IGF-1调控RBM3表达抑制低温应激诱导牦牛卵丘细胞凋亡

【目的】探索动物机体遭受低温应激及细胞冷冻过程中胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor, IGF-1)与RNA结合基序蛋白3(RNA-binding motif protein 3, RBM3)之间的作用关系,及IGF-1参与哺乳动物细胞抑制低温损伤的机制。【方法】体外培养牦牛卵丘细胞,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot, WB)和免疫荧光技术检测不同浓度(0、50、100、200ng·mL^-1)IGF-1和低温应激(30℃、25℃)对RBM3表达影响。卵丘细胞经最佳浓度IGF-1(100 ng·mL^-1)和对照组(0IGF-1)作用30 h后,低温(30℃、25℃)应激8 h,比较RBM3表达水平。评估在低温应激组、100 ng·m L^-1 IGF-1处理组和100 ng·mL^-1 IGF-1+RBM3抑制剂处理组,卵丘细胞25℃应激8 h后凋亡水平差异,并从基因...     

灌注半胱胺对山羊瘤胃消化代谢的影响

选用装有永久性瘤胃瘘管的３只本地空怀母山羊进行自身对照试验,试验期从瘤胃瘘管灌注半胱胺（１００ｍｇ．ｋｇ＾－１ＢＷ）,分别于灌注前１ｄ（－１ｄ）和灌注后第１,３,５,７ｄ动态采集瘤胃液,测定瘤胃液ｐＨ,氨氮（ＮＨ３－Ｎ）总脱氢酶活性（ＴＤＨＡ）,原虫蛋白（Ｐ－Ｐ）和细菌蛋白（Ｂ－Ｐ）的含量。结果表明,ｐＨ于１ｄ明显升高,至７ｄ基本恢复正常;ＴＤＨＡ于３ｄ明显上升,１,２,３号羊分别由－１ｄ的（１．     

日粮中添加硒对山羊瘤胃消化代谢的影响

在基础日粮中添加Ｎａ２ＳｅＯ３饲喂装有永久性瘤胃瘘管的河南本地空怀母山羊６０ｄ，结果表明，添加硒不仅不影响瘤胃液ＰＨ值，还能显著提高瘤胃液三氯醋酸沉淀蛋白和细菌蛋白含量；使瘤胃液原虫蛋白和氨氮浓度有升高趋势。能提高瘤胃发酵水平。改变瘤胃发酵类型，降低乙酸百分比，使丙酸显著增加，使瘤胃发酵趋于丙酸型；添加硒能显著提高血清总蛋白含量，降低血清尿素氮，显著提高山羊日增重。     

IGF-1和EGF对辽宁绒山羊初级毛囊体外培养的影响

为研究不同剂量的IGF-1和EGF对辽宁绒山羊毛囊体外生长及毛囊形态的影响,采用显微分离法分离绒山羊初级毛囊,分别测定不同浓度IGF-1(0.1,1,10,100ng·mL-1)、不同浓度EGF(0.2,2,20,100ng·mL-1)和联合添加IGF-1与EGF(分别添加10ng·mL-1和20ng·mL-1)对毛囊形态变化及生长长度的影响.结果表明:IGF-1刺激毛乳头和毛母质细胞分裂增殖;EGF促进毛囊外根鞘细胞分化;联合添加刺激毛球部增大.IGF-1和EGF对毛囊体外生长均具有正向调节作用,作用大小与剂量有关,最适宜浓度IGF-1为10ng·mL-1,EGF为20ng·mL-1,10d后生长长度分别达1.075mm和1.117mm;IGF-1(10ng·mL-1)和EGF(20ng·mL-1)联合添加对毛囊生长促进作用优于单独添加,10d后生长长度达1.413mm.     

威宁绵羊IGF-1基因外显子多态性分析

为了更好地保护和开发利用威宁绵羊这一优良地方品种,本实验利用威宁绵羊构建DNA池,设计4对引物扩增威宁绵羊IGF-1基因外显子及部分内含子序列。将PCR产物纯化并进行双向测序,通过DNAStar生物软件分析确定多态性位点。利用在线生物信息学软件分析多态位点对IGF-1基因RNA的二级结构、类胰岛素生长因子1的二级和三级结构的影响。结果表明,在扩增的IGF-1基因中筛选到3个SNPs:Intron1-A4387C、Exon2-T87C、Exon4-A27T,其中Exon4-A27T为错义突变,导致编码的精氨酸(Arg)变为丝氨酸(Ser);Exon2-T87C多态位点均未改变氨基酸的编码,为同义突变;Intron1-A4387C在内含子区,不参与氨基酸编码。     

水貂IGF-1R基因SNPs筛查及其与生长性状的关联分析

为分析IGF-1R基因部分SNPs与银蓝水貂与美国短毛黑水貂2个群体生长性状的关联性。以同龄同场的银蓝水貂和美国短毛黑水貂为研究对象,采用PCR产物直接测序法筛查IGF-1R基因CDS序列的多态位点,利用SPSS(19.0)软件GLM统计模型分析基因SNPs不同基因型与水貂生长性状的相关性。在线软件对IGF-1R基因进行生物信息学分析。结果表明:在IGF-1R基因外显子2和外显子8分别检测到G207A同义突变和G1782A同义突变,根据测序峰图对2位点进行基因分型。群体遗传学分析显示,G207A位点在银蓝水貂群体中属于低度多态,G1782A位点在银蓝水貂群体中属于中度多态,G207A和G1782A 2个位点在美国短毛黑水貂中均为中度多态;χ~2检验表明,银蓝水貂和美国短毛黑水貂群体在2个突变位点处于HardyWeinberg平衡状态(P0.05);关联分析表明,G1782A位点与美国短毛黑水貂的体重显著相关(P0.05),突变纯合子AA基因型个体的体重值显著高于GG基因型个体和GA基因型个体。因此G1782A位点适合于短毛黑水貂体重的分子标记选择。     

安义瓦灰鸡IGF-1基因多态性研究

研究了安义瓦灰鸡IGF-1基因的多态性,检测到该基因第1外显子有1处突变,表现为3种基因型,其中AA基因型的频率最高,BB基因型的频率最低,A等位基因的频率远高于B。多态信息含量分析表明,该位点属于中度多态位点。     

湖北白猪IGF-1基因的克隆及序列分析

[目的]以湖北白猪肝脏作为试验材料,克隆出湖北白猪胰岛素生长因子（IGF-1）基因,并对其序列进行分析。[方法]采用Trizol法从湖北白猪的肝脏中提取总RNA,将其作为RT反应的模板,用P2（5＇-CAGGTAACTCGTGCAGAGCAAAGGA-3＇）引物合成IGF-1基因cDNA第一链,以其产物为模板,再以P1（5＇-CCCATCTCCCTGGATTTCTTTTTG-3＇）和P2为上下游引物扩增到大小约为607bp的产物,并将其克隆至pCRII载体上,经蓝白斑筛选、酶切、测序。[结果]经筛选、酶切、序列分析,表明该片段为IGF-1基因的cDNA克隆,它由607个核苷酸组成,其中1～145位是5＇端非翻译区,从第146位ATG起始密码子开始至第538位TAG终止密码子,539～607位是3＇端非翻译区,包含一完整的ORF,该ORF共有393核苷酸,编码一个推断由130个氨基酸组成的多肽。与GenBank中的序列比较,该序列与Muller等报道的猪IGF-1基因编码序列完全同源。[结论]成功克隆了湖北白猪IGF-1基因,并对其进行序列分析,证实了IGF-1基因的高度保守性,为采用转基因技术对湖北白猪进行育种奠定了基础和提供了技术依据。     

山梨酸对C2C12细胞增殖、IGF-1分泌和相关基因表达的影响

为研究山梨酸对小鼠骨骼肌成肌细胞(C2C12)增殖、IGF-1分泌、GH/IGF系统和糖脂代谢相关基因表达的影响,试验通过培养基中添加不同浓度的山梨酸(0、0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L)处理C2C12细胞,采用MTT法检测细胞增殖,RIA法检测细胞IGF-1分泌量,qPCR法检测相关基因mRNA的表达水平.结果表明:1)10.0μmol/L山梨酸显著促进体积分数为10%胎牛血清(1和2 d)和无血清(4和5 d)培养的C2C12细胞增殖(P<0.05);2)0.1、1.0和100.0μmol/L山梨酸均显著抑制无血清培养的C2C12细胞IGF-1的分泌(P<0.05);3)1.0μmol/L山梨酸显著上调无血清培养的C2C12细胞IGF-1R、GHR和CPT1b的mRNA表达(P<0.05),对IGFBP3(P=0.09)、PDK4(P=0.10)和PGC1α(P=0.10)的mRNA表达量也有提高趋势.提示山梨酸可促进C2C12细胞的增殖和GH/IGF系统及糖脂代谢相关基因mRNA表达,但对IGF-1的分泌具有抑制作用.     

拔毛·剃毛对绵羊皮肤中GHR·IGF-1·IGF-1R·KAP3.2和KAP6-1基因表达的影响

选取36只新疆细毛羊随机分成6组进行拔毛、剃毛处理,于第0、3、6、9、12、50天采集皮肤样品,用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法,定量分析绵羊皮肤中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)、角蛋白关联蛋白KAP3.2和KAP6-1mRNA的相对丰度。实验结果显示,与对照组相比,剃毛可显著提高IGF-1的表达量,但对GHR、IGF-1R、KAP3.2和KAP6-1的表达量均无明显的影响;而拔毛对皮肤中GHRI、GF-1I、GF-1R、KAP3.2和KAP6-1基因表达均无明显影响。     

102GD气相色谱测试山羊瘤胃挥发性脂肪酸的方法

实验结果表明，该方法稳定实用，快速简便，重复性强，精确度高，每ｈ可分析７－８个样品；１０次重复测定，乙酸、丙酸、丁酸的批内变异系数依次为０．９５％，１．４９％，２．６０％；乙酸、丙酸、丁酸的５次平均回收率依次为１００．００％，１００．３４％，９９．７１％。对山羊饲喂不同添加剂不影响该方法的测定结果。     

半胱胺对羊毛生长及皮肤中GH受体、IGF-1和IGF-1型受体基因表达的影响

罗米丽×中国美利奴 (新疆军垦型) 杂交一代断奶母羔 214只, 随机分成两组, 在日粮中分别添加 3 5 (试验组) 和 0g·kg-1 (对照组) 生长调节剂CT2000 (半胱胺盐酸盐), 实验期为 120d。于试验前和试验结束时称重, 采毛和皮肤样品, 测定母羔生长速度, 羊毛长度、细度、强度、弯曲度和羊毛油汗颜色, 并用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR) 方法, 定量分析绵羊皮肤中生长激素受体 (GHR)、胰岛素样生长因子 1 (IGF 1) 和胰岛素样生长因子 1型受体(IGF 1R)mRNA的相对丰度。实验结果显示, 与对照组相比较, 试验组平均日增重提高 12 77% (P<0 01), 羊毛平均日增长提高 24 01% (P<0 01), 羊毛纤维直径平均日增长提高 217 31% (P<0 01), 羊毛纤维强度没有显著的差异(P>0 05), 羊毛油汗颜色和羊毛弯曲度的正常百分率显著提高 (P<0 05); 皮肤中GHRmRNA表达量增加 110 57%(P<0 01), IGF 1、IGF 1RmRNA表达量无明显变化。结果表明, 半胱胺 (CT2000 ) 能够显著提高羔羊生长性能, 促进羊毛生长, 其机制可能与提高皮肤中GHR水平有关。     

NPY、IGF-1基因对文昌鸡繁殖性状的遗传效应

采用PCR-RFLP技术检测文昌鸡NPY基因和IGF-1基因的多态性,并分析NPY、IGF-1基因对文昌鸡繁殖性能的影响。结果表明:300日龄NPY AA型个体平均产蛋数(88.95枚)与NPY aa型个体平均产蛋数(81.55枚)相比差异显著,NPY基因以加性方式作用,其中300日龄产蛋数加性效应值为-0.252(P<0.05)。IGF-1基因同样以加性方式作用,其中300日龄产蛋数加性效应值为0.199(P<0.05)。300日龄IGF-1 bb型个体平均产蛋数(89.03枚)与IGF-1 BB型个体平均产蛋数(82.61枚)相比差异显著,400日龄IGF-1 bb型个体平均产蛋数(137.84枚)与IGF-1 BB型个体平均产蛋数(127.82枚)相比差异显著;IGF-1 bb型个体平均连产天数(3.38 d)分别与IGF-1的BB、Bb型个体平均连产天数(2.96、2.78 d)相比差异均显著。     

补饲高锰酸钾对绵羊瘤胃pH和TVFA的影响

用三只装有永久性瘤胃瘘管的新疆细毛羯羊(平均体重40kg)按2×2因子方差设计试验,研究两种精料水平下补饲高锰酸钾对绵羊瘤胃pH值和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度的影响。结果表明:1 瘤胃pH值与TVFA浓度间呈强负相关,r=-0.8581(n=28,p<0.01);2 高锰酸钾降低瘤胃TVFA浓度(p<0.10),升高瘤胃pH值(p<0.05)。说明高锰酸钾对瘤胃发酵水平具有调控作用。     

鸡卵泡颗粒细胞转染Bcl-2基因对IGF-1分泌的影响

选用正在产蛋的罗曼鸡,取体积排序第一（F1）和第四（F4）的卵泡,分离颗粒细胞层细胞。采用脂质体介导方法将来源于F1和F4卵泡的颗粒细胞用PBS（对照）、空载体或Bcl-2重组质粒处理,然后在不完全无血清培养基（不添加胰岛素）中培养48和96h,用流式细胞术检测Bcl-2蛋白表达,用放射免疫测定技术检测IGF-1的含量。结果发现,转染Bcl-2重组质粒组的Bcl-2蛋白表达量和IGF-1分泌量均多于其他各组。分析来源于不同卵泡期卵泡颗粒细胞的分泌功能,发现随时间的增加F1细胞IGF-1分泌量减少,而F4的IGF-1分泌量基本不变。结果表明,在鸡卵泡颗粒细胞中转染的Bcl-2基因具有表达功能,表达的蛋白具有调节鸡卵泡颗粒细胞分泌IGF-1的作用;鸡卵泡颗粒细胞IGF-1的分泌还受鸡卵泡的大小和颗粒细胞在体外培养时间的影响。     

鸭出雏前后腿肌IGF-1基因表达规律研究

 为探讨家鸭出雏前后腿肌类胰岛素样生长因子（IGF-1）的表达规律,本研究采用荧光定量PCR和原位杂交（ISH）技术,选取高邮鸭和金定鸭13,17,21,25,27日胚龄和7日龄共192个腿肌样本为研究对象。首次发现IGF-1 mRNA在两个品种不同胚龄和日龄腿肌中的表达量规律：两个品种鸭腿肌IGF-1 mRNA表达量差异不显著（P>0.05）;腿肌13日胚龄表达量极显著高于其他时间点（P<0.01）,并随着胚龄的增加逐渐降低。同时,原位杂交结果显示,血管周围及腿肌肌肉肌束间的肌膜中IGF-1 mRNA的表达量明显高于周边腿肌肌肉组织。研究结果表明,IGF-1基因对鸭胚胎期腿肌的生长发育具有重要意义。     

不同碳水化合物结构日粮对山羊瘤胃发酵和 微生物氨基酸组成的影响

 【目的】研究日粮中不同碳水化合物结构对山羊瘤胃发酵和微生物氨基酸组成的影响,为回答“瘤胃微生物的氨基酸组成是否恒定？”这一国际学术界仍有争论的问题提供理论依据。【方法】选用4头装有永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊,采用4×4拉丁方试验设计,以玉米、豆粕、稻草为基础日粮,研究不同非结构性碳水化合物与结构性碳水化合物之比(NSC/SC)处理(A：0.33、B：0.63、C：1.17及D：2.18)对pH、NH3-N、VFA浓度及瘤胃微生物氨基酸组成的影响。【结果】随着日粮中NSC/SC的升高,瘤胃pH显著降低(P＜0.05),NH3-N浓度显著升高(P＜0.05),乙酸的摩尔百分比和乙酸/丙酸的比值随日粮中NSC/SC的升高而显著降低(P＜0.05)。不同NSC/SC的日粮下的细菌氨基酸含量中,天冬氨酸、丝氨酸、甘氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸含量都存在显著差异或极显著差异(P＜0.05),原虫氨基酸中天冬氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、脯氨酸产生了显著变化(P＜0.05)。【结论】瘤胃微生物氨基酸组成会受到日粮中NSC/SC比例的影响。     

尿素和氢氧化钙处理玉米秸对体外瘤胃内环境的影响

为了研究尿素和氢氧化钙处理玉米秸对体外瘤胃内环境的影响,采用2因素3水平完全交叉试验设计,将尿素和氢氧化钙均按玉米秸干物质质量的2%、3%和4%的量分别添加,共9个试验组和1个对照组(添加量为0),通过短期人工瘤胃技术研究不同水平尿素和氢氧化钙处理玉米秸对瘤胃液pH值、氨氮(NH3-N)质量浓度、微生物蛋白(MCP)产量和挥发性脂肪酸(VFA)浓度的影响。结果表明,不同水平尿素和氢氧化钙处理玉米秸对瘤胃液pH值影响不显著(P>0.05);对氨氮质量浓度影响显著或极显著(P<0.05或P<0.01),但均在正常范围内;在MCP产量方面,第6、7、8组和第10组极显著高于对照、第2、3、4组和第9组(P<0.01),分别比对照组高26.74%、27.91%、36.05%和32.56%,第7、8组和第10组3个组间无显著差异(P>0.05),第8组和第10组显著高于第5组和第6组(P<0.05),第7组和第5、6组间无显著差异(P>0.05);第10组的乙酸、丙酸和丁酸3种挥发性脂肪酸总浓度极显著高于对照组(P<0.01),比对照组高84.59%,第10组极显著或显著高于其他试验组(P<0.01或P<0.05)。结果显示,第10组即尿素和氢氧化钙处理玉米秸时,添加水平均为其干物质量的4%是最适宜的。     

IGFBP-1的生理功能及其表达调控的研究进展

IGFBPs(Insulin-like growth factor-binding proteins,胰岛素样生长因子结合蛋白)在进化上是高度保守的,在IGF(Insulin-like growth factor,胰岛素样生长因子)系统中共有6种形式的IGFBPs,分别为IGFBP-1~IGFBP-6,它们与配体IGFs具有高度的亲和性,能够调节IGFs与IGF-R(Insulin-like growth factor receptor,胰岛素样生长因子受体)的结合,这为IGF信号通路的调节提供了灵活的方式。其中,IGFBP-1是IGF结合蛋白家族中第一个被发现和鉴定的成员,一些分解代谢胁迫条件会诱导IGFBP-1 mRNA的高量表达。近年来体内的研究表明IGFBP-1被喻为是限制IGF信号系统功能的"分子开关"。在胁迫条件出现时,IGFBP-1通过限制能量的使用,将生命过程由高耗能的生长发育状态切换到仅能满足生物体生存的基本的低耗能状态。本文就近年来在哺乳类和鱼类模型中IGFBP-1调控的分子机制以及生物学功能的研究进展作一综述。