聚合酶链反应原理与操作(下)

5 扩增产物的测定和寡核苷酸探针扩增的 DNA 或在电泳过程后用溴化乙锭染色直接检出或与特异 DNA 探针杂交来检出。凝胶分析和两个杂交方法的优缺点列于表1中。直接凝胶电泳检出法简单,将扩增的 DNA 产物直接上样于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上,通过电泳分离,样品 DNA 可与已知大小的溴化乙锭染色后可见的 DNA 比较。但此法的不足之处:一是不敏感,许多阳性样品虽然可能有被扩增的 DNA 产物,但其量不足以用来直接显现;二是缺乏序列特异性,非特异的 DNA 也能被扩增,而且它们的泳动率和特异的扩增产物相似,因此,凝胶     

聚合酶链反应技术及其应用

聚合酶链反应（PCR）技术自1985年发明至今不断得到发展和完善,在常规PCR技术的基础上,结合免疫学、计算机技术、原位杂交等技术的利用和相关仪器的运用,衍生出了各种PCR方法和技术,如原位PCR、复合PCR、反向PCR、定量PCR、不对称PCR、电子PCR及PCR芯片等。这些衍生出的PCR新类型和新方法有着独特的技术特点,解决了以往传统PCR的局限性。PCR技术作为一种革命性的新技术将不断推动分子生物学及相关学科的发展,并广泛应用于病原诊断、基因表达、遗传病检测等生命科学研究领域。     

聚合酶链反应(PCR)法检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因

根据已报道的鱼源嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶基因序列设计和合成了 1对可扩增目的片段长度为 893bp的引物 ,建立了检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因 PCR方法。脱脂奶平板产溶蛋白圈的 10株鱼源嗜水气单胞菌株以及 ATCC796 6检测均为阳性 ,检测的灵敏度可达 2 .0× 10 - 3g/ L的模板 DNA。表明 PCR法在分子水平快速、特异检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶并可作为流行病学调查的手段     

聚合酶链反应(PCR)检测鸭瘟病毒方法的建立和应用

鸭瘟(Duck Plague，DP)是由鸭瘟病毒(DPV)引起的鸭、鹅等水禽的一种急性败血性传染病，发病率和死亡率都甚高，是危害养鸭业的最为严重的传染病之一。Baudet(1923)首次在荷兰报道鸭瘟，现该病呈世界性分布。目前实验室检测DPV的方法包括病毒分离鉴定、血清中和试验、反向被动血凝试验、琼脂凝胶沉淀试验、荧光抗体试验、微量固相放射免疫测定法、酶联免疫吸附试验(ELIsA)、核酸探针等”，这些方法用于感染DPV死亡鸭组织中病原的检测存在这样或那样的不足，     

应用套入式聚合酶链反应(Nested-PCR)检测蓝舌病病毒的研究

本实验建立了一种Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ方法。应用方法检测５株标准株蓝舌病病毒（Ｔ４、Ｔ１０、Ｔ１１、Ｔ１６、Ｔ２０）和５株国内蓝舌病病毒分离株（ＣＦ４、ＡＦ６、Ｚ１、Ｈ１、Ｇ１４）,检测结果均为阳性,而检测相关环状病毒（ＥＨＤ２、ＥＨＤ６、Ｉｂｒａｋｉ）,检测结果均生。研究证明,此方法可检测到３．５ｆｇ的ＢＴＶ－ＲＮＡ,灵敏度较高。该方法成功区分了蓝病病毒和相关环状病毒,比血清学方法更加优势,在临床     

应用聚合酶链反应技术检测沙门氏菌

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙门氏菌,使用了２对引物ＨＩ和ｐｈｏＰ。ＨＩ引物对各长２０ＮＴ,根据鞭毛Ｉ相抗原基因自行设计,扩增序列长２６９ｂｐ;ｐｈｏＰ引物对各长２１ＮＴ,根据ｐｈｏＰ／ｐｈｏＱ基因设计,扩增片段长２９９ｂｐ。ＰＣＲ采用５０μＬ反应体系。ｄＮＴＰＳ各１００μｍｏｌ／Ｌ,引物各１μｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,酶２Ｕ。三温段ＰＣＲ循环条件为：９７℃预变性７ｍｉｎ;９４℃变性６０ｓ、５５℃复性４０ｓ、７２℃延伸６０ｓ,３５个循环;７２℃延伸７ｍｉｎ。检测８株标准阳性菌,结果都出现了ＨＩ引物和ｐｈｏＰ引物特异带,标准阴性菌３株只出现ｐｈｏＰ特异带,说明ＨＩ引物特异性很强。     

应用聚合酶链反应检测口蹄疫病毒

聚合酶链反应(RT—PCR)是一种体外扩增 RNA 基因方法。农业部动物检疫所自1990年以来开始应用 PCR 技术检测口蹄疫病毒(FMDV)的研究。将 FMDV 的细胞培养物、疫苗以及乳鼠毒用 RT—PCR 进行扩增出 FMDV—RNA 的第2961位至3071位区间的 cDNA 片段,扩增片段用琼脂糖凝胶电泳迅速判定结果。用此方法对来自疫区的屠宰猪的样品进行检测,结果为阳性。RT—PCR 技术从样品处理到观察结果约需5～6小时,具有简便、快速、     

聚合酶链反应技术检测鹿结核病

为了确定我国屠宰鹿中结核病的流行情况,我们应用PCR法对国内某地屠宰鹿群的结核分枝杆菌感染情况进行调查。1材料与方法1.1标准菌及被检样品结核杆菌标准菌株购于哈尔滨生物制品一厂,被检样品为国内某地被屠宰的人工饲养梅花鹿全血共2批79份。1.2试剂及仪器Taq酶(5U/μL)、dNT     

动物适应性的原理(上)

动物适应性这一概念,关系到在某动物中的对内,对外刺激反应的遗传及生理的变化。遗传的适应性涉及自然选择和人工选择,而生理的适应性则要经过一个或长或短的时期在某个体内部发生的某些变化,生理适应性的概念,可能意指该动物对自身,对其他生活物质,以及对外界物质环境的调节能力和过程。适应性越强,则生存的动物更多和繁殖更多的后     

多重聚合酶链反应筛选方法的研究

本文提出了筛选多重聚合酶链反应的常用方法，根据该法将56个牛微卫星组成的21个多重聚合酶链反应组合，其中14个三微卫星组合，7个二微卫星组合，这些多重聚合酶链反应组合可用于大批量测定微卫星的试验，如基因定位及亲子鉴定等。     

聚合酶链反应在动物病毒检测中的应用

八十年代中期问世的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)技术,被认为是分子生物学发展的一个新的里程碑。PCR的主要特点是能在体外大量迅速地扩增所选定的核酸(指DNA)片段。PCR技术用于检测传染病时,只要样品中含有极少量的病毒(或细菌)     

聚合酶链反应快速检测钩端螺旋体

钩端螺旋体(简称钩体)病是一种人畜共患的自然疫源性疾病，猪、犬、牛是洪水型和雨水型的主要传染源”。对钩体进行及时监测，是防治钩体病大规模流行的重要措施。由于我国致病性钩端螺旋体有18个血清群74个血清型，其抗原变异性较大，若采用血清学方法进行快速侦检显然是不现实的，比     

聚合酶链反应在沙门氏菌检测中的研究进展

沙门氏菌是一种常见的病原菌,它不仅能导致鸡白痢、仔猪副伤寒、流产等动物疾病,还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒。在各地的食物中毒中,沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位。然而,沙门氏菌的检测长期以来缺乏一种简便、快速、敏感性高和特异...     

应用聚合酶链反应诊断魏氏梭菌病

应用聚合酶链反应 (PCR)建立了一种诊断动物魏氏梭菌病的方法。试验根据已报道的浕毒素基因设计ＰＣＲ引物建立其诊断方法。该方法特异性强 ,仅可检测出魏氏梭菌 ;敏感性高 ,每克粪便可检出 2× 10 5个菌。初步应有结果表明 ,所建立的PCR诊断方法适合于人和动物魏氏梭菌病的临床诊断和流行病学调查     

实时荧光定量聚合酶链反应原理和在预防兽医学中的应用及研究进展

聚合酶链反应(PCR)是检测核酸的强力方法。由于PCR技术简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究,成为分子生物学必不可少的研究工具。由于传统的PCR技术存在不能准确定量,且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点,使其应用受到局限。