藏绵羊肌红蛋白（Mb）基因克隆及肌肉Mb含量的测定

为探索藏绵羊适应青藏高原缺氧环境的分子机制,克隆了藏绵羊的肌红蛋白（Mb）基因,纯化了心肌Mb,同时比较了心肌和骨骼肌的Mb含量。用RT-PCR克隆了心肌Mb的cDNA,长度为640 bp,编码153个氨基酸。试验采用盐析、CM-Sephadex离子交换层析、Sephadex G-50凝胶层析等方法分离纯化了藏绵羊Mb,SDS-PAGE分析其分子量约为17kD。组织含量测定表明,藏绵羊心肌中Mb含量极显著高于骨骼肌。     

藏系绵羊对高寒环境适应性研究

藏系绵羊(Tibetan sheep)是分布于青藏高原上的特有家畜品种之一.采用RA(C)Ⅲ型密闭回流式呼吸测热装置,将温度控制在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃梯度内,测量不同温度下藏系绵羊呼吸频率及直肠温度.当环境温度为 12.45℃时,产热量最小值为267.60 KJ*d-1*w-0.75.藏系绵羊的热中性区是8～15℃ ,与其它地区绵羊相比(10～20℃),热中性区更为狭窄,且临界温度下限更低,从而表现出适应寒冷气候条件的生存特征.     

藏系绵羊对高寒环境适应性研究

藏系绵羊(Tibetansheep)是分布于青藏高原上的特有家畜品种之一。采用RA(C) 型密闭回流式呼吸测热装置,将温度控制在5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃梯度内,测量不同温度下藏系绵羊呼吸频率及直肠温度。当环境温度为12.45℃时,产热量最小值为267.60KJ·d-1·w-0.75。藏系绵羊的热中性区是8～15℃,与其它地区绵羊相比(10～20℃),热中性区更为狭窄,且临界温度下限更低,从而表现出适应寒冷气候条件的生存特征。     

关于藏绵羊高海拔地区适应性及生产性能研究

高海拔地区受自然环境限制,产业结构较为特殊,可适宜发展的畜禽很少。为了对高海拔地区藏绵羊的生长适应性和生产性能进行研究,本文通过具体生理指标分析,对草地性藏绵羊的生长情况进行了阐述,得出高海拔地区藏绵羊身体机理和繁殖特点,品种优质的适应性变化等。     

藏绵羊季节性生理生化指标研究

为了研究高原地区藏绵羊生理生化特性随季节性变化的规律,以四川省红原地区的藏绵羊为研究对象,按季度测定其生理生化指标。结果表明:(1)藏绵羊四季的体温为39.18~39.60℃,呼吸为27.20~49.04次/min,心率为91.87~106.25次/min;(2)WBC、MCV、MCH和MCHC等指标以秋、冬季极显著高于春、夏季(P0.01),而RBC、HCT和RDW-CV等指标以春、夏季极显著高于秋、冬季(P0.01),PLT在春、夏和秋季间差异不显著(P0.05),但极显著高于冬季(P0.01),HGB在四季中保持相对稳定;3)TP、ALB和GLO等指标以夏秋季极显著高于冬春季(P0.01),ALP和PCHE等指标以夏、秋季极显著低于冬、春季(P0.01),AST、ALT、LDH、GLU、CHOL和CA等指标在季节交替中保持相对稳定。     

藏系绵羊遗传多样性及其品种(系)分化的研究

以青海和甘肃省分布的8个藏系绵羊群体为对象，对其基因组DNA进行了RAPD分析。结果表明：群体内遗传多样性指数Ho值平均为0．37，总群体平均遗传多样性指数Hsp为1．51；藏系绵羊的遗传多样性75．5％分布在品种群间，24．5％分布在品种群内；品种内个体间的平均D值为0．0177（0．0152～0．0197）；品种群间的平均D值为0．0492（O．0419～O．0569）。现有藏系绵羊可划分为高原草地型（Altiplano Meadow Type，AMT）和山谷草地型（Valley Grassplot Type，VGT）两大类群。     

藏绵羊选育进展

从藏绵羊主产区选择藏绵羊优秀个体,组建选育核心群,通过采取综合选育措施,得出选育效果显著。     

若尔盖县牦牛及藏系绵羊寄生虫病调查

本文通过剖检20头牦牛和镜检30份新鲜藏系绵羊粪便,对若尔盖县牛羊进行了寄生虫病调查。结果表明:感染牛羊的寄生虫主要为前后盘吸虫、鞭虫、仰口线虫、绦虫和牛蝇蛆,其中前后盘吸虫的危害最大。     

藏系绵羊遗传多样性及其品种(系)分化的研究

以青海和甘肃两省分布的8个藏系绵羊群体为对象,对其基因组DNA进行了RAPD分析,结果表明群体内遗传多样性指数Ho值平均为0.37,总群体平均遗传多样性指数Hsp为1.51;藏系绵羊的遗传多样性75.5%分布在品种群间,24.5%分布在品种群内;品种内个体间的平均D值为0.0177(0.0152～0.0197);品种群间的平均D值为0.0492(0.0419～0.0569).现有藏系绵羊可划分为高原草地型(AltiplanoMeadowType,AMT)和山谷草地型(ValleyGrassplotType,VGT)两大类群.     

蒙古绵羊ghrelin cDNA的克隆及序列分析

根据GenBank中报道的绵羊ghrelin序列设计一对特异性引物，以蒙古绵羊真胃组织中提取的总RNA为模板，采用RT-PCR技术扩增出蒙古绵羊ghrelin的cDNA，并克隆到pTZ19载体中，经限制性内切酶谱和DNA序列测定，证实所克隆的蒙古绵羊ghrelin的cDNA为ghrelin的部分序列，因为用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊ghrelin序列进行对比，205个碱基中仅有1个碱基的差异，该差异不影响翻译后多肽的序列。该段cDNA包含由168个碱基组成的开放读码框（ORF），该ORF编码56个氨基酸残基的前原蒙古绵羊ghrelin。对蒙古绵羊ghrelin的研究将有助于进一步揭示其生理和病理功能，对反刍动物多种疾病过程的认识及防治策略具有深远意义。     

蒙古绵羊Ghrelin基因的克隆和原核表达

为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况.本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析.将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET-32a(+)连接,并转化BL21( DE3)大肠杆菌.经...     

甘南藏羊与滩羊等肌肉脂肪酸含量对比分析

甘南藏羊与滩羊脂肪酸含量分析,不饱和脂肪酸含量甘南藏羊高于滩羊（P〈0．05）,饱和脂肪酸低,为评价甘南藏羊肉用品质提供了理论依据。     

藏绵羊乳腺乳铁蛋白的克隆及序列分析

本研究以四川若尔盖县藏系绵羊为材料,利用RT-PCR方法扩增并克隆了藏绵羊乳铁蛋白(lactoferrin,LF)序列,运用生物信息学软件对其核苷酸序列和编码蛋白质的结构进行预测和分析。结果表明,克隆的LF基因全长2127 bp,共编码708个氨基酸,N端有19个氨基酸组成的信号肽,该蛋白质等电点为8.4,预测分子质量为77.2 ku;半定量RT-PCR分析结果表明,LF在乳腺、气管、淋巴、肝脏、泪腺和脾脏中都有表达,在肺脏中不表达。本试验克隆了藏绵羊LF cDNA全序列,并对LF和乳铁蛋白肽(lfcin,Lfc)核苷酸和蛋白质进行了分析,为进一步研究其生物学活性奠定基础。     

欧拉型藏绵羊GHRHR基因部分片段的克隆及多态性研究

对欧拉型藏绵羊生长激素释放激素受体(GHRHR)基因部分片段进行PCR扩增和克隆测序(GenBank Accession No:EU289218),利用BioEdit7.0.9.0、DnaSP 4.10.9和MEGA4.0等生物信息学软件对该部分序列与GenBank中普通牛、瘤牛、水牛相应序列进行比对分析,并对58只欧拉型藏绵羊该基因片段进行SmaI-RFLP研究。结果表明:欧拉型藏绵羊与普通牛、瘤牛、水牛3个物种基因序列间同源性大小依次为92.5%、92.0%、91.5%;4个物种间共发现41处序列间碱基差异(9.65/100 bp),其中藏绵羊与普通牛、瘤牛、水牛3个牛亚科物种均存在差异碱基29处。碱基变异类型主要表现为碱基转换和颠换,少数为碱基插入和缺失。推导的部分氨基酸序列间同源性大小依次为88.8%、88.8%、94.4%。58只欧拉型藏绵羊该基因片段SmaI-RFLP分析均为单态,表现为AA基因型。     

藏羊MSTN基因克隆、生物信息学及组织表达分析

【目的】对藏羊肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN)基因进行克隆和生物信息学分析,检测其在藏羊不同组织中的表达,为探究MSTN基因在藏羊中的生物学功能提供参考。【方法】以藏羊背最长肌组织cDNA为模板,克隆藏羊MSTN基因完整CDS区序列并测序,用SeqMan程序对测序结果进行拼接,并用BLAST在线程序对组装后的序列进行分析鉴定。用生物信息学软件进行相似性比对、系统进化树构建及生物信息学分析,用实时荧光定量PCR检测MSTN基因在藏羊不同组织中的表达量。【结果】藏羊MSTN基因CDS全长为1 128 bp,编码375个氨基酸。藏羊MSTN基因氨基酸序列与绵羊、牦牛、牛、猪、恒河猴、人、黑猩猩、犬、鸡及斑马的相似性依次为100.0%、93.4%、93.4%、95.2%、94.4%、94.2%、94.4%、93.1%、87.8%和87.5%;系统进化树分析结果表明,藏羊与绵羊的亲缘关系最近,与斑马和鸡的亲缘关系最远。藏羊MSTN蛋白属于亲水性分泌蛋白,且具有不稳定性,不含跨膜结构,含1个信号肽,存在31个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化修饰位点,主要分布在线粒体和细胞质中;MS...     

羊IL-1Ra基因全长cDNA克隆及生物信息学分析

试验旨在对羊白介素1受体颉颃因子（interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra）基因进行全长cDNA克隆及生物学分析。根据布鲁氏菌感染羊白细胞层SSH cDNA文库中的IL-1Ra基因序列信息及已知核苷酸序列（GenBank登录号：KC425613.1）设计引物,利用RT-PCR结合RACE方法扩增并克隆IL-1Ra基因,对其进行序列及相关分子特性分析。结果表明,羊IL-1Ra基因全长为1 228 bp,可编码174个氨基酸,含有1个完整的IL-1保守结构域和1个IL-1Ra结构域（PHA02651结构域）。IL-1Ra分子质量为19 765.8 u,等电点（pI）为5.72,其分子式为C₈₈₅H₁₃₈₅N₂₃₅O₂₅₆S₁₁,且含有信号肽。二级结构分析显示,IL-1Ra分子存在较多的β折叠及受体结合位点,与三级结构预测结果一致,且与人/鼠IL-1Ra分子的空间结构相似度极高,达到90%以上。羊IL-1Ra有IL-1特有的三叶草结构,其酶结合结构域位于TYR⁴⁷至GLU⁶⁶之间。将羊IL-1Ra与牛、虎鲸、宽吻海豚、猪、家犬、人、鼠等14个物种进行蛋白质同源性比对,发现在各物种间存在5个高度同源的半胱氨酸位点。系统进化树分析发现,羊IL-1Ra基因全长cDNA所编码的氨基酸序列同山羊、牛单独形成一个分支。本研究结果为今后深入研究IL-1Ra基因的生物学功能奠定了基础。     

Molecular Cloning and Characterization of CD9 cDNA from Sheep and Cashmere Goat

CD9 is a glycoprotein of the transmembrane 4 superfamily (TM4SF) and is involved in various cellular processes. Some CD9 cDNA have been cloned in mammals and certain fish genera in recent years, but goat and sheep counterparts of cattle, human and mouse have not been identified. To facilitate the studies, we cloned the cDNA encoding for CD9 of cashmere goat (Capra hircus) and sheep (Ovis aries), and expressed sheep CD9 in Escherichia coli cells. Structural analysis indicated for both goat and sheep that a 1123 bp cDNA spanned an open reading frame of 681 bp which predicted a protein of 226 amino acids with a typical TM4SF structure, including four highly conserved transmembrane domains, two extracellular domains and a CCG motif, which is a hallmark of the TM4SF. The predicted amino acid sequences were highly homologous to those of cattle, mouse and human CD9. Molecular phylogenetic analysis based on CD9 cDNA sequences indicated that goat and sheep CD9 were closely related to CD9 of cattle, which is in agreement with their morphological taxonomy.     

小尾寒羊YB-1基因全长cDNA克隆与原核表达

采用RT-PCR技术从小尾寒羊睾丸组织获得YB-1基因全长cDNA,并将其编码区重组于融合表达质粒pET32a中,经酶切和序列鉴定分析后,重组质粒在大肠杆菌BL21 plys（E）中经不同浓度IPTG诱导后获得表达,但表达量较低,且IPTG的浓度变化不影响目的蛋白的表达量。通过改变筛选抗生素,最终获得了目的融合蛋白的高效表达,为深入开展YB-1蛋白功能研究打下了良好的基础。