西藏牦牛源枯草芽孢杆菌的分离培养及鉴定

从西藏健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌,并筛选出耐受性最好的菌株,并进行形态学观察、生化试验、PCR扩增、电泳检测、16s rRNA序列测定、构建进化树并进行同源性分析,对通过鉴定的枯草芽孢杆菌进行耐肠液、耐胆盐、耐高温等耐受性试验.结果显示:分离出疑似枯草芽孢杆菌4株,革兰氏染色为阳性;芽孢染色液染色菌体为...     

枯草芽孢杆菌MA139类细菌素抑菌活性的研究

为测定枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素的抑菌活性。本试验采用管碟法对枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素对多株革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的抑菌活性进行测定。结果表明:类细菌素不但对芽孢杆菌属的其他菌种有抗菌活性,对病原菌和霉菌也有拮抗作用;不同指示菌对类细菌素的敏感性不一样,其中金黄色葡萄球菌对其最敏感。该类细菌素具有广谱抗菌作用,有作为畜禽饲料添加剂的潜力。     

抗鸡源大肠杆菌的枯草芽孢杆菌鉴定及代谢产物理化特性研究

本试验采用鸡源大肠杆菌O2作为指示菌,对29株芽孢杆菌的发酵产物进行了抑菌效果检测,获得了4株抑菌圈在15mm以上的芽孢杆菌;在此基础上,对其代谢产物进行了抑菌谱的测定及理化稳定性试验,发现其中一株芽孢杆菌对革兰氏阳性、阴性细菌及真菌均具有良好的抑菌和杀菌效果,理化性质稳定,对鸡源大肠杆菌抑菌圈达到20mm以上;生理生化鉴定及16S rDNA测序结果显示该菌为一株枯草芽孢杆菌,命名为枯草芽孢杆菌GD株。     

饲用枯草芽孢杆菌表达系统研究进展

枯草芽孢杆菌是一种广泛应用于畜牧业生产的革兰氏阳性菌。随着现代生物技术的发展,利用重组枯草芽孢杆菌生产饲用酶、饲用活性代谢产物以及作为肠道益生茵成为热点研究领域。枯草芽孢杆菌表达系统是重组枯草芽孢杆菌的核心,论文对枯草芽孢杆菌表达系统的研究进展与存在问题进行了简要综述。     

牦牛源枯草芽孢杆菌分离培养与鉴定

为得到稳定性高、抗逆性强的枯草芽孢杆菌，试验从健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌，分离出4株枯草芽孢杆菌。之后进行形态学鉴定、多项生化鉴定、琼脂糖凝胶电泳试验。结果表明，革兰氏染色为蓝色棒状或杆状菌，生化鉴定符合枯草芽孢杆菌生化反应，确定为枯草芽孢杆菌，编号为BS-1,BS-2,BS-3,BS-4。通过耐胆盐、耐高温等耐受性试验，结果显示，BS-3整体耐受特性最好，在4株菌株中稳定性最高、抗逆性最强。结合试验目的，推断BS-3作为枯草芽孢杆菌益生菌制剂潜力较高。     

一株产抗菌脂肽芽孢杆菌筛选鉴定、产酶特性及其脂肽初步鉴定

为筛选可用于动物生产的优良枯草芽孢杆菌,试验通过抑菌性能筛选,从200余株分离自土壤、枯叶等材料的芽孢杆菌中筛选得到菌种S21,经分子生物学鉴定菌种S21为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);通过产酶定性分析,枯草芽孢杆菌S21产蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶;采用酸沉、醇提和半制备色谱对S21产抗菌脂肽纯化,利用ESI-TOF-MS对纯化出的抗菌脂肽进行鉴定,鉴定抗菌脂肽为surfactin家族抗菌脂肽;抑菌试验分析显示枯草芽孢杆菌S21产抗菌脂肽对革兰氏阳性、革兰氏阴性和霉菌都有抑制效果,热耐受性和酸碱耐受性好。综上所述,枯草芽孢杆菌S21有用于动物生产的潜力。     

蜂王浆抗革兰氏阳性菌的特性研究

以枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、四联球菌作为对象菌,利用抑菌圈试验法研究了蜂王浆抗革兰氏阳性菌的特性。实验结果表明：蜂王浆对3种供试革兰氏阳性菌都具有抑制作用,其抑菌活性随浓度的增加而增加;在所试验的pH值范围内（3．0-9．0）,蜂王浆对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄都表现出了抑制作用,而只有当pH值分别为9,4,3时才对四联球菌表现出抑制作用。蜂王浆的抑菌活性随贮存温度和贮存时间的变化而变化,在-20℃～25℃时贮藏15d后,蜂王浆对枯草芽孢杆菌的抑菌性能将会明显下降;在-20℃贮藏25d后以及在5℃、15℃、25℃贮藏15d后,蜂王浆对金黄色葡萄球菌的抑菌活性会显著下降;蜂王浆对于四联球菌的抑制作用似乎更稳定,在所试验的温度范围及时间范围内,其抑菌活性未出现显著下降。蜂王浆的抗菌成分主要是醚溶物和水溶物,而醚水不溶物不具有抑菌活性。该结果对蜂王浆抗菌物质的进一步开发利用提供了前期基础。     

驴源枯草芽孢杆菌分离鉴定及生物学特性

为分离驴源具有抑菌活性的优良芽孢杆菌,本试验通过分离培养和形态观察,从健康驴新鲜粪便样品中分离芽孢杆菌,采用牛津杯法初步筛选具抑菌活性目标菌株,并进行生理生化和分子鉴定,研究其产酶活性、抑菌活性、耐酸性和耐胆盐性能、药物敏感性。结果显示：筛选到两株对金黄色葡萄球菌有强抑制作用的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,编号分别为LV1和LV2。两菌株具有很强的耐酸、耐胆盐特性,能产淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶,并对检测用9种抗生素都敏感。结果表明,两株驴源枯草芽孢杆菌LV1和LV2具备良好的抑制金黄色葡萄球菌、产酶和耐酸、耐胆盐等益生活性,可作为研发驴用微生态制剂的潜在益生菌菌株。 [关键词] 驴|枯草芽孢杆菌|金黄色葡萄球菌|微生态制剂     

东亚飞蝗抗菌活性物质的萃取及抗菌效应研究

试验研究东亚飞蝗成虫抗菌活性物质的萃取参数与抑菌效应。采用针刺蘸大肠杆菌菌悬液方法,以抗菌活性为指标,用杯碟法测定临床多重耐药菌的抑菌活性,确定最佳诱导时间,初步研究抗菌谱。结果表明,东亚飞蝗抗菌活性物质粗提液对革兰氏阳性菌(如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)或革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、水稻白叶枯病原菌)均有一定的抑制作用。其抗菌谱为:金黄色葡萄球>水稻白叶枯病原菌>枯草芽孢杆菌>大肠杆菌,其中以对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最明显。抗菌活性物质浓度为11.782mg/mL,蝗虫抗菌活性物质收率为8.623%。经纯化后的抗菌活性物质增强对革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌的抑制作用。采用针刺蘸大肠杆菌方式可成功诱导东亚飞蝗抗菌物质的表达,尤其以针刺蘸大肠杆菌诱导后饲养24h得到的抗菌活性物质抑菌活性最强。结果表明东亚飞蝗虫体内含有抗菌活性物质可被诱导表达,其抗菌作用机理有进一步研究。     

枯草芽孢杆菌细菌素的分离、表达及稳定性分析

旨在分离枯草芽孢杆菌及其所产细菌素,并分析重组表达后的细菌素的抑菌活性和稳定性。通过牛津杯扩散法筛选羊驼粪便中高产细菌素的芽孢杆菌;借助16S rRNA鉴定分离菌;采用硫酸铵沉淀、氯仿抽提、SDS-PAGE、质谱分析等技术获得细菌素的氨基酸序列;利用大肠杆菌表达系统对细菌素进行体外表达,并利用牛津杯扩散法测定其抑菌活性和稳定性。结果显示,分离菌是一种枯草芽孢杆菌,命名为枯草芽孢杆菌SXAU18,其可产生抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、藤黄微球菌和单增李斯特菌生长的细菌素;枯草芽孢杆菌SXAU18所产细菌素可能是分子量为10～20 ku的DarA蛋白和两种未知蛋白,属于类细菌素的范畴,将未知蛋白分别命名为BLIS SXAU181和182;经原核表达的BLIS SXAU181和182主要以可溶性上清蛋白形式表达,纯化后为单一条带;重组BLIS SXAU181蛋白没有抑菌活性,重组BLIS SXAU182蛋白具有良好的抑菌活性,且具有耐高温、耐酸碱、耐人工胃液和肠液的的特性。综上,本研究从枯草芽孢杆菌SXAU18分离到具有抑制革兰阳性菌生长活性的细菌素,且重组表达后的BLIS SXAU18...     

抑菌肽在枯草芽孢杆菌中的构建表达、抑菌特性及发酵条件优化

本研究从蚯蚓中克隆得到抑菌肽基因ew T1,将其构建在枯草芽孢杆菌表达载体p HT43中得到重组质粒p HT43-ew T1,并转化至枯草芽孢杆菌蛋白酶缺陷型菌株WB800N中,得到重组菌,然后进行诱导表达以及发酵条件优化。优化后的重组菌发酵上清液对猪粪大肠杆菌的抑菌效价为47,362U/m L。蚯蚓抑菌肽基因ew T1可以在枯草芽孢杆菌中实现异源表达,为枯草芽孢杆菌抑菌肽分泌表达系统的进一步优化奠定了基础。     

瘤胃源枯草芽孢杆菌BX1-12的筛选鉴定及其产酶抑菌活性

本试验通过筛选瘤胃环境中具产酶抑菌活性的芽孢杆菌,为开发功能型饲用微生态制剂奠定基础。采用可培养的方法从健康高产奶牛瘤胃液中分离芽孢杆菌,并测定其产酶能力及抑菌活性,同时对筛选到的功能菌株进行生理生化和分子生物学鉴定。结果显示：从健康高产奶牛瘤胃液中筛选出一株芽孢杆菌BX1-12,其产纤维素酶、蛋白酶及α-淀粉酶活力分别为27.33、137.54 U/mL和1450.53 U/100 m L,同时该菌具广谱抑菌效果,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的抑菌圈直径分别为13.62、23.21 mm和25.97 mm。结合Biolog生理生化实验及16S rRNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。综上,从健康高产奶牛瘤胃液中分离得到的这株枯草芽孢杆菌BX1-12,具有产多种酶活及广谱抑菌的能力,是一株良好的用于奶牛微生态制剂的候选菌株。     

抗菌肽Abaecin的表达及生物活性的研究

在枯草芽孢杆菌中表达抗菌肽Abaecin,并鉴定表达产物的生物学活性,以判定其能否开发为口服药物和饲料添加剂。通过Western blot方法检测目的基因表达情况;采用琼脂扩散法检测表达产物的生物活性。结果表明:抗菌肽Abaecin在枯草芽孢杆菌中成功表达,并有效地分泌至细胞外。体外抑菌实验结果表明,表达产物Abaecin对革兰氏阴性菌有抑菌活性,并且在不同温度37～100℃、pH2～9和酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K)的条件下,仍能保持抗菌活性,证实表达产物可以抵抗动物消化系统的降解。枯草芽孢杆菌简便快捷地表达了抗菌肽Abaecin,并且表达产物有开发为口服药物和饲料添加剂的前景。     

牡丹内生真菌高抑菌活性菌株的筛选及培养基优化

为了从牡丹内生真菌中筛选具有高抑菌活性的菌株,并对其发酵培养基进行优化,试验采用测量抑菌圈的方法,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌株,筛选一株抑菌活性最强的菌株并通过正交试验对培养基各营养组分进行优化。结果表明:抗菌活性菌株筛选发现,JYH4的抑菌圈直径最大;优化后的培养基组分为葡萄糖6%、蛋白胨6%、磷酸氢二钾0.5%。说明JYH4具有较高的抑菌活性,在优化后的培养基中对枯草芽孢杆菌的抑菌效果更为显著,其抑菌圈直径达到18.77 mm。     

一株益生芽孢杆菌Pab02的16S rDNA测序鉴定

利用16S rDNA分析对Pab02芽孢杆菌型益生菌进行系统进化鉴定.首先提取菌株Pab02的基因组DNA,根据不同种属细茵的16S rDNA序列两端的保守性设计通用引物,对茵株Pab02的16S rDNA的进行PCR扩增,并对扩增到的目标片段进行测序.将测序结果与NCBI上已知茵种的16S rDNA序列进行BLAST对比,初步构建系统进化树进行分析,再结合传统的形态观察及生理生化特性综合鉴定.最终确定为枯草芽孢杆菌.     

盐穗木活性成分的提取及抑菌效果研究

为了解盐穗木的药用性能,试验将盐穗木全草经乙醇提取得到总浸膏,结合药敏试验对其进行效价测定。结果表明:盐穗木总浸膏对大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有一定的抑菌活性,对酵母菌、链球菌、普通变形杆菌无抑菌作用;不同季节盐穗木总浸膏的抑菌活性无差异。进一步提取得到有机酸、生物碱、酚类3种物质进行试验,结果有机酸与酚类抑菌作用不明显,生物碱有一定的抑菌作用。利用不同有机溶剂对生物碱进行分离,结果乙酸乙酯相抑菌活性明显,其他分离相抑菌效果均不明显。乙酸乙酯对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为7.8 mg/mL,对大肠埃希杆菌的最小抑菌浓度为15.6 mg/mL。总浸膏对大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为31.2 mg/mL。     

蜂王浆抗菌作用的初步研究

以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和啤酒酵母为供试菌株 ,用抑菌圈实验法研究了蜂王浆的抗菌活性 ,结果表明蜂王浆对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有明显的抑制活性 ,而对啤酒酵母的生长没有抑制 ;蜂王浆提取物的抑菌实验结果表明 :蜂王浆中含有不同的抑菌活性物质     

牛类芽孢杆菌BD3526发酵液中抗菌物质的特性及初步分离

牛类芽孢杆菌BD3526在组合培养基中培养发酵48 h,对发酵液中的抗菌物质进行特性研究及初步分离。蛋白酶处理结果表明,牛类芽孢杆菌BD3526发酵上清液含有肽类抗菌活性物质,且具有良好的热稳定性、耐酸碱性。通过对抗菌物质特性的研究发现,其对选取的革兰氏阳性菌具有较强的抑菌活性,而对选取的革兰氏阴性菌没有抑菌活性。通过Sephadex LH-20凝胶柱层析初步分离纯化发现,牛类芽孢杆菌BD3526产生的抗菌物质与麸皮发酵液中产生的抗菌物质有所不同,表明可能有新的抗菌物质产生。     

青贮用拮抗黄曲霉并降解黄曲霉毒素菌株的筛选与鉴定

为筛选一株用于青贮的拮抗黄曲霉且能够降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的芽孢杆菌菌株,本试验以香豆素为唯一碳源和能源进行菌株的初筛,以抑菌活性、AFB1降解率试验进行菌株的复筛。通过形态、生理生化特性以及16S r DNA序列分析对抑菌、毒素降解活性最好的菌株进行种属鉴定,并研究其对p H和温度的耐受性。结果表明:初筛获得45株能在以香豆素为唯一碳源和能源的培养基上生长的菌株,复筛发现N-1a对黄曲霉具有较强抑菌活性,对AFB1的降解率达到95%,并且对温度和pH具有良好的耐受性,最后鉴定N-1a菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

不同芽孢杆菌对雏鸡细菌性腹泻病原菌的体外抑菌试验

研究不同芽孢杆菌对雏鸡细菌性腹泻病原菌的体外抑菌作用。采用稀释分离法从不同来源的样品中分离得到芽孢杆菌菌株41株;以3种雏鸡细菌性腹泻病原菌为指示菌,采用牛津杯法进行体外抑菌试验,发现6株菌株对病原菌均具有明显的体外抑菌作用,抑菌效果最好的为菌株B332,其次为菌株D4;经形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析,菌株D4和B332应分别归属于巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。