内蒙古地区鸡源霉形体的分离和鉴定

本实验对内蒙古呼和浩特和包头地区某些鸡场病鸡取样进行霉形体的分离及其生物学特怀的研究。结果分离到３株霉形体,其中２株为鸡败血霉形体。所鉴定的菌株符合相应菌种的形态,染色特性及其他生物学特性的标准。     

四株鸡毒霉形体菌株对SPF鸡胚的致病作用

将ＭＧ不同菌株的培养物，经卵黄囊接种ＳＰＦ鸡胚，结果各菌株均能使鸡胚发生死亡，总死亡率在接种后３￣１３ｄ内达８２％，死胚经病变检查，菌检和分离物的血清学鉴定，证实系感染ＭＧ所致，测定了ＭＧＩｃ１菌株的不同接种量对鸡胚死亡的影响，发现它们之间没有密切关系。在ＳＰＦ源鸡体上致病力低下的二株ＭＧ菌株的鸡胚致死率为６０％￣９０％，反映出同一菌株对鸡体和鸡胚的致病力有差异。从部分死胚的卵黄、卵黄囊、绒毛尿囊     

江苏省鸡毒霉形体病的血清学调查

鸡毒霉形体病(Mycoplasma gallisepticum Disease)是鸡的一种接触传染性慢性呼吸道病,以呼吸道发生(口罗)音、咳嗽、流鼻液和窦部肿胀为特征,其病原为鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticura,MG),因病状发展缓慢,病程较长,故亦称为慢性呼吸道病(CRD)。该病对纯种鸡和1～2月龄青年鸡易感性高。1990年,我们对江苏省7个市常见的12个品种鸡群进行了临床和血清学调查,结果表明,MG感染已波及被检的25个禽场中的22个,共12个品种,平均感染率为48.5％,最高的鸡场达100％。     

鸡毒霉形体S6株的致弱研究

鸡毒霉形体（ＭＧ）中毒株Ｓ６在固体平板上的３次克隆后，在无细胞培养上基上传１００代以上进行致弱培养，用ＭＧＳ６Ｆ１０８株培养物在雏物和ＳＰＦ鸡胚上作６次回归感染，证明ＭＧＳ６Ｆ１０８不返强，通过气管环培养，纤毛运动损伤试验及对鸡点眼，滴鼻，工胸气囊注射不同代培养物（Ｆ１０８，Ｆ１４３，Ｆ１２１，Ｆ１５０，Ｆ１５３）检查气囊病变和病原体再分离，结果证明Ｆ１０８以上代次的菌株低毒，安全，且有较强的免疫     

秃鹫体内霉形体的分离和初步鉴定

在上海动物园一例死亡秃鹫的病例中，研究者通过样本采集，选择培养与纯化首先获得了两株秃鹫霉形体，同时进行了生化测定，血清学测定，红细胞吸附与抑制试验，病理切片光镜和电镜观察，药敏试验等获得初步鉴定结果，并说明该秃鹫霉形体感染严重。     

鸡败血霉形体致病性研究

本项研究以内蒙古地区分离株ＭＧ－Ｈ３和ＭＧ－ＢＲ１作为研究对象,以ＭＧ－Ｓ６作为参考对象,分别对２０ｄ龄雏鸡进行人工感染,８ｄ后以ＩＰ－Ｈ１２０作激发感染。结果试验鸡全部发病,呈现血清学反应阳性并伴有较明显的临床症状,病理剖检以呼吸道病变为主,心、肝、肺等器官也发生不同程度的损伤,攻毒２０ｄ后剖检全部鸡,气囊平均病变计分Ｈ３株为２．９,ＢＲ１株为２．３,Ｓ６株为２．８。     

进口种雏鸡败血霉形体的分离和鉴定

按进出口捡疫规程对乌鲁木齐市某养禽场引进的种雏进行鸡败血霉形体检疫表明,血清平板凝集试验阳性者占抽检总数的37％。选择血清学阳性滴度高且有轻微临床症状的雏鸡使用霉形体培养基进行分离,分离物的培养特性、生化特性、形态学以及血清学试验和L菌鉴别试验都符合鸡败血霉形体的特征,证实此批进口种雏携有鸡败血霉形体。     

兔致病性肺炎霉形体分离培养和鉴定

采集临床表现流鼻流、打喷嚏等慢性呼吸道疾病症状长毛兔的鼻液，临床剖检有可疑肺灶，分别接种牛肝汤培养液。置３７℃恒温箱培养２４小时至４８小时，用培养物涂片，瑞氏染色，显微镜检查。证明其是兔致病性的肺炎霉形体。     

内蒙古地区鸡源霉形体的分离和鉴定

本实验对内蒙古呼和浩特和包头地区某些鸡场病鸡取样进行霉形体的分离及其生物学特性的研究。结果分离到３株霉形体，其中２株为鸡败血霉形体（Ｍｇｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｕｍ，ＭＧ），１株为鸡霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｎａｒｕｍ）。所鉴定的菌株符合相应菌种的形态，染色特性及其他生物学特性的标准     

秃鹫体内霉形体的分离和初步鉴定

在上海动物园一例死亡秃鹫的病例中，研究者通过样本采集，选择培养与纯化首先获得了两株秃鹫霉形体。同时进行了生化测定，血清学测定，红细胞吸附与抑制试验，病理切片光镜和电镜观察，药敏试验等获得初步鉴定结果。并说明该秃鹫霉形体感染严重。     

鸡毒霉形体黏附素截短蛋白表达条件的优化

研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。     

滑液囊霉形体的分离鉴定与防治的研究

本研究从患病鸡跗关节和足垫中分离并鉴定了滑液囊霉形体，证实了邯郸市滑膜形霉形体的地方性流行，据流行病学调查该病与种鸡的垂直传播有关，该病经治疗收到良好效果，从而为预防和治疗该病寻求了有效途径。     

鸡毒霉形体感染的PCR检测方法的建立及应用

用多聚酶链反应检测了鸡毒霉形体种内菌株的特异性ＤＮＡ片段,并用该法对人工感染鸡及野外野群进行了ＭＧ感染的分子流行病学调查。结果表明,通过基因扩增及电泳,仅ＭＧ出现特生扩增条带,最低能检出１８ｐｇＭＧＤＮＡ,说明该方法具有很高的特异性和敏感性。人工感染６０只鸡,３ｄ后即可用ＰＣＲ查出ＭＧ阳性,６ｄ后１００％为阳性,对照鸡全部为阴性。与分离培养的结果完全一致。ＰＣＲ对野外鸡群的ＭＧ检出率为１０．５－３     

用HI试验检测鸡血清和卵黄中鸡毒霉形体抗体的研究

用超声波裂的鸡毒霉形体（ＭＧ）Ｓ６菌液作抗原建立了检测鸡血清和卵黄中ＭＧ抗体的血凝抑制（ＨＩ）试验，ＨＩ试验的敏感性比血清平板凝集（ＳＰＡ）试验提高了２－３２倍。ＨＩ中检出卵黄中ＳＰＡ试验不足以检出的ＭＧ抗体。以ＳＰＦ鸡血清、卵黄抗体、鸡滑液囊霉形体（ＭＳ）阳性血清作对照，证明无假阳性反应及交叉反应。     

鸡败血霉形体抗原基因的筛选和DNA电泳鉴定

应用鸡败血霉形体抗血清筛选鸡败血霉形体Ｓ６株基因文库,得到１７９个阳性克隆,不足重组噬菌体的１％。反复筛选后,获得５个强阳性克隆。抽提ＤＮＡ酶切鉴定,发现２个克隆的外源片段在５ｋｂ左右,另２个在２．５ｋｂ左右,一个为３．６ｋｂ,为特异抗原的制备和基因工程疫苗的研究打下良好基础。     

用HI试验检测鸡血清和卵黄中鸡毒霉形体抗体的研究

用超声波裂解的鸡毒霉形体（ＭＧ）Ｓ６菌液作抗原建立了检测鸡血清和卵黄中ＭＧ抗体的血凝抑制（ＨＩ）试验，ＨＩ试验的敏感性比血清平板凝集（ＳＰＡ）试验提高了２～３２倍。ＨＩ试验可检出卵黄中ＳＰＡ试验不足以检出的ＭＧ抗体。以ＳＰＦ鸡血清、卵黄抗体、鸡滑液囊霉形体（ＭＳ）阳性血清作对照，证明无假阳性反应及交叉反应     

鸡源霉形体PCR检测方法的研究

据基因库中鸡源霉形体16SrRNA基因序列，设计了一对跨幅为1026bp的引物，用这对引物对致病性鸡源霉形体MG，MS的DNA进行PCR扩增，结果扩增片段大小与设计相一致，而其它细菌扩增结果则均为阴性。     

鸡霉形体病的防治

鸡霉形体病又称慢性呼吸道病,是由鸡败血霉形体所致的鸡和火鸡的一种慢性呼吸道传染病.该病原体主要侵害呼吸道,以病鸡咳嗽、气喘、窦部肿胀、流鼻液、睑肿、流泪、肺部罗音为主要特征.1～2月龄鸡易感,死亡率高.该病虽一年四季均可发生,但在寒冷季节、天气突变、饲养密度过大和通风不良的情况下发病更为严重.幼雏发病或伴有其它应激因素或继发其它疾病时,死亡率可高达50%,且导致雏鸡发育不良,生长缓慢.成鸡患病,死亡率为5%～10%,严重时可达30%～40%,产蛋率下降10%～40%,孵化率下降10%～20%,弱雏率上升10%～20%.更为严重的是一旦流行该病,病程常常会延续1月或数月,给养鸡业造成很大威胁.因此,应特别重视该病的防治.