防治奶牛乳房炎中药组方的筛选及其抑菌杀菌作用研究

试验根据中兽医治疗奶牛乳房炎的辨证施治原则,筛选出抑制引起奶牛乳房炎主要病原菌（金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）的最佳中药组方,为其临床防治提供新的途径与方法。选用蒲公英、马齿苋、金银花、紫花地丁、赤芍、白芍、菊花、黄芩、漏芦、红花10味中药,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选抗菌中药组方中的最佳优选因素,再通过L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方配比;采用牛津杯法测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌效果;采用二倍稀释法和平板计数法分别测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选出了抗菌中药组方最佳优选因素：赤芍、黄芩、红花、菊花和白芍;L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方最佳配比为黄芩：赤芍：菊花：白芍：红花=3：3：3：1：2;新药组方对大肠杆菌的抑菌直径为17.39 mm,MIC和MBC分别为62.50、125.00 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为25.44 mm,MIC和MBC均为31.25 mg/mL。本研究成功筛选出了一种对奶牛乳房炎主要致病菌具有良好抑菌、杀菌作用的中药新配比组方。     

植物精油与丁酸钠的体外协同抑菌效果研究

本试验旨在研究植物精油与丁酸钠的体外协同抑菌效果。采用牛津杯法,测定肉桂醛、百里香酚和香兰素对于4种细菌(大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌、乳酸菌)的抑菌效果。并将单方和复合植物精油分别与丁酸钠复配,测定其抑菌效果。结果表明:3种植物精油均对大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌有明显抑制作用,但对乳酸菌无抑制作用,在相同浓度下,抑菌效果为肉桂醛香兰素百里香酚。肉桂醛与香兰素复合植物精油抑菌效果优于单方植物精油,当肉桂醛与香兰素的质量比为6∶1时抑菌效果最佳。丁酸钠没有显示出抑菌作用,但丁酸钠与植物精油复合可明显降低植物精油的使用量。综上所述,不同植物精油的复合具有协同作用,植物精油和丁酸钠之间也存在着协同作用。     

中药及组方对产气荚膜梭菌的体外抑菌作用

采用二倍稀释法和药敏试验,观察10种单味中药及3味复方中药对产气荚膜梭菌的体外抑制效果。试验表明:黄连、黄柏、乌梅散对产气荚膜梭菌的生长有明显的抑制作用,且黄连的抗菌活性最高,其最小抑菌浓度(MIC)为0.98mg/mL,抑菌圈直径为33mm。     

5种中药提取物对金黄色葡萄球菌抑制作用的研究

采用水提,水浴加热的方法提取黄芩、黄连、黄柏、鱼腥草和五倍子五味中药的有效成分,通过二倍稀释法测出各个药的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),采用肉汤稀释棋盘法测定五味中药的联合抑菌情况。结果显示,金黄色葡萄球菌对黄连高度敏感;对黄芩、黄柏、五倍子和鱼腥草为中度敏感。黄芩、黄连和五倍子的杀菌作用较强,鱼腥草和黄柏的杀菌作用较弱。通过联合抑菌指数(FLCL)可知五倍子与黄芩、五倍子与黄连联合用药为协同作用。五倍子与鱼腥草、黄连与鱼腥草、黄连与黄芩的联合作用,表现为相加作用。黄连与黄柏、黄芩与鱼腥草、黄芩与黄柏、五倍子与黄柏的联合作用,表现为无关作用。鱼腥草与黄柏表现为拮抗作用。     

TLC法检测银翘天甘复方制剂中的连翘苷

银翘天甘复方制剂是由金银花、连翘、天花粉和甘草四味中药组成,具有良好的抗菌、抗病毒、抗炎解热等功效.其中,连翘的主要成分为连翘苷、连翘酯苷、连翘酯素.目前,测定中药复方制剂中连翘苷的含量多采用高效液相色谱法(HPLc).本试验旨在应用薄层色谱(TLC)法对银翘天甘复方制剂中的连翘苷进行测定.     

银翘天甘防治鸡大肠杆菌病的体外抑菌试验

用金银花、逢翘、天花粉、甘草4味中草药采用不同提取方法制成中药制剂，不同制药方法制得的中药制剂对体外抗鸡源大肠杆菌的效果所取得的试验结果经过统计分析，差异极显著（P≤0．01）。同种制药方法制得的中药制剂在纸片扩散法中和打孔法中取得的结果经过统计分析也存在显著差异（0．01〈P≤0．05）。在管碟法中获得煎煮法对01、0137等型的大肠杆菌的最小抑茵浓度（MIC）均为lg／mL，超声波处理后煎煮法对01、0137等的最小杀菌浓度（MBC）均为lg／mL、MIC均为0．5g／mL，改良索氏提取法对01、0137等的MBC0．5g／mL、MIC均为0．25·g／mL。说明自制银翘天甘复方制剂对鸡源性大肠杆菌有一定的抑制作用。     

1株鸡毒支原体的分离鉴定及体外敏感中药的筛选

本研究旨在对山东泰安地区鸡毒支原体的流行菌株进行分离培养及鉴定和纯化,并针对该分离株筛选体外敏感的中药,为后续进一步研究提供材料。采用液体培养法与固体培养法从病鸡组织样品中分离、培养和纯化鸡毒支原体,并通过瑞士染色和姬姆萨染色、血清学方法及分子生物学方法对分离株进行初步鉴定,在此基础上,采用微量稀释法测定8种中药对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）,从而筛选到对分离菌株敏感的中药。结果显示,分离菌株在鸡毒支原体液体培养基中增殖后,培养基颜色由红变黄且呈半透明状态,在固体培养基中培养后呈典型的"煎蛋"样儿菌落,均符合鸡毒支原体培养特性;瑞士染色和姬姆萨染色结果显示,菌体形态符合鸡毒支原体的特征;血清学鉴定结果显示,分离株与鸡毒支原体阳性血清发生凝集;分子生物学鉴定结果显示,所扩增的核酸序列与鸡毒支原体匹配度高达99%;MIC测定结果显示,中药黄连和黄柏对分离的鸡毒支原体的抑菌活性较强,属敏感范畴,其MIC分别为≤0.98和0.39 mg/mL,而中药金荞麦和鱼腥草对鸡毒支原体中度敏感,MIC均≥125 mg/mL,板蓝根、白鲜皮、当归、艾叶对鸡毒支原体均不敏感。综上所述,本研究成功分离到1株鸡毒支原体,并且筛选出4种对该菌株敏感的中药,分别为黄连、黄柏、金荞麦和鱼腥草,为后期进一步研究防治鸡毒支原体病的中药组方时提供参考依据。     

正交试验法优化加减银翘散的剂量组方

为优化加减银翘散中金银花、连翘、天花粉、甘草四味中药的剂量组方.采用L16(45)正交表设计试验,以配方中金银花、连翘、天花粉、甘草为因素,以用量为水平,以浸膏率和最小抑菌浓度(MIC)为量化指标.试验结果表明,金银花对组方的浸膏率和MIC影响显著(P＜0.05),其中A2B3C4D1组合时鸡大肠杆菌的MIC最小为0.4 g/mL.因此,加减银翘散中四味中药的最佳配比为2:3:4:1.     

中药对鲍曼不动杆菌的体外抑菌试验

为了探讨中药对鲍曼不动杆菌的体外抑菌效果,筛选出针对鲍曼不动杆菌具有较好体外抑制作用的中药。以临床分离的鲍曼不动杆菌为试验菌株,试验采用水煎法提取中药的有效成分,牛津杯法测定中药对该菌的抑菌圈大小,肉汤二倍稀释法测定中药对该病原菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明,鲍曼不动杆菌对苏木、连翘、夏枯草、乌梅、紫花地丁高度敏感;鲍曼不动杆菌对黄芩和青皮中度敏感;鲍曼不动杆菌对诃子、女贞子、板蓝根、苦参、马齿苋、桔梗、防风、郁金香、蒲公英、厚朴、香附、荆芥、石榴皮、艾叶、知母、龙胆草、栀子耐药;苏木对该菌的抑菌效果最好,MIC和MBC均为31.3 mg/mL。本结果为开发中药相关产品以及防治由鲍曼不动杆菌引起的细菌性疾病提供了参考。     

4味中药及其与抗菌药的复方制剂的MIC测定

用改进的试管两倍稀释法测定了黄连、鱼腥草、大青叶和苦参4味中药及其相互配伍（1：1）对标准大肠杆菌的最小抑菌浓度和4味中药与抗菌药配伍（1000：1）对临床分离鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度。结果表明，4味中药及其相互配伍对大肠杆菌标准株有一定的抑制作用，其MIC值介于3．91—62．50mg／mL之间，其中大青叶和鱼腥草以1：l配伍对大肠杆菌抑菌效果最好，MIC为3．91mg／mL；对临床分离株，单方药中黄连抑菌效果最好，MIC为31．25mg／mL，24种复方药中，黄连和盐酸多西环素或加替沙星以1000：1配伍的抑菌效果最好，其MIC为3．91mg／mL。     

自拟复方中药对小白鼠免疫功能的影响研究

笔者自拟复方中药（党参120 g、熟地80 g、玄参80 g、菟丝子60 g、刀豆50 g、川芎50 g、连翘30 g、丹参30 g、炙甘草50 g、人参50 g）,以小白鼠为试验动物,研究其对机体免疫力的影响。试验结果表明：试验各组与对照组比较,免疫器官指数、巨噬细胞吞噬指数、血清中抗体水平、E玫瑰花环形成率4项指标均有显著差异（P<0.05）。     

三种复方中药制剂对大鼠耐缺氧能力的影响

选用健康成年 Wistar大鼠 72只 ,随机分为6组 ,即中药制剂 1、2、3及枸杞制剂对照组、蒸馏水空白对照组和正常对照组 ,给药 2周后 ,进行常压耐缺氧实验 ,测定存活时间、血清皮质酮、促肾上腺皮质激素 (ACTH)和胰岛素水平的变化并对肾上腺皮质束状带细胞超微结构进行观察。结果表明 :3种复方中药制剂和枸杞制剂均能延长大鼠的常压耐缺氧时间 (P <0 .0 5) ,其中复方中药制剂 3作用效果最好 (P<0 .0 1 ) ;3种复方中药制剂组和枸杞制剂对照组胰岛素浓度均显著高于空白对照组 (P<0 .0 5) ;3种复方中药制剂组和枸杞制剂对照组血清皮质酮、促肾上腺皮质激素 (ACTH)浓度均显著低于空白对照组 (P<0 .0 5) ;3种复方中药制剂和枸杞制剂对肾上腺皮质束状带细胞具有保护作用。由此可知 ,3种复方中药制剂和枸杞制剂对照均能提高机体耐缺氧能力 ,减轻缺氧应激对机体造成的损伤     

HPLC法测定复方制剂中的酒石酸泰乐菌素

采用Kromasil C18色谱柱,甲醇-水(80:20)为流动相,检测波长为290nm,以HPLC外标法测定复方制剂中酒石酸泰乐菌素的含量。该法分离度大,被测组分的线性关系良好(r=0.9999),平均回收率100.0%,重复进样相对标准偏差0.16%。     

广东五种常见中草药的体外抑菌试验

为测定鸭脚木皮、木蝴蝶、火炭母、岗梅根、倒扣草（鲜）这5种广东常见中草药的体外抑菌活性,采用琼脂平板打孔法、试管倍比稀释法和平板培养法,分别测定其对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的抑制效果.结果表明：大肠杆菌、链球菌对火炭母呈高度敏感,最小抑菌浓度（MIC）分别为1/40、1/80,最小杀菌浓度（MBC）分别为1/40、1/80;链球菌对鸭脚木皮、木蝴蝶均呈高度敏感,最小抑菌浓度（MIC）分别为1/20、1/10,最小杀菌浓度（MBC）分别为1/20、1/10;岗梅根、倒扣草（鲜）对六种菌均无抑制作用.     

复方中药软膏剂的透皮效果研究

为评价中药复方软膏剂透皮效果,筛选最佳组方,以中药软膏剂中绿原酸成分为标记物,应用高效液相色谱法(HPLC)测定透过液中绿原酸的含量,评价不同的中药剂型和不同的透皮促渗剂对中药软膏剂透皮效果的影响。结果表明,中药超微粉直接入药并以含45 g/L冰片+45 mL/L氮酮作为促渗剂效果最佳。     

防治家禽腹泻的复方中药筛选及其提取工艺研究

为筛选能够有防治家禽腹泻的复方中药,选择对大肠杆菌有抑菌效果的单味中药,配置14种复方,结合对金黄色葡萄球菌、致病性沙门菌的抑菌能力,筛选出一个复方中药,通过正交试验确定该复方中药最佳提取工艺。结果显示:筛选的复方中药乙醇提取物(1 g/mL,200μL)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡大肠杆菌、鸭大肠杆菌、鸡致病性沙门菌、鸭致病性沙门菌(指示菌浓度1×10^8cfu/mL)的抑菌圈直径分别为24.21mm、31.36mm、25.19mm、24.12mm、25.00 mm、25.49 mm;硫酸新霉素对上述致病菌的抑菌圈直径分别为23.61 mm、26.52 mm、14.69 mm、16.00 mm、24.11 mm、25.49 mm。经正交试验优化的最佳提取工艺为:15倍溶剂、提取时间60 mim、乙醇浓度90%、提取2次。优化后提取物体外抑菌试验(O78)的抑菌圈均值为26.65 mm。研究表明:筛选的复方中药对引起家禽腹泻的主要致病菌具有良好抑菌、杀菌作用,正交试验确定的提取工艺稳定可行。     

治疗鸡大肠杆菌病的中药方剂筛选

为了获得有较好疗效的治疗鸡大肠杆菌病的中药复方,基于中兽医学理论拟定了39个备选方剂。利用建立的人工感染鸡大肠杆菌病病理模型,对39个备选方剂进行了筛选,发现方4、5、24与26的效果较好,病死率分别是30％、40％、26．7％、26．7％,攻毒对照组的死亡率为80％。为了进一步确证这些方剂的有效性,对方4、5、24、26进行了2次重复试验,结果显示4个方剂效果稳定,对试验性鸡大肠杆菌病均有较好的治疗效果,病死率在46．7％以下。相比之下,26号方效果最好,2次重复试验死亡率均为26．7％。通过正交试验对26号方组成药物的用量进行了筛选,确定其最佳配比为香附40g,穿心莲30g、黄芪30g,并将该方命名为“香芪汤”,为有效治疗鸡大肠杆菌病提供了理论基础。     

复方中药体外抗猪衣原体活性研究

应用微量Vero细胞培养法,检测复方中药的体外抗衣原体活性,为防治猪衣原体病提供依据。结果表明,复方中药的MIC值是39.06mg/mL,随着中药浓度升高,包涵体的体积缩小、数量减少,直至消失,对照组未见中药对Vero细胞有毒性作用。试验结果显示,复方中药体外对猪衣原体有抗菌活性。