橘蚜传播柑橘衰退病毒的研究进展

就橘蚜传播柑橘衰退病毒（CTV）的传毒特性，传毒率，影响传毒率因素，与柑橘衰退病流行的关系，对混合株系的虫传分离作用以及带毒橘蚜的分子生物学检测等研究进展作一综述，橘蚜传播CTV的方式为非循回型半持久式，其从甜橙和墨西哥莱檬植株上传播CTV的效率高于棉蚜，橘二叉蚜和乡线菊蚜等蚜虫，橘蚜对CTV不同株系的传毒率有所差异，对重型株系的传毒率较轻型株系高，影响传毒率的因素有蚜虫发育虫态，毒源植物，接毒植物和环境条件等，对橘蚜与酸橙衰退病的发生与流行，特别是衰退型强株系衰退病的发生与流行有密切相关性，它是甜橙衰退病发生与流行的最主要传播介体，橘蚜对CTV具有分离株系的作用，通过单虫传播，可以将混合感染状态的CTV不同株系分离而获得纯化株系，检测橘蚜携带CTV的分子生物学反转录－聚合酶链式反应技术已建立，并已应用于检测橘蚜等蚜虫的单虫带毒情况，讲座认为，不同发育虫态，毒源植物，接毒植物和环境条件等因素对橘蚜传播CTV的影响，特别是毒源植物和温度条件对橘蚜传毒率的影响，及利用橘蚜单虫传播分离CTV株系等方面的研究有等进一步加强。     

褐色橘蚜中柑橘衰退病毒实时荧光定量 RT-PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,测定褐色橘蚜（Toxoptera citricida）中柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）含量。【方法】根据CTV CP25保守序列,设计特异性引物HD-F/R,通过优化得到最佳反应条件建立橘蚜中CTV实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性检验,评价该方法的可行性。应用该方法测定单头橘蚜中CTV含量。【结果】该实时荧光定量RT-PCR方法最低检测限为9.0拷贝/μL,其灵敏度是常规RT-PCR的100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关性系数为0.998,扩增效率达104.7%。批内和批间变异系数均小于3.24%,表明该方法重现性好。获毒24 h单头橘蚜中CTV最低含量为2.5×103拷贝,最高含量为1.24×106拷贝。【结论】本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测褐色橘蚜中的CTV,可用于研究褐色橘蚜-CTV-寄主互作关系及CTV的流行。     

抗柑橘衰退病毒基因工程研究进展

本文从选育和利用抗（耐）柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）的柑橘品种和砧木、弱毒株交叉保护、转基因诱导的CTV抗性等方面综述抗柑橘衰退病毒基因工程研究进展,并就人工miRNA（artifical microRNA,amiRNA）介导抗性加以展望,旨在为更好地控制CTV危害提供借鉴。     

柑橘衰退病毒株对两种橘蚜不同翅型取食行为的影响

为明确感染柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的柑橘对不同翅型橘蚜取食行为的影响,通过刺探电位图谱技术(electrical penetration graph,EPG)对褐色橘蚜和棉蚜在感染CTV植株上的取食行为进行持续记录,与健康植株进行比较分析。结果表明,褐色橘蚜无翅型在感病植株的参数均与有翅型无显著差异;棉蚜无翅型在感病植株上的非刺探波(no penetration,np波)和路径波(C波)的总持续时间、电势落差(potential drops,pd波)的次数均显著小于有翅型,C波和刺探的次数均极显著小于棉蚜有翅型。褐色橘蚜无翅型在感病植株上的pd波的次数和韧皮部分泌唾液波(E1波)的平均持续时间显著小于棉蚜无翅型;褐色橘蚜有翅型在感病植株上的C波的次数和总持续时间、刺探的次数、pd波的次数和总持续时间均极显著小于棉蚜有翅型,韧皮部被动吸食波(E2波)的总持续时间和平均持续时间均极显著大于棉蚜有翅型。褐色橘蚜无翅型在感病植株上的刺探和pd波的次数均显著高于健康植株,但总刺探时间相反,np波、C波和非韧皮部阶段的总持续时间极显著高于健康植株,E2波的总持续时间极显著短于健康植株。表明柑橘感病状态对无翅型和有翅型的影响是相似的;柑橘感染CTV对褐色橘蚜无翅型的取食行为影响明显,且偏好健康植株,从而促进病毒的传播。     

柑橘衰退病毒分子生物学研究进展

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)是对世界柑橘生产具有严重为害的重要病原物之一。近年来，CTV的分子生物学研究取得了很大的进展。本文综合有关文献，主要就CTV的基因组结构与功能、复制与表达及其分子诊断等方面进行综述。同时，本文简要指出了目前CTV分子生物学研究中存在的问题，并对研究前景做了简要展望，认为关于CTV的弱毒株系构建、弱毒系交叉保护机理、抗病毒基因工程等还有待进一步深入研究。     

褐色橘蚜在健康与CTV植株上的EPG比较

利用刺探电位图谱（EPG）技术对褐色橘蚜Toxopter acitricida （Kirkaldy）在健康与感染CTV的植株上的取食行为进行了比较研究.结果显示,褐色橘蚜在二者上均产生8种取食波形,分别为非刺探波（np波）、路径波（A波、B波、C波）、Pd波、韧皮部分泌唾液波（E1波）、韧皮部被动吸食波（E2波）以及木质部主动吸食波（G波）.刺探过程中,二者非刺探总时间（np波）存在差异;褐色橘蚜在健康植株上的刺探次数最多且C波的总持续时间最长,与感病植株差异显著.感病植株上,E1波的次数和持续时间均显著多于健康植株.褐色橘蚜在感病植株上E2波的总持续时间为（241.33±24.12 min）,显著长于在健康植株上（160.30 ±24.63 min）的持续时间.由此可初步推断,感染CTV的植株在一定程度上会增加褐色橘蚜获毒与传毒的几率.     

江西赣州柑橘衰退病毒种群构成变化研究

通过研究柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus, CTV)的种群构成,探究江西赣州纽荷尔脐橙上茎陷点型衰退病暴发的原因.从赣州的10个区县采集了199份疑似感染了CTV的纽荷尔脐橙样品,对阳性样品进行了8种基因型的检测,结果发现,有112份样品感染了CTV,且均含有2种及2种以上的基因型.最常见的基因型组合为T36+VT+T3+T30+S1+RB和T36+VT+T3+T68,分别占总数的13.4%和9.8%.与2004-2007年采集的CTV样品相比,2019-2020年采集的样品中新出现了RB, T30和HA16-5基因型,且T36和RB基因型的检出率显著上升.赣州CTV的种群结构发生了改变,RB和HA16-5基因型可能是引起赣州纽荷尔脐橙上茎陷点型衰退病暴发的原因.     

胡柚上柑橘衰退病毒的分子检测

胡柚是我国东部地区重要的柑桔栽培品种.近年来,一种以叶片黄化为主要症状的新病害在胡柚种植区暴发流行.通过血清学和分子生物学检测,研究首次从黄化的胡柚叶片中检测到柑橘衰退病毒.系统进化分析表明,分离的CTV CS-7分离物与P09.18、NZRB-TH30等分离物具有较近的进化关系,而与T30等强毒株系有较大的遗传距离,...     

柑橘衰退病毒基因RNAi载体的构建

基于转化病毒基因介导抗性,通过在植物表达载体p CAMBIA 2301上插入启动子–内含子–终止子的方式,构建一种含有发夹结构的、通用型强的RNAi载体骨架结构;以柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)的p25、p20和p23基因保守序列为模板设计正向片段和反向片段,先后与骨架载体连接,成功构建了3个RNAi载体(分别命名为ds2301–p25、ds2301–p20和ds2301–p23),并将载体ds2301–p23注射入墨西哥莱蒙叶片。制作p23基因的地高辛标记探针,用Northern杂交检测是否有si RNA产生。结果表明:用Northern杂交可以检测到p23特异的si RNA,在墨西哥莱蒙叶片中瞬时表达的农杆菌ds2301–p23可以发生RNAi,表达有效的si RNA。本研究中构建的骨架载体可以广泛用于RNAi载体的构建,含有柑橘衰退病毒基因片段的3个载体可以用于基因功能分析及具有CTV抗性的柑橘种质资源获得。     

中国野生柑橘上衰退病毒分离株分子特征分析

 【目的】了解中国野生柑橘上携带柑橘衰退病毒（CTV）分离株的CP/HinfⅠRFLP组群构成和分子特征。【方法】运用RT-PCR对采自中国云南、广西、四川、湖南、江西等省11个野生柑橘上CTV分离株的病毒衣壳蛋白基因(CPG)进行扩增，利用RFLP和SSCP对CPG进行分析，并将测定的CPG序列进行同源性比较和聚类分析。【结果】发现野生柑橘上11个CTV分离株以单一组群感染为主；这些CTV分离株CPG的核苷酸序列和相应的氨基酸序列同源性分别为92.5％～99.5％和95.0％～100％；与GenBank收录的9个全基因组CTV分离株的相应基因序列进行聚类分析，其核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为92.1％～98.8％和94.6％～100％。【结论】序列同源性比较说明CTV CPG具有高度保守性，同时系统进化分析表明收集到的野生CTV分离株与国外分离株分属5大类群，具有较复杂的亲缘关系。     

Phylogenetic Analysis of Citrus tristeza virus Isolates of Wild Type Citrus in China

The genetic variation and phylogenetic relationships of Citrus tristeza virus （CTV） isolates collected from Chinese wild type citrus were analyzed by comparing the sequences of nine genomic regions （p23, p20, p13, p18, p25, p27, POL, HEL and k17） with the CTV isolates of cultivated citrus from different countries. The results showed that the divergence pattern of genomic RNA of the CTV isolates from wild type citrus was similar to that of other isolates from cultivated citrus, the 3′ proximal region was relatively conserved, and the 5′ proximal region had greater variability. The nine genomic regions of CTV isolates analyzed were found to have been under purifying selection in the evolution process. Phylogenetic analysis showed that the eleven Chinese wild CTV isolates were located at different clades and did not relfect their geographical origins, suggesting genetic diversity among the Chinese wild CTV populations. These results will aid in the understanding of molecular evolution of the Chinese CTV populations.     

柑桔衰退病毒基因组学研究进展

柑桔衰退病毒(CTV)是柑桔普遍存在的一种重要病毒病害,因其自身基因变异和寄主的不同而产生不同的症状,给防治CTV带来一定困难.为防治柑桔衰退病,需要研究CTV本身的相关特征.从CTV的基因组学上的特征综述了国内外在CTV基因组学最新的科研进展.     

本地早柑桔衰退病毒病的交叉保护研究

1995～1996年从黄岩不同桔区的"本地早"(Citrus succosa)桔树采样,经指示植物墨西哥莱檬(Citrus auranti folia)鉴定,得到18个柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)分离毒株.根据茎陷点数/cm2划分,其中有弱毒分离株7株,中毒株5株和强毒株6株.网室试验的结果显示,在墨西哥莱檬上预先接种弱毒或中毒分离株后再以强毒株挑战接种的处理,其茎陷点数/cm2比仅接种强毒株的处理显著减少,其生长量也明显大于仅接种强毒株的植株,显示了明显的交叉保护作用.田间试验是以枳壳或以枸头橙为砧木的本地早,分别以不同毒性的CTV毒株接种后移植田间.在移植后第5～7年进行调查.结果证明,以弱毒或中毒分离株接种的植株,和以弱毒株预接种后再接种强毒株的植株,其3年的年均小果率均显著低于单接强毒株的植株,也显著低于未接种的田间植株.说明CTV弱毒株或中毒株的预接种对CTV的强毒株再侵染和田间毒株的自然侵染有明显的保护作用.同时,选择带弱毒株、中毒株和强毒株的田间定点病树各3株,连续3年调查产量及树体生长量.结果显示,感染弱毒株或中毒株的病树,产量高于重病树,小果率低于重病树,说明CTV的交叉保护现象在自然界存在.     

Characterization of Citrus tristeza virus Isolates by Indicators and Molecular Biology Methods

Citrus tristeza virus （CTV） exists in citrus as a large number of distinct strains differing in biological characters. The control strategies such as mild strains cross protection （MSCP） require a clear understanding of the characterization of CTV. For better understanding of the structure of CTV population and the relationship between molecular and biological characterization, 72 CTV samples collected from five provinces in China were studied, using biological indexing, p25/Hinf I restriction fragment length polymorphism （RFLP）, multiple molecular markers, and bidirectional RT-PCR assay. The mixture of severe stem pitting isolates was found to be dominant in the field. CTV isolates with p25/Hinf Ⅰ RFLP group 3 and p23/BD-PCR group Ⅰ, Ⅲ were the main cause of epidemics, and most CTV isolates were found to be the mixture of T30 and VT genotypes. More accurate identification of strain mixtures in the field and better understanding of the biological traits of the isolates may be achieved by applying the three molecular detection methods simultaneously.