随着金属离子浓度的增加而增大,且当处理浓度为50mg/L时达到最大,而CAT活性在Cr6＋浓度低于20mg/L时逐渐增大;SOD和CAT活性在高浓度Cr6＋（大于50mg/L）或在Pb2＋胁迫下随重金属离子浓度的增加而持续降低;在重金属（Cr2＋、Pb2＋）溶液各个浓度作用下随着时间延长可溶性蛋白质含量均表现出下降趋势,且随着浓度的提升下降趋势明显。另外,大蒜对Cr6＋毒性的耐受性远高于对Pb2＋。[结论]为深入探讨重金属对植物的毒害机制提供了理论依据。     

副猪嗜血杆菌sodA基因的表达及其理化性质

为探究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)sodA基因编码的超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的活性及理化性质,设计特异性引物从HPS中扩增得到目的基因sodA,利用原核表达系统对HPS SOD蛋白进行表达,通过硫酸铵分级沉淀、Sephacryl S-300凝胶过滤层析以及DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析等方法对表达蛋白进行了分离纯化,利用邻苯三酚自氧化法对纯化产物进行SOD酶活性检测,通过HPSEC法、火焰原子吸收分光光度法对其理化性质进行了初步探究。结果表明,表达的重组HPS SOD蛋白质为可溶性蛋白质,单亚基分子质量为26 ku,纯化后目的蛋白质纯度为95%,纯化后的重组HPS SOD蛋白质比活性为215.9 U/mg,经HPSEC法检测分析,重组HPS SOD呈多聚体,通过火焰原子吸收分光光度法检测纯化的重组HPS SOD中锰元素含量为0.71 mg/L。     

秸秆还田配施钾肥对大蒜生长及抗氧化系统的影响

为推进大蒜产区秸秆资源的合理利用，促进大蒜栽培减肥增效，在大田条件下，以大蒜品种徐蒜918为材料，设置6个处理研究玉米秸秆还田配施钾肥对大蒜生长、抗氧化胁迫能力的影响。结果表明，秸秆还田+1/3钾(S+1/3K)的处理大蒜干重和根系活力显著高于其他处理，分别为27.67 g·株^-1和20.18 mg·g^-1·h^-1,叶片色素含量影响不大。与对照相比，秸秆还田+1/3钾处理显著降低大蒜叶片与根系SOD活性、根系POD活性与叶片CAT活性，降低了根系MDA含量；提高了大蒜叶片可溶性蛋白含量，并降低了大蒜叶片可溶性糖含量。秸秆还田配施适量的钾肥可促进大蒜干物质的积累，提高根系活力，保持大蒜体内良好抗氧化酶活性水平，降低根系MDA含量，促进了大蒜的生长。     

不同地膜覆盖对土壤温度及大蒜保护酶活性的影响

以徐蒜917为材料,研究不同颜色地膜覆盖后土壤温度变化及对大蒜保护酶(SOD、POD、CAT)活性的影响。结果表明:大蒜苗期至返青期银膜覆盖对土壤的保温效果优于其它处理;生育后期(鳞茎膨大期)透明膜与白黑膜覆盖处理的10 cm处土壤温度于13:00与15:00分别出现最高值。大蒜生育前期(苗期至抽薹期)银膜覆盖处理的大蒜SOD、POD、CAT(叶)活性有不同程度的升高;生育后期(鳞茎膨大期)透明膜与白黑膜覆盖处理的大蒜SOD(根)、POD、CAT因受到高温胁迫,酶活性高于其它处理。银膜覆盖有利于大蒜生育前期土壤的增温、保温,提高大蒜保护酶活性,促进大蒜生长,在一定程度上调节了大蒜生长后期土壤温度,降低了高温造成的损伤。     

超声波对菜豆种子超氧化物歧化酶活性的影响

菜豆种子粗酶液经乙醇-氯仿、丙酮沉淀、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-75柱层析,获得比活力为127．45U／mg的超氧化物歧化酶(SOD),该酶活性受H2O2和KCN强烈抑制,经电泳鉴定为3种SOD同工酶,部分纯化的SOD证明为Cu,Zn-SOD,经不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳获得其中1种电泳纯的酶,超声波处理此酶后,酶活力发生改变,适宜的超声波参数能显著提高酶活力,经超声波处理后,SOD的紫外吸收光谱无明显变化,而紫外差示光谱在一定波长范围内出现正峰和负峰。     

苦荞胰蛋白酶抑制剂纯化方法的研究

以苦荞种子为材料,经热变性、硫酸铵盐析后制成苦荞胰蛋白酶抑制剂(TBTI)粗品,然后用离子交换层析及亲和层析的不同洗脱体系对其进行纯化。结果发现:亲和层析法操作简单、纯化效率高。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示为一条带。分子量约为12 kDa～15 kDa。     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明：从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法得到的IgG纯度都很高,经过SDS-PAGE电泳都只得到25 ku和55 ku左右的两条带;免疫磁珠分离法得到的抗体ELISA效价高于A蛋白亲和层析法;免疫磁珠分离法反应所需时间（10 min）小于A蛋白亲和层析法所需的20 min,其得率（11.5 mg/mL）也高于A蛋白亲和层析法的10.25 mg/mL.     

玉米SOD的分离与纯化

探索高速、快速的玉米SOD分离与纯化方法,旨在为玉米SOD的规模化生产提供依据。利用金属螯合亲和层析和DEAE-纤维素离子交换层析相结合的方法分离纯化玉米SOD,得到2种达到电泳纯的SOD组分(A、B),并对它们的基本性质进行了初步分析。SDS-PAGE法测定A、B两组分的亚基分子量分别为20 kD和16.4kD;由电泳后的定位染色情况可知,这2种SOD组分均属于Cu/Zn-SOD;等电聚焦表明,A、B两组分的等电点分别为7.2和6.9。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

蓖麻毒蛋白的分离纯化和毒理作用研究

经(NH4)2SO4沉淀,分子筛层析和亲和层析等处理,从去壳蓖麻籽中分离纯化得到蓖麻毒蛋白,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈32kDa和34kDa两条蛋白带,证明该蓖麻毒蛋白已被纯化至均一。用等电聚焦法测出该蓖麻毒蛋白的等电点为pI6.1和pI6.7。高效液相色谱测出该蓖麻毒蛋白在非变性条件下有五个峰,表明蓖麻毒蛋白可能存在五个不同的多聚态。动物实验表明该蓖麻毒蛋白对小白鼠有较强的毒性,但对斜纹夜蛾幼虫无毒杀作用。     

冬小麦中玉米赤霉烯酮结合蛋白的分离纯化

玉米赤霉烯酮是植物体内源产生的一类小分子生理活性物质，已证明它与冬性植物的春化作用密切相关。本研究应用亲和层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对春化的冬小麦幼苗中的玉米赤霉烯酮结合蛋白进行了分离纯化。供试材料为冬小冬品种燕大1817，种子萌发后在4℃一春化4周，提取幼苗的水溶性总蛋白进行亲和层析。层析基质为琼脂糖凝胶Sepharose4B，配体为玉米赤霉烯酮多聚赖氨酸复合物。总蛋白溶液先经过Sepharose4B结合后，再与连有配体的亲和胶进行反应，然后洗去非结合蛋白；改变洗脱条件，进一步洗涤得到的为玉米赤霉烯酮结合蛋白（ZBP）溶液。研究结果表明，在春化的冬小麦幼苗中存在两种玉米赤霉烯酮结合蛋白，它们的分子量分别为25.4kD和22.9kD。     

胸腺肽α1的温度诱导原核可溶性表达与简易纯化

 将人工合成的人胸腺肽α1（Tα1）基因插入到载体pBV222,转化大肠杆菌DH5α菌株并置42℃诱导表达可溶性融合蛋白。融合蛋白经镍亲和层析柱纯化,加入肠激酶切割,再将酶切反应体系回到镍亲和层析柱。所获穿过液中的重组胸腺肽α1（rTα1）,经十二烷基硫酸钠-聚苯烯酰胺凝胶电泳（SDS PAGE）和反相高效液相色谱（RP HPLC）分离及分析,纯度分别为94.5%和72%。以癌症患者外周血淋巴细胞开展玫瑰花环试验,所获rTα1纯品显示出与化学合成Tα1（sTα1）相同的生物学活性。     

重组猪干扰素α的纯化工艺研究

[目的]研究重组猪干扰素α的纯化工艺,为进一步研究该蛋白的分子结构及rPoIFN-α标准品的制备奠定基础。[方法]将含重组菌E.coliBL21诱导表达后得到的粗制rPoIFN-α,分别用2种方案进行纯化。方案1,依次用GST亲和层析法、DEAE阴离子交换法及分子筛法层析三步法进行纯化;方案2,依次用GST亲和层析和分子筛法层析两步法进行纯化。纯化结果用SDS-PAGE及Western-blot进行纯度检测及鉴定。[结果]诱导表达后的表达产物经SDS-PAGE检测,发现在45Kd分子量处有目的条带,Western-blot检测有特异性条带。通过两步法纯化后的rPoIFN-α纯度达96%,蛋白得率为42.8%,三步纯化纯度为98.8%。[结论]两步法得到的蛋白纯度非常接近三步法,但与三步法相比工艺更为简单方便。     

牛乳中超氧化物歧化酶(SOD)的提纯与鉴定

新鲜牛乳经超速离心,氯仿乙醇处理,丙酮沉淀、透析、ＤＥＡＥ纤维素柱层析等步骤使其中Ｃｕ－ＺｎＳＯＤ得到了纯化,提纯后酶的比活为１４９．５Ｖ／ｍｇ。该酶对Ｈ２Ｏ２敏感,并且在２７２ｎｍ和６７５ｎｍ处各有一吸收峰,证明被纯化的酶是Ｃｕ－ＺｎＳＯＤ。