鸡干扰素-γ的原核表达与生物活性

干扰素(IFN)是多功能细胞因子家族中的一员,在抗病毒和恶性肿瘤及增强免疫调节能力方面有明显效果,它分为Ⅰ型和Ⅱ型两类,Ⅰ型包括IFN-α和IFN-β等,Ⅱ型又称免疫干扰素IFN-γ,IFN-γ可增强巨噬细胞的吞噬活性及淋巴细胞对靶细胞的特殊细胞毒性[1].     

荣昌猪IFN-ω基因的克隆与序列分析

干扰素(IFN)是机体天然免疫防御系统中的一类细胞因子,是一类具有广谱抗病毒、增强动物对各种疾病的免疫力等多种生物学功能的蛋白质.目前发现的猪干扰素包括IFN-α、β、γ、δ、ω等 [1],其中研究较热的有IFN-α,IFN-γ,对IFN-ω的研究鲜有报道.IFN-ω是由5个以上的相关功能基因编码的 [2],蛋白质家族中与IFN-α亚型之间同源性很高,天然的IFN-α常常是IFN-α与IFN-ω功能基因表达产物的混合体.     

从江香猪源干扰素α2、β在生菜中的瞬时表达及其对PRRSV复制抑制作用的研究

为在生菜中瞬时表达从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β和IFN-β,检测其抗猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)的活性,本实验采用从江香猪源干扰素特异引物分别从p UCm-CJpoIFN-α2、p UCm-CJpoIFN-α2β、p UCm-CJpoIFN-β质粒中扩增IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β基因序列,分别克隆至植物表达载体p BI121中,构建含不同干扰素的重组质粒。将各质粒分别转化根癌农杆菌LBA4404,采用真空渗透法将携带重组质粒的根癌农杆菌感染生菜,经用GUS染色和ELISA方法检测从江香猪源干扰素在生菜叶片中的表达;用q PCR方法和细胞病变抑制试验检测生菜中表达的从江香猪源干扰素蛋白抗PRRSV的活性。结果显示:本实验构建了含从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β的植物表达载体PBI121-IFN-α2、PBI121-IFN-α2β、PBI121-IFN-β;GUS染色和ELISA检测结果显示从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中实现了瞬时表达;q PCR检测结果显示生菜中瞬时表达的从江香猪源干扰素蛋白在Marc145细胞中对PRRSV的复制有明显抑制作用;生菜中表达的从江香猪源IFN-α2、IFN-β、IFN-α2β分别经4~7、4~9、4~7稀释在Marc145细胞中仍然能够抑制100 TCID_(50)PRRSV的致细胞病变作用。本实验实现从江香猪源IFN-α2、IFN-α2β、IFN-β在生菜中的瞬时表达且表达蛋白具有较强抑制PRRSV的复制作用,本研究为从江香猪源干扰素抗PRRSV新复合型药物蛋白的开发利用提供参考依据。     

干扰素调节因子3调控Ⅰ型干扰素机制的研究进展

根据干扰素(Interferon,IFN)产生的来源,可将其分为2种类型。Ⅰ型IFN包括IFN-α家族和IFN-β,IFN-α主要是由病毒感染的淋巴细胞、单核巨噬细胞分泌;而大多数细胞都可以分泌IFN-β,但主要是由成纤维细胞分泌。Ⅱ型IFN是IFN-γ,由激活的T细胞和NK细胞在识别感染细胞的过程中产生。因此,在病毒感染早期,细胞对抗病毒的感染主要依赖于Ⅰ型IFN的分泌,其中干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF-3)对Ⅰ型IFN的产生起关键性作用。1 IRF-3的结构IRF-3是由427个氨基酸残基组成的、分子质量为55 ku的蛋白质。IRF-3…     

犬α-干扰素原核表达及其抗病毒活性检测

干扰素(interferon,IFN)是一类能诱导动物细胞产生多种广谱抗病毒蛋白的细胞因子,具有阻止病毒繁殖、调节机体免疫反应的生物学功能,是当今应用前景最为广阔的重要生物制剂之一[1-2]。干扰素按其细胞来源可分为α、β及γ3种类型,其中α-干扰素(IFN-α)是由能在脊椎动物各种类型的细胞中增殖     

鸡γ-干扰素在毕赤酵母中的表达及其生物活性检测

将鸡γ-干扰素(Ch IFN-γ)基因克隆至p PICZαA,以线性化质粒p PICZαA-IFN-γ电转化酵母GS115细胞,筛选出表达重组Ch IFN-γ(r Ch IFN-γ)的酵母菌株。r Ch IFN-γ通过离子交换层析纯化后,经水泡性口炎病毒(VSV)检测其抗病毒活性为10 240 IU/m L。以r Ch IFN-γ与H9亚型禽流感灭活疫苗联合免疫SPF鸡,使用r Ch IFN-γ试验鸡的血清HI抗体水平显著高于未使用r Ch IFN-γ试验鸡(P0.05);用H9亚型禽流感病毒攻击后,使用r Ch IFN-γ试验鸡排毒率显著低于未使用r Ch IFN-γ试验鸡(P0.05),说明r Ch IFN-γ具有佐剂的活性。     

牛IFN-α、IFN-β及IFN-γ mRNA实时SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立灵敏度高、特异性强、能够快速检测牛α-、β-、γ-干扰素(BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ)mRNA的实时荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γ基因序列,分别在其保守区内设计并合成特异引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)mRNA为内参,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。将BoIFN-α、BoIFN-β和BoIFN-γcDNA分别克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α内,经PCR及测序鉴定,将得到的阳性重组质粒制备成标准品,建立SYBR Green荧光定量PCR标准曲线并分析溶解曲线,进行灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明:BoIFN-α、BoIFN-β、BoIFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101copies/μL～1×107copies/μL内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,特异性和重复性较好。本研究建立的检测牛IFN-α、IFN-β和IFN-γmRNA的实时荧光定量PCR方法,为牛IFN mRNA水平上的定量分析奠定了基础。     

鹅α和γ干扰素基因的克隆及序列分析

从植物血凝素(PHA)刺激的鹅外周血白细胞提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增鹅IFN基因,将其克隆到pMD18-T载体中,进行序列分析.克隆到的鹅IFN-α和IFN-γ基因与GeneBank上已公布的鸭IFN核苷酸序列进行比较,其同源性分别为IFN-α96.70%、IFN-γ94.95%;氨基酸序列同源性分别为IFN-α93.72%、IFN-γ93.29%.这为进一步研究鹅干扰素的生物学特性和应用奠定了基础.     

羊干扰素α和γ融合表达及抗病毒活性分析

为进一步探究羊干扰素α和γ的抗病毒活性效果，根据GenBank羊IFN-α和IFN-γ基因序列，使用Linker连接合成目的序列，成功构建了3种重组表达质粒pET28a-OviIFN-γ、pET28a-OviIFN-α、pET28a-OviIFN-γ/α并进行原核表达。用细胞病变抑制法和RT-qPCR测定重组蛋白rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ的抗病毒活性。结果表明，rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ在牛肾细胞(MDBK)以及非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞中有抗病毒活性，且rOviIFN-α/γ的抗病毒效果最优；rOviIFN-α、rOviIFN-γ和rOviIFN-α/γ能够显著上调MDBK以及Vero细胞中4种干扰素刺激基因(IFN stimulated genes, ISGs)的mRNA转录水平，且rOviIFN-α/γ对干扰素刺激基因的上调水平最显著。综上所述，本试验表达的重组蛋白都具有抗病毒作用，其中串联表达的重组蛋白抗病毒活性以及干扰素刺激基因转录水平较高。     

急性热应激对小鼠肺组织中热应激蛋白和细胞因子基因表达的影响

为研究小鼠在急性热应激条件下肺组织中几种热应激蛋白(heat shock proteins,HSPs)及一些细胞因子基因表达水平的变化情况,通过实时荧光定量PCR的方法检测小鼠急性热应激前后肺组织中HSP27、HSP60、HSP70、HSP90、HSP110及白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、β干扰素(IFN-β)及γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平变化情况。结果显示,所有检测的热应激蛋白和细胞因子在热应激后0 h至2h过程中均极显著升高(P0.01),到4 h时恢复到正常水平。此试验结果为揭示急性热应激提高机体的抗病能力提供有价值的资料。     

甘草酸苷对体外小鼠单核巨噬细胞细胞因子分泌的影响

为研究甘草酸苷(GL)对小鼠单核巨噬细胞细胞因子分泌的影响,本实验以100μg/mL的GL溶液处理小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7),培养后收集培养上清,采用ELISA法测定其水平。结果显示,GL能够显著提高培养上清中IFN-α(p<0.01)、IFN-β(p<0.05)和IFN-γ(p<0.01)水平,降低促炎因子IL-1β(p>0.05)、IL-6(p<0.05)、IL-12(p>0.05)和CXCL10(p<0.05)含量,并增加TGF-β的分泌(p>0.05)。这表明,GL可以通过诱导小鼠单核巨噬细胞产生IFN-α、IFN-β和IFN-γ而发挥抗病毒作用,同时能够抑制促炎因子IL-1β、IL-6、IL-12和CXCL10的产生,并促进抑炎因子TGF-β的分泌,从而增强细胞的抗炎能力。本研究为进一步明确GL免疫调控作用机制提供了实验依据。     

干扰素、白细胞介素-2、新必妥组合治疗鸡新城疫试验

干扰素是由白细胞经特殊处理制得的一类低分子量(15～100ku)糖蛋白。干扰素可分为α、β、γ3种,即人白细胞干扰素(α-IFn)、人纤维母细胞干扰素(β-IFn)和人免疫干扰素(γ-IFn)。目前临床上已大量应用基因重组技术生产的α-干扰素,无抗原性,不能直接中和病毒,但进入体细胞后能与     

猪α+γ共表达干扰素在不同家蚕品种中的表达

本实验拟探索猪α+γ复合型干扰素(IFN-α+γ)共表达重组杆状病毒r Bm NPV(Bm-α+γ)在不同家蚕品种中的表达效率,以期筛选出较适合共表达猪IFN-α+γ的家蚕品种。实验分别对24个原种和7对杂交种共38个家蚕品种的蚕蛹接种重组杆状病毒r Bm NPV(Bm-α+γ),然后利用ELISA方法对猪IFN-α进行表达量检测和比较。结果显示不同家蚕品种对猪α干扰素的表达不同,日系原种的表达量要高于中系原种,且日系×中系杂交种组合普遍高于中系×日系杂交组合。     

RNAi沉默藏猪TGF-β1对PRRSV病毒复制和免疫的效应研究

转移生长因子-β1(Transforming growth factor beta 1,TGF-β1)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染宿主细胞的过程中发挥重要作用。基于此本篇通过RNAi技术从体外沉默藏猪外周血单核细胞(Tp-PBMCs)中TGF-β1基因表达并随即感染PRRSV为出发点,探究TGF-β1表达受抑对PR R SV复制、细胞活性以及免疫应答的影响。研究表明,随着TGF-β1基因表达的抑制,Tp-PBMCs中PRRSV复制被明显抑制,抑制率高达99.0%;细胞活性升高约150%~160%;并成功激活多个抗病毒免疫相关基因转录,其中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、α干扰素(interferon-alpha,IFN-α)、γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)、α肿瘤坏死因子(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、Toll样受体-3(toll-like receptor 3,TLR-3)的转录水平明显升高;而白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的mRNA水平明显降低。由此可见,用RNAi技术沉默TGF-β1基因表达不仅能抑制PRRSV的复制,还能激活免疫应答进一步抑制病毒感染的发生,从而为控制藏猪感染PRRSV提供了一条新的途径。     

抗鹅α干扰素单克隆抗体的制备及初步鉴定

以含有鹅α干扰素(IFN-α)基因的真核表达载体pcDNA3.1-GOWN-α免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤技术制备抗鹅α干扰素单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究.实验获得2株抗鹅IFN-α的单克隆抗体.经鉴定,Ig亚类均为IgM,轻链为κ链;腹水效价均达到10-4以上;Western blot证实2株McAb均能与重组IFN-α发生反应,出现特异性条带;其中一株单抗能与鹅脾细胞诱导产生的天然干扰素反应;杂交瘤细胞株连续传20代以上及冻存后复苏,细胞生长良好,效价稳定.抗鹅IFN-α单克隆抗体的制备,为研究和检测IFN-α提供了一种重要的手段,并为其在免疫机制研究、免疫功能检测、纯化IFN-α等领域提供了广泛的应用价值.     

鸭-干扰素在昆虫细胞中的表达

干扰素(Interferon,IFN)是活细胞在病毒或其他干扰素诱生剂作用下产生的一种糖蛋白,当它进入未感染的细胞时,可诱导该细胞产生抗病毒蛋白质,从而抑制其他病毒在该细胞中的复制[1]。干扰素具有抗病毒、抗肿瘤和调节免疫功能作用。无论哺乳类还是禽类,干扰素都有两大类型,即型(主要是α和β)和型(γ)干扰素。其中α干扰素(IFN-α)由白细胞产生。I型干扰素的抗病毒作用最强,主要是通过旁分泌发挥作用[2]。鸭I型干扰素基因是在1995年由Schults等成功克隆的[3,4]。他们使用已克隆的鸡型干扰素基因1(ChIFN1)作为探针,基因组DNA Southern杂…     

牛结核γ干扰素ELISA检测方法的建立及应用

为建立快速、敏感的牛结核分枝杆菌检测方法,本研究利用两株牛γ干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(MAb)建立检测牛IFN-γ的抗原捕获夹心ELISA方法。通过优化反应条件,确定抗体包被浓度为5μg/mL;全血刺激上清最佳稀释倍数为1∶2,作用时间为1 h;最佳酶标抗体作用时间为1 h;底物作用时间为15 min。该方法对重组牛IFN-γ的最小检测量可达25 pg/mL,对重组和天然牛的IFN-γ均具有特异性,与IFN-α、IFN-β或白细胞介素4为阴性反应;与山羊和绵羊的IFN-γ呈阳性反应,而与猪、鸡、鹿、犬和人的IFN-γ呈阴性反应。通过对177头牛进行检测,该方法与皮内变态反应的符合率为78.9%,与进口试剂盒的符合率为89.8%,表明该方法具有良好的应用价值。本研究为牛结核早期及其潜伏期感染的监测及流行病学调查提供了快速敏感的检测方法。     

黄芪多糖对猪瘟疫苗体液免疫和细胞免疫的影响

为查明黄芪多糖对猪瘟疫苗体液免疫IgG抗体与猪白细胞介素-4(IL-4)、猪干扰素-γ(IFN-γ)、猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)三种细胞免疫因子的影响,选用黄芪多糖注射液直接稀释高效猪瘟活疫苗(细胞源)的方法进行了免疫试验。证实了黄芪多糖直接稀释猪瘟活疫苗不但可以提高猪瘟疫苗IgG抗体水平,还可以提高猪干扰素-γ(IFN-γ)、猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,降低猪白细胞介素-4(IL-4)浓度,证明在使用猪瘟疫苗免疫防控中添加黄芪多糖可增强猪群免疫力,为控制猪瘟流行提供了依据。     

猪干扰素基因研究进展及其在抗病育种中的应用展望

干扰素是动物机体最重要细胞因子之一，目前计有5种猪干扰素(I型干扰素α、β、ω、δ和Ⅱ型干扰素γ)被发现。作者列举了主要猪干扰素(INFα、β、γ)的基因结构、抗病毒和免疫调节功能，概述了干扰素在机体中以JAK-STAT信号转导通路方式为主的抗病毒机理，同时分析了猪干扰素基因可能存在与猪综合抗病力密切相关的遗传多态性及其在猪抗病育种中的应用前景。     

牛干扰素的研究与应用进展

干扰素(IFN)是一类具有广泛生物学活性的蛋白质,具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种作用,是机体防御系统的重要组成部分。主要阐述了干扰素的诱生和功能研究,对牛IFN-α、IFN-γ和IFN-τ的生物学特性及应用研究进行概括综述。