家兔脑缺血再灌注损伤后边缘系统一氧化氮合酶活性的变化及血塞通对其变化的影响

为了研究家兔脑缺血再灌注损伤后边缘系统一氧化氮合酶(NOS)活性的变化及血塞通对其活性变化的影响,探讨血塞通对全脑缺血家兔的脑保护作用.选取3月龄哈白兔63只,体质量(1500±150)g,随机分为脑缺血治疗组,脑缺血未治疗组和对照组3组,手术建立家兔全脑缺血模型,应用生化检测技术测定脑缺血再灌注后不同时间边缘系统NOS活性变化及血塞通对其活性的影响.结果表明,边缘系统内NOS活性在脑缺血再灌注2 h后开始升高,6 h达到高峰,随后逐渐下降,24～96 h活性持续下降,120 h后恢复至正常水平;脑缺血治疗组下降幅度大、速度快,在96 h即恢复至正常水平.缺血治疗组和正常对照组NOS的活性极最著低于缺血未治疗组(P<0.01).结果提示,血塞通可以通过减弱NOS活性进而维持NO的生理含量,对全脑缺血再灌注损伤家兔有明显的脑保护作用.     

血塞通及L-硝基精氨酸对脑纹状体出血家兔一氧化氮合酶活性、一氧化氮含量的影响

为了研究家兔脑纹状体出血后一氧化氮合酶(NOS)活性和一氧化氮(NO)含量的变化及L-NNA和血塞通对其变化的影响,探讨NO在脑出血损伤中的作用机制及2种药物对脑神经元的保护作用.选取4月龄健康哈白兔56只,随机分为假手术对照组、模型组,脑纹状体出血血塞通治疗组及脑纹状体出血L-NNA治疗组,手术建立家兔脑出血模型,应用生化检测技术测定各组脑纹状体出血后不同时间出血侧纹状体NOS活性及NO含量.结果表明,模型组脑纹状体内NOS活性6h开始升高,3d达到高峰,随后逐渐下降,9d时基本恢复至正常水平；2治疗组纹状体NOS活性在各时间点极显著或显著低于模型组(P＜0.01或P＜0.05),并且L-NNA在6h～1d时降低脑纹状体NOS活性的程度好于血塞通治疗组(P＜0.05)；NO含量的变化与NOS活性的变化基本一致,二者成正相关；利用SABC免疫组织化学法方法检测各组脑纹状体神经型NOS(nNOS)阳性神经元,发现模型组纹状体nNOS阳性神经元密度增加,细胞着色加深,胞体截面积和最长突起长度变小,经过治疗后神经元密度降低,胞体截面积和最长突起长度显著改善(P＜0.05).结果提示:NO参与了脑出血损伤过程,高浓度的NO能发挥神经毒性作用损害脑组织；血塞通和L-NNA通过抑制NOS的活性,降低了脑纹状体NO的含量,对脑出血家兔的脑神经元具有明显的保护作用.     

葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注的保护作用

目的:研究葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌的保护作用,研究相关机制。方法:大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血再灌损伤模型,缺血1.5h再灌注18h后,观察大鼠的神经功能损害并评分,测定脑梗死体积和脑含水量,检测氧自由基(ROS)及Caspase-3的生成。结果:葛根素能显著缩小脑缺血再灌注后的梗死范围,降低脑水肿的程度,降低Caspase-3的活性。结论:葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有显著的保护作用,可能与Caspase-3酶活性有关。     

金属硫蛋白在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用

采用股动脉放血并双侧颈总动脉夹闭的全脑缺血再灌注模型,测定缺血10min再灌注后6h、1d、3d、5d脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH Px)活力及丙二醛(MDA)含量,以探讨金属硫蛋白-1(MT 1)对实验性脑缺血再灌注的神经保护作用。结果表明:在对应的各时间相,老年组SOD及GSH Px的活性均显著低于青年组(P<0 05);MDA水平显著高于青年组(P<0 05);而MT-1可显著提高SOD及GSH Px的活性、降低MDA的水平(P<0 01)。本实验证明MT 1对脑缺血再灌注有明显神经保护作用。     

三七皂苷对猴子上肢缺血再灌注的临床应用

目的:观察临床上三七皂苷对猴子前肢缺血再灌注损伤后治愈率修复和细胞凋亡的影响。方法:通过分组(三七治疗组、常规治疗组)治疗15例被笼底板卡住的猴子,前臂缺血再灌注治愈情况的比较,说明临床上用三七皂苷治疗肢体缺血再灌注效果显著;对细胞凋亡有一定保护作用。结果:与对照组比较,总有效率差异有显著性意义(P0.05)。结论:三七皂苷对猴子前肢缺血再灌注损伤有良好的保护作用。     

硫辛酸对海马CA1区锥体细胞凋亡的抑制作用

采用股动脉放血并双侧颈总动脉夹闭制作全脑缺血再灌注模型 ,于术后 1 d处死动物 ,取脑 ,制作石蜡切片 ,通过 HE染色、Tunel检测 ,以观察海马 CA1区锥体细胞的损伤形式 ,并探讨α-硫辛酸 (α-lipoic acid,L A)对实验性脑缺血再灌注的神经保护作用。结果表明 :在短暂性全脑缺血中 ,海马锥体细胞存在着凋亡和坏死两种死亡形式 ;与对照组相比 ,缺血再灌注后1 d,海马 CA1区损伤较重 ,出现了较多的凋亡细胞 ,而 L A可明显抑制锥体细胞的凋亡。实验证明 :在脑缺血再灌注损伤中 ,细胞凋亡是神经元死亡的一种重要形式 ;L A对脑缺血再灌注有明显神经保护作用     

硫辛酸在大鼠全脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用

采用股动脉放血并双侧颈总动脉夹闭的全脑缺血再灌注模型 ,测定缺血 10 min再灌注后 6 h、1d、3d、5 d脑组织中超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)活力及丙二醛 (MDA)含量 ,以探讨硫辛酸 (α- lipoicacid,L A)对实验性脑缺血再灌注的神经保护作用。结果表明 :在对应的各时间相 ,老年组 SOD及 GSH- Px的活性均显著低于青年组 (P<0 .0 5 ) ,MDA水平显著高于青年组 (P<0 .0 5 ) ;而 L A可显著提高 SOD及 GSH- Px的活性 ,降低MDA的水平 (P<0 .0 1)。试验证明 ,L A对脑缺血再灌注有明显的神经保护作用     

多烯磷脂酰胆碱对家兔肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:探讨多烯磷脂酰胆碱对家兔肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:15只中国白兔随机分成假手术对照组、肝脏缺血-再灌注模型组和多烯磷脂酰胆碱干预组,检测肝脏微循环中滞留的白细胞数量、血清ALT、AST和LDH含量,观察肝脏的病理变化。结果:模型组肝脏微循环中滞留的中性粒细胞数量、血清ALT、AST和LDH含量明显高于对照组(P0.05),肝细胞弥漫性水泡变性和散在坏死;干预组肝脏微循环中滞留的中性粒细胞数量、血清中ALT、AST和LDH含量均明显低于模型组,肝脏病理变化轻微。结论:肝脏缺血-再灌注可导致肝细胞弥漫性水泡变性和散在性坏死,多烯磷脂酰胆碱对肝脏缺血-再灌注损伤有明显保护作用。     

N-乙酰L-半胱氨酸预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护机制

制备大鼠局灶性脑缺血再灌注实验模型,通过N-乙酰L-半胱氨酸（NAC）预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用,探索脑梗死病理过程及药物治疗途径。NAC预处理21d,利用栓线法建立大鼠大脑中动脉栓塞模型,造模后24h进行神经症状评分,TTC染色,检测血浆MDA、GSH含量,观察大脑皮质细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果显示,通过神经症状评分和TTC染色判定大鼠局灶性脑缺血实验模型建立成功。与对照组相比,NAC预处理组（100mg·kg^-1）大鼠血浆中MDA含量显著降低（P〈0.05）,GSH含量显著升高（P〈0.05）;NAC模型组细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值明显低于对照组。结果表明,NAC通过改善氧化应激状态,调控凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达,从而对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。     

金属硫蛋白对海马CA1区锥体细胞凋亡的抑制作用

采用股动脉放血并双侧颈总动脉夹闭制作全脑缺血再灌注模型 ,于术后 1d处死动物 ,取脑 ,制作石腊切片 ,通过 HE染色、Tunel检测 ,对海马 CA1 区锥体细胞形态进行了观察。结果表明 :在短暂性全脑缺血中 ,海马锥体细胞存在着凋亡和坏死 2种死亡形式 ;与对照组相比 ,缺血再灌注后 1d,海马 CA1 区损伤较重 ,出现了较多的凋亡细胞 ,而MT- 1可明显抑制锥体细胞的凋亡。本试验证明 :在脑缺血再灌注损伤中 ,细胞凋亡是神经元死亡的一种重要形式 ;MT- 1对脑缺血再灌注有明显神经保护作用     

西洋参皂苷对新生鼠缺血-再灌注心肌细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨西洋参皂苷对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响,及抑制心肌细胞凋亡的机制。方法:利用原代培养的乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注模型;采用MTT、TUNEL法检测心肌凋亡细胞;Western blot检测caspase-3,caspase-9蛋白的表达。结果:缺血再灌注组出现心肌凋亡细胞;caspase-3,caspase-9的表达缺血再灌注组较对照组明显增加(P0.05),PQS治疗组较缺血再灌注组明显下降(P0.05)。结论:心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,PQS治疗可以显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡。PQS通过抑制caspase-3;caspase-9,而抑制心肌细胞凋亡。     

去卵巢及雌激素替代治疗后家兔海马nNOS阳性神经元的形态结构及分布变化

用SABC免疫组织化学技术,观察家兔海马各区nNOS阳性神经元在去卵巢及雌激素替代治疗后的形态结构及分布变化,为雌激素类药物防治绝经后老年性痴呆症提供理论依据。结果表明,家兔海马各区都有nNOS阳性神经元分布;去卵巢后海马nNOS阳性神经元的形态结构及分布变化有区域差异性:与假手术对照组相比,在海马CA1区、CA3区、齿状回(DG)阳性神经元数量明显减少(P0.05),而在CA2区数量明显增多(P0.05)。CA1、CA3区和DG的阳性神经元胞体截面积明显变小,最长突起长度明显变短,第一级突起数变少,与假手术组有显著差异(P0.05)。CA2区阳性神经元胞体截面积明显变小(P0.05),最长突起长度、第一级突起数增多,但差异不显著(P0.05);nNOS阳性神经元的4种指标在雌激素替代治疗组与假手术组之间无显著差异(P0.05)。结果提示:雌激素可能通过影响海马nNOS的表达来影响脑的学习和记忆功能。     

脑缺血再灌注损伤机制及蜂胶抗脑缺血再灌注损伤研究进展

蜂胶对脑缺血再灌注损伤具有显著的神经保护作用,国内外学者已经对此展开了广泛而深入的研究。本文对脑缺血再灌注损伤的机理,现有实验模型和蜂胶对缺血再灌注损伤的作用效果及作用机理进行了综述,并对今后的研究重点进行了展望。     

拉莫三嗪及L-硝基精氨酸对颞叶癫痫一氧化氮合酶活性、一氧化氮含量及nNOS阳性神经元形态结构的影响

通过测得家兔颞叶癫痫模型中一氧化氮合酶(NOS)的活性和一氧化氮(NO)的含量,研究L-NNA和拉莫三嗪对其含量变化的影响,探讨NO在颞叶癫痫中的发作机制及这两种药物对脑部神经元的保护作用。选取2.0~2.5kg健康哈白兔60只,随机分为正常对照组、癫痫模型组、拉莫三嗪治疗组和L-NNA治疗组,应用硝酸还原法测定癫痫发作后不同时间脑组织中海马及颞叶NO的含量及NOS的活性。结果显示:发现模型组脑海马及颞叶内NOS的活性从6h开始迅速升高,1d达到峰值,随后逐渐降低,7d后基本恢复正常水平,但仍高于其他各组(P0.05)。L-NNA治疗组和拉莫三嗪治疗组在各时间点极显著或显著低于模型组(P0.01或P0.05),LNNA在6h~1d时对NOS的降低程度显著好于拉莫三嗪组(P0.05)。NO的变化规律与NOS变化规律基本一致且成正相关;利用SABC免疫组化染色检测脑海马内神经性NOS(nNOS)阳性神经元,发现模型组海马内CA3区nNOS阳性神经元密度增加,胞质着色加深,胞体的截面积和突起变小;拉莫三嗪治疗组和L-NNA治疗组的神经元密度有所降低,胞体的截面积和突起长度显著变大(P0.05)。结果显示:NO参与了颞叶癫痫发作的始动过程,高浓度的NO对神经元有损伤作用;L-NNA和新型治疗药拉莫三嗪能明显抑制癫痫发作后NO的浓度,对脑部神经元有一定的保护作用,从而对癫痫发作有较好的治疗作用。     

大鼠短暂性全脑缺血再灌注后海马神经元动态变化

采用股动脉放血并双侧颈总动脉夹闭制作大鼠全脑缺血再灌注模型,分别于术后6h、1d、3d、5d处死动物,取脑,制作石蜡切片和冰冻切片,通过HE染色、TUNEL检测及Caspase-3活性测定,对大鼠海马各区锥体细胞形态进行动态观察。结果表明:在短暂性全脑缺血中,海马锥体细胞存在着凋亡和坏死两种死亡形式,细胞凋亡在海马各区中的分布是一动态过程,各区对缺血易损伤性的顺序是:CA1及门区>CA2>CA3>齿状回;脑缺血再灌注不同时间,海马锥体细胞中DNA断裂及Caspase-3的表达与细胞凋亡呈现相似的变化趋势,且DNA的断裂早于Caspase-3的表达;与青年组相比,老年组海马神经元出现凋亡时间早且损伤严重。试验证明:在脑缺血再灌注损伤中,海马各区存在着缺血耐受性差异;细胞凋亡是神经元死亡的一种重要形式。     

GDNF对缺气损伤的体外培养新生大鼠背根节神经元的作用

运用体外缺气损伤的细胞模型,研究GDNF对损伤的新生大鼠背根节神经元(DRG)是否有保护作用.采用原代培养的方法,用N1无血清培养基分离培养DRG神经元24 h后,加入含20 μg/mL GDNF的无血清培养液,然后液体石蜡封闭培养液,继续培养4,8,12,24 h,分别做MTT实验检测细胞活性OD值,台盼蓝染色记数,细胞总蛋白测定以及形态学观察突起生长状况.结果表明:①封闭12 h后,GDNF组的DRG细胞存活数同对照组相比有显著升高(P <0.01),其余各时间点均无显著性差异.缺气损伤8 h和12 h后,GDNF组的DRG细胞总蛋白较对照组显著升高 (** P <0.01,* P <0.05),其余各时间点均无显著性差异;②各时间点 DRG细胞活性及突起长度的变化差异均不显著.缺气损伤一定时间后,GDNF对新生大鼠DRG细胞的存活数及细胞总蛋白有明显的保护作用,而对细胞活性及突起的生长则没有明显的促进作用.     

COX-2抑制剂预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

观察选择性环氧合酶-2（COX2）抑制剂帕瑞昔布钠（parecoxib）预处理对大鼠局灶性脑缺血（focalcerebralischemic,FCI）脑保护作用。参照线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉缺血（MCAO）模型,将60只大鼠随机分为假手术组（A组）、局灶性大脑中动脉缺血/再灌注模型组（B组）、帕瑞昔布钠小剂量组（C组）和帕瑞昔布钠大剂量组（D组）。分别采用神经功能缺失评分、TTC染色法、免疫组化和原位杂交检测观察帕瑞昔布钠的脑保护作用,探讨帕瑞昔布钠在脑保护作用中的重要地位。结果,与模型组相比帕瑞昔布钠不同剂量治疗组神经功能缺失明显减轻（P〈0．05）,梗死体积明显缩小（P〈0．05）,凋亡细胞明显减少,帕瑞昔布钠1．6Pag／kg及帕瑞昔布钠3．2mg／kg组COX-2mRNA阳性细胞数与模型组比较显著减少（P〈0．001,P〈0．05）;结果表明,帕瑞昔布钠预处理可减轻脑缺血再灌注损伤,具有一定的脑保护作用。     

6-苄氨基嘌呤对大鼠小肠缺血再灌注损伤的影响

本试验旨在研究6-苄氨基嘌呤(6-BA)对大鼠小肠缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用。选取80只雄性SD大鼠,随机分为4组,即对照组、I/R模型组和低、高剂量6-BA组。低、高剂量6-BA组于术前3周分别连续灌胃10、20mg/kg的6-BA,对照组和I/R模型组灌胃同体积的生理盐水,每天1次。对照组在暴露肠系膜上动脉后不做阻断;I/R模型组和低、高剂量6-BA组阻断肠系膜血管30min后再灌注60min。随后取大鼠空肠组织分别进行总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量检测;采用单细胞凝胶电泳法检测细胞DNA损伤程度,采用免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)表达情况。结果显示,与I/R模型组相比,补充10、20 mg/kg的6-BA后,T-SOD、GSH-Px活性显著升高(P0.05),MDA含量显著降低(P0.05);小肠细胞DNA的拖尾现象好转,尾部DNA含量和拖尾率都显著低于I/R模型组(P0.05);Caspase-3阳性表达细胞数量显著减少(P0.05)。由此可见,10、20 mg/kg的6-BA能有效防护I/R对小肠的损伤,且20mg/kg的6-BA作用效果尤为明显。     

大鼠局灶性脑缺血后适应动物模型的建立与评估

试验旨在从方法学的角度比较3种有脑保护效应的大鼠局灶性脑缺血后适应(ischemic postconditioning,IPOC)模型的成功率、稳定性及其保护作用,以期为IPOC机制的研究建立良好的动物模型。将SD大鼠随机分为模型1组(开颅电凝大脑中动脉+双侧颈总动脉夹闭30 min)、模型2组(线栓法大脑中动脉阻塞60 min)、模型3组(线栓法大脑中动脉阻塞100 min),3个组再按假手术组、缺血再灌组及缺血后处理组各分为3个亚组,计9组,每亚组10只,分别在灌注2和24 h后进行神经功能缺损评分;在灌注24 h后取大脑进行2,3,5-3氯4氮唑(TTC)染色确定脑梗死体积百分比,并进行统计学分析;比较3种模型后处理后大鼠脑梗死体积的变异系数。结果显示,3种大鼠模型均呈现了不同程度的神经功能缺损体征,且IPOC均不同程度的降低脑梗死体积,改善了神经功能缺损评分,其中电凝法缺血30 min时建模的成功率最高。电凝法缺血30 min后适应模型脑梗死体积下降42.9%;线栓法缺血60 min后适应模型脑梗死体积下降15.9%;线栓法缺血100 min后适应模型脑梗死体积下降33.4%。电凝法缺血30 min后适应模型脑梗死体积的变异系数最低。开颅电凝法缺血30 min再灌30 s/缺血10 s,反复3次的IPOC模型不仅保护作用强,而且模型成功率高、稳定性好,可作为研究IPOC机制较好的动物模型。     

柏芩提取液的药效学及对奶牛子宫内膜炎的疗效评价

柏芩提取液是由黄柏、黄芩、红花、党参等组成,为了探讨其对奶牛子宫内膜炎的治疗作用,采用实验性家兔子宫内膜炎模型进行柏芩提取液的主要药效学研究。确定药效作用后,按照农业农村部颁布的《防治奶牛临床子宫内膜炎的抗微生物兽药的靶动物安全性和有效性试验指导原则》对其进行奶牛子宫内膜炎的临床疗效评价。药效学试验结果表明,与模型组比较,柏芩提取液能明显改善实验性子宫内膜炎家兔的临床症状,血液白细胞计数分类、子宫分泌物涂片镜检、尿液及子宫分泌物化学检查结果趋于正常,并且能够减轻子宫充血、炎性细胞浸润、上皮细胞脱落等组织病理学改变。临床疗效试验结果表明,给药后第10天,柏芩提取液高、中剂量组的治愈率极显著高于低剂量组(P0.01),且与阳性药物对照组无显著差异(P0.05);各试验组的总有效率差异均不显著(P0.05)。给药后第21天,柏芩提取液高、中剂量组的治愈率显著高于低剂量组(P0.05),且与阳性药物对照组差异不显著(P0.05);各试验组的总有效率未见明显差异(P0.05)。以上结果证明柏芩提取液对实验性家兔子宫内膜炎和临床奶牛子宫内膜炎具有良好的治疗作用,其中1.5和1.0 g/mL浓度(30 mL/次)对临床病例的治疗效果明显,与土霉素效果相似,0.5 g/mL浓度效果不明显。本研究为其进一步研究和开发应用奠定了基础。