紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响。结果表明：下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH＋2．0mg／L2,4-D＋0．5mg／L6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO＋2．0mg／L6-BA＋0．5mg／LNAA;成苗培养基为1／2MS＋1％蔗糖＋0．7％琼脂。     

皇竹草组织培养再生植株研究

以皇竹草腋芽或顶芽作外植体，接种在脱分化培养基上培养，可获得胚性愈伤组织。将愈伤组织转接在再分化培养基上即可产生胚状体再生植株，获得的再生植株经多次切割后其基部又能产生不定芽形成再生植株，由此可获得大量的皇竹草再生植株建立起皇竹草快繁体系，为牧草生产提供优质种苗。     

天蓝苜蓿组织培养及再生体系的研究

以野生天蓝苜蓿种子发育5～7d无菌苗的子叶、下胚轴和种子苗叶片为外植体，对其愈伤组织诱导及其分化的基本培齐与外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明：对子叶、下胚轴和叶片愈伤组织诱导最适宜的基础培养基分别是MS、B5和SH；激素的种类及其浓度配比对于愈伤组织的诱导因不同的外植体有很大的差异。其中，子叶、下胚轴以MS＋NAA（0．5～1．0mg／L）＋6-BA（0．7mg／L）效果较好，叶片以SH＋NAA（0.5—1．0mg／L）＋2，4-D（1.5～5mg／L）十6胡A（0．7mg／L）较好，少量下胚轴在MS＋NAA（0．5mg／L）＋6-BA（0．7mg／L）和MS＋NAA（0．5mg／L）＋KT（0．5mg／L）的培养基中直接分化出胚状体，并成功发育成植株。在培养基Whb5上，子叶、下胚轴和叶片的分化都得到了很好的效果，分化率分别为43％、57％、40％，15～30d后都能再生植株。     

天蓝苜蓿组织培养及再生体系的研究

以野生天蓝苜蓿种子发育5～7d无菌苗的子叶、下胚轴和种子苗叶片为外植体,对其愈伤组织诱导及其分化的基本培养与外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明:对子叶、下胚轴和叶片愈伤组织诱导最适宜的基础培养基分别是MS、B5和SH;激素的种类及其浓度配比对于愈伤组织的诱导因不同的外植体有很大的差异。其中,子叶、下胚轴以MS+NAA(0.5～1.0 mg/L)+6-BA(0.7mg/L)效果较好,叶片以SH+NAA(0.5～1.0mg/L)+2,4-D(1.5～5 mg/L)+6-BA(0.7mg/L)较好,少量下胚轴在MS+NAA(0.5mg/L)+6-BA(0.7mg/L)和MS+NAA(0.5mg/L)+KT(0.5 mg/L)的培养基中直接分化出胚状体,并成功发育成植株。在培养基Whb5上,子叶、下胚轴和叶片的分化都得到了很好的效果,分化率分别为43%、57%、40%,15～30d后都能再生植株。     

苜蓿高效再生体系研究进展

作为牧草生物技术的一个重要组成部分,苜蓿Medicago sativa组织培养工作在国内外得到了大量开展.从苜蓿组织培养中外植体和培养基的选择、细胞生长调节物质的应用以及基因型的选择4个方面阐述了苜蓿高效再生体系研究现状,并对目前研究中存在的问题进行了归纳,提出了苜蓿再生体系研究的发展趋势.     

苜蓿植株再生体系研究进展

苜蓿（Medicago sativa）为世界上分布最广的一种牧草,享有“牧草之王”的美誉。本研究结合国内外苜蓿再生体系的研究动态,从再生途径、品种基因型、外植体、基本培养基、生长调节物质及其他添加物的应用6个方面阐述了苜蓿再生体系的研究进展,并对目前存在的问题及未来的发展前景加以探讨,以期为苜蓿再生体系的机理和基因工程方面的研究提供一定的参考。     

皇竹草组织培养再生植株研究

以皇竹草腋芽或顶芽作外植体，接种在脱分化培养基上培养，可获得胚性愈伤组织。将愈伤组织转接在再分化培养基上即可产生胚状体再生植株，获得的再生植株经多次切割后其基部又能产生不定芽形成再生植株，由此可获得大量的皇竹草再生植株建立起皇竹草快繁体系，为牧草生产提供优质种苗。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导及植株再生的研究

以中牧1号紫花苜蓿的胚轴、叶片、子叶和根为外植体,研究了不同浓度细胞分裂素对胚性愈伤组织诱导的影响,以及不同分化培养基、蔗糖浓度对胚状体分化的影响。结果表明:不同外植体间的愈伤组织诱导率差异较大,以胚轴的愈伤诱导效果最好,愈伤组织诱导率高达92.2%;改良SH+2,4-D2.0 mg/L+BA 0.5 mg/L为最佳胚性愈伤组织诱导培养基;MSO1培养基适于胚状体的分化,蔗糖浓度为25~30 g/L时胚状体诱导率最大可达30.4%;MSO培养基是最佳的成苗培养基。     

4个苜蓿品种愈伤组织诱导对光照的响应及再生体系建立

为实现苜蓿(Medicago sativa)的遗传改良,建立稳定、高效的离体培养再生体系,以甘农1号、巨人、WL324和三得利4个苜蓿品种为试验材料,以下胚轴为外植体,MS、UM、改良HS、改良UM为基本培养基,分别添加2,4-D、KT和水解酪蛋白诱导愈伤组织,通过体细胞胚发生途径建立再生体系,研究光照对苜蓿愈伤组织诱导及愈伤组织形态对体细胞胚发生的影响。结果表明,光照对愈伤组织诱导率差异不显著,均为100%;光暗交替条件下诱导的愈伤组织褐化率高、生长更快、更旺盛,颜色稍显绿或黄绿相间。在不同光照条件下4个苜蓿品种诱导的愈伤组织,以甘农1号的体细胞胚发生率最高,为20.83%~56.25%,而且光暗交替条件下诱导的愈伤组织更易形成体细胞胚;不同培养基中,UM+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L KT下体细胞胚发生率最高,为56.25%。     

扁穗牛鞭草再生体系的建立

以‘雅安'扁穗牛鞭草(Hemarthria compressa)的幼茎和幼叶为外植体,通过胚性愈伤组织建立扁穗牛鞭草的高效再生体系。结果表明:幼叶比幼茎更适合建立再生体系,最佳诱导培养基为MS+2,4-D 1.0 mg·L~(-1),幼叶和幼茎的出愈率分别为100%和86.96%。最佳分化培养基和不定芽增殖培养基均是MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1),愈伤分化率分别为100%和72.90%,再生苗增殖系数可达18.6。1/2 MS是最适宜的生根培养基,生根率达100%。     

南方紫花苜蓿不同外植体离体培养的研究

以南方紫花苜蓿5～7d无菌苗下胚轴、田间栽培株叶片和花药为外植体,对愈伤组织诱导的基本培养基及其分化培养基的外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明,下胚轴、叶片和花药愈伤组织诱导适宜基本培养基分别为BSH、MB和NB;激素的组合浓度配比对愈伤组织诱导及其分化或体细胞胚发生因外植体不同而有较大差异,下胚轴和花药以2,4-D0.05～0.5mg·L-1 NAA0.1～2.0mg·L-1 KT1.0～3.0mg·L-1 6-BA0.5mg·L-1较好,具潜在芽分化能力的绿色愈伤组织诱导率分别为61.1%和78.0%;叶片胚性愈伤组织诱导以2,4-D5.0～8.0mg·L-1 KT3.0mg·L-1为宜,诱导率68.6%。同时,补加水解乳蛋白(LH)对胚状体的形成和发育有一定作用。绿色愈伤组织或胚性愈伤组织转移到MS 6-BA1.0～2.0mg·L-1 KT1.0mg·L-1 NAA0.05～0.1mg·L-1分化培养基上培养,15～30d均能再生出小植株。     

紫花苜蓿胚性愈伤组织诱导与增殖的研究

为在不同栽培苜蓿(Medicago sativa)品种上,建立稳定、快速且高效的组织培养体系,本试验以品种'游客’、'Paola’和'Sardi7’为研究材料,探究了苜蓿外植体、激素配比及金属离子(Cu²⁺、Ag⁺),对其胚性愈伤组织的诱导效果。结果表明：下胚轴为诱导愈伤组织的最佳外植体;MS+1 mg·L^-12,4-D+0.2 mg·L^-1 KT为培养基时'游客’和'Paola’胚性愈伤诱导率分别为24.7%,16.7%;MS+2 mg·L^-12,4-D+0.2 mg·L^-1 KT为培养基时'Sardi7’胚性愈伤诱导效果最佳为27.3%;1 μmol·L^-1 和5 μmol·L^-1 Cu²⁺均能显著促进'Sardi7’'游客’和'Paola’愈伤组织的诱导;5 μmol·L^-1 Ag⁺显著诱导'游客’和'Paola’形成胚性愈伤组织,诱导率分别提高25.3%,46.7%(P<0.05)。本研究探索了诱导苜蓿愈伤组织的最佳外植体及其培养条件、金属离子促进不同苜蓿品种再生的作用,为突破同源四倍体栽培苜蓿品种基因型上的限制、提高胚性愈伤组织出愈率提供了思路。     

紫花苜蓿ISSR-PCR反应体系的建立与优化

通过优化影响紫花苜蓿(Medicago sativa L.)ISSR-PCR的主要参数,建立适于紫花苜蓿的ISSR反应体系和扩增程序。在20μL体系中各反应物的最适含量为:15 ng模板DNA,0.2 mmol/L dNTP,0.4μmol/L ISSR引物,0.8 U Taq DNA聚合酶,2μL 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl₂,2.5%去离子甲酰胺。PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,62℃(62℃~58℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共11个循环,每个循环退火温度降1℃;94℃变性30 s,52℃(52℃~48℃)退火45 s,72℃延伸1 min 45 s,共24个循环;72℃延伸5 min,25℃保温。     

海滨雀稗再生体系的建立

以海滨雀稗(Paspalum vaginatum cv.Sea spray)的成熟种子为外植体,运用正交试验设计,在MS基础培养基上添加不同浓度的2,4-D、6-BA、NAA、KT、CuSO4、AHC等外源物质,分析其对愈伤组织诱导、胚性愈伤组织分化的影响,建立海滨雀稗高频再生体系,为基因工程育种奠定基础.试验结果表明,在MS培养基中添加2.0 mg/L 2,4-D和0.5g/L AHC 能提高种子的发芽率至97.50％;最佳胚性愈伤诱导培养基为:MS +2,4-D 3.0mg/L+CuSO4 15.0 mg/L+AHC 1.0g/L,其胚性出愈率为66.88％;最佳分化培养基为:MS+6-BA 8.0mg/L+KT 0.05 mg/L+CuSO4 10.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,其分化率为95.00％.     

白羊草成熟胚组织培养及植株再生体系的建立

以白羊草(Bothriochloa ischaemum(L.)Keng)成熟胚为外植体,研究不同激素及其不同配比对愈伤组织诱导发生与生长状态及其绿苗分化能力的影响。从而建立了白羊草植株再生体系,为开展生物技术育种提供参考。结果表明:在愈伤组织诱导培养基中添加2.0 mg/L 2,4-D诱导频率为86.7%,MSB和MS培养基对愈伤组织诱导效果相近;在其继代培养基中添加1.0 mg/L 2,4-D愈伤组织增殖快,且保持胚胎发生能力;适宜的分化培养基为6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.05 mg/L,分化率达61.3%;愈伤组织在不添加任何生长调节剂的培养基上即可生根。     

紫花苜蓿再生体系研究进展

综述国内外紫花苜蓿再生体系研究的各个方面,并对目前研究中存在的问题进行了归纳,提出了紫花苜蓿再生体系研究的发展趋势.     

多年生黑麦草高频再生体系的建立及农杆菌介导PEPC基因的转化

以多年生黑麦草(Lolium perenne L.)成熟种子作为外植体,建立其高频再生体系,通过农杆菌介导法将磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)基因转入,为多年生黑麦草的抗逆转基因工作奠定基础。结果表明:种子充分灭菌后在附加6.0 mg·L^-1 2,4-D的培养基中诱导愈伤组织,诱导率可达61.33%。愈伤组织在2,4-D浓度减半的培养基上继代培养长势良好,分化培养基为MS培养基附加1.0 mg·L^-16-BA,分化率最高达到61.33%,在1/2 MS+0.5 mg·L^-1 NAA培养基中进行生根培养,生根率达100%。以该再生体系为基础,将获得的愈伤组织作为外植体进行遗传转化,经筛选培养后得到再生植株,通过PCR及实时荧光定量(Real-Time)PCR验证表明PEPC基因已成功转入,转化率为8.67%。试验结果将为多年生黑麦草抗性品种的研究奠定基础。     

青绿苔草(Care breviculmis)愈伤组织诱导与再生体系的建立

为建立青绿苔草高效的再生体系,本研究以青绿苔草的种子为外植体,探究不同植物激素配比对愈伤组织诱导、愈伤分化和生根的影响。结果表明：MS+1.5 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+2.0 mg·L^-1 2,4-D为诱导愈伤的最佳培养基,诱导率可以达到68.3%,愈伤表现为松散的黄色颗粒;MS+1.0 mg·L^-1 NAA+1.0 mg·L^-1 6-BA为最佳分化培养基,分化率为93.8%,不定芽数量达到40个,长势良好;不定芽在1/2 MS培养基中生根效果最好,其根长、株高和生根数量均显著高于其他处理。本研究建立了高效的青绿苔草再生体系,为研究青绿苔草的遗传转化及应用生物技术育种奠定了基础。