稻瘟病抗性基因分析研究

 本文报道了应用累积曲线分布法[1-3],在温室用我国多个菌系人工接种鉴定了丽江新团黑谷×会泽老来黄、丽江新团黑谷×抬头白谷两个组合11套F₃系统.结果表明:会泽老来黄对A₁、D₁、G₁3个菌系的抗性是由一对显性基因控制的;对C₁₃、F₁两菌系的抗性是由两对显性基因控制的,其中一个控制高抗反应,另一个呈中抗反应.抬头白谷对C₁₃、G₁小种的抗性是由一对显性基因控制的;对A₁、E₁、F₁三个菌系的抗性是由两对显性基因控制的;对D₁菌系的抗性是由两对互补显性基因控制的.     

广西稻瘟病菌生理小种研究

 1976~1982年从广西78个县、市征集并分析出827个单孢有效菌株,在中国鉴别品种上可区分为7群55个小种。广西稻瘟病菌(pyricularia oryzae)的主要小种16个(A₁,B₁,B₉,B₁₁,B₁₃,B₁₅,C₁,C₉,C₁₁,C₁₃,C₁₅,D₁,E₁,E₃,F₁,G₁,)总频率达83.31%.     

苦瓜枯萎病菌的鉴定及其遗传多样性分析

 对分离获得的32株苦瓜枯萎病菌菌株进行形态学特征和寄主专化型测定, 结果表明, 测试的苦瓜枯萎病菌株均为尖孢镰刀菌苦瓜专化型 (Fusarium oxysporum f. sp. momordicae), 这些菌株可以侵染苦瓜和瓠瓜幼苗, 但不侵染其他葫芦科瓜类作物。对苦瓜枯萎病菌菌株的rDNA-ITS区 (ITS1、5.8S和ITS2)序列进行扩增测序, 结果显示其序列长度均为456 bp;聚类分析表明测序菌株与镰刀菌属中尖孢镰刀菌不同专化型的菌株聚为一群。利用RAPD标记技术分析苦瓜枯萎病菌的遗传多样性, 结果显示苦瓜枯萎病菌株与其他葫芦科瓜类作物枯萎病菌株间的遗传相似系数范围为0.59~0.99, 当遗传相似系数为0.85时, 供试的48个菌株分成10个类群 (G_1~10)。在RAPD聚类树中所有苦瓜枯萎病菌株聚在一个分支上 (G₁群), 菌株间的遗传相似系数范围为0.92~1.00, 具有较高的遗传相似性, 且菌株的聚群与地理来源存在一定的相关性。     

水稻白叶枯病原细菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

 经水稻白叶枯病原细菌(Xanthomonas campestris pv.oryzae)菌株K-s-6-6免疫的BALB/C小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经筛选和克隆化,获得3株稳定分泌抗该病原细菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株k₁,K₂和K₃₁。分泌抗体稳定性试验、封闭试验、染色体数计数、交叉反应试验等表明具有株特异性;抗体分属IgG₃和IgG₂₆亚类;腹水抗体滴度在1:10⁴左右。初步用于检测白叶枯病菌菌株,病叶和病种证明特异性高,匀质均一,在理论和生产上都有实用价值。     

河南省小麦假禾谷镰孢菌对氟环唑的敏感性

为了解河南省假禾谷镰孢菌对氟环唑的敏感性，本文采用菌丝生长速率法测定了氟环唑对2019年从河南省16个地市分离的100株假禾谷镰孢菌的毒力。结果表明：氟环唑对供试菌株菌丝生长的EC₅₀值为0.002 4～0.505 4μg·mL^-1,EC₅₀平均值为(0.109 3±0.095 7)μg·mL^-1;敏感性频率分布图显示，89株供试菌株位于相应的主峰范围内，敏感性频率分布为连续单峰曲线，将其EC₅₀平均值为(0.082 1±0.046 8)μg·mL^-1作为假禾谷镰孢菌对氟环唑的敏感性基线。方差分析显示：不同地市菌株对氟环唑的敏感性差异较小，各地市菌株EC₅₀平均值变化范围为0.050 8～0.296 8μg·mL^-1;同一地市菌株对氟环唑的敏感性差异较大，商丘虞城最不敏感菌株的EC₅₀值是最敏感菌株的210.58倍。聚类分析表明：河南省假禾谷镰孢菌对氟环唑的敏感性差异与菌株的地理来源无明显关...     

江苏麦类禾谷镰刀菌酯酶同工酶测定

 对江苏省收集的254个禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum Schw.)菌株进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,测定酯酶同工酶。结果表明:1.供试菌株的酶谱可以分为5个类型。类型Ⅰ具有E₁₁、E₇、E₆、E₅、E₄五条主酶带,占总菌株数的49.61%,类型Ⅱ比类型Ⅰ少酶带E₅,占28.74%;类型Ⅲ少E₄或E₆;类型Ⅳ少E₄和E₅或E₅和E₇;类型Ⅴ少E₁₁。2.菌株主酶带的多少和颜色的深浅,特别是主酶带E₅的有无与致病力的强弱有关。3.根据各地酶谱类型的分布,对照1978~1982年江苏麦类禾谷镰刀菌致病性鉴定的结果分析,可以看出,我省各地禾谷镰刀菌系致病力的强弱与酯酶同工酶主酶带的不同有关。     

2014年海南省橡胶炭疽病菌对多菌灵和咪鲜胺的敏感性测定

 2014年从海南省4个市(县)分离获得43株橡胶炭疽病菌,进行病原菌鉴定后,采用菌丝生长速率法,测定了其对多菌灵和咪鲜胺的敏感性,结果表明:供试菌株中,有23个属于胶孢炭疽病菌,20个属于尖孢炭疽病菌。所有供试菌株对多菌灵和咪鲜胺的EC₅₀值分布范围分别为(0.332 3~7.425 6)和(0.009 1~0.113 3) mg·L^-1,平均值分别为(1.714 1±1.684 7)和(0.036 8±0.023 8)mg·L^-1。其中尖孢炭疽病菌对多菌灵的EC₅₀值要显著高于胶孢炭疽病菌,EC₅₀平均值分别为(2.922 7±1.556 3)和(0.663 2±0.194 4)mg·L^-1,但2种病原菌对咪鲜胺的EC₅₀值没有显著差异,EC₅₀平均值分别为(0.038 3±0.015 2)和(0.035 5±0.020 1)mg·L^-1。供试菌株对多菌灵和咪鲜胺的敏感性无显著相关性,可以在生产上交替使用。     

醚菌酯对假禾谷镰孢的抑制作用及对小麦茎基腐病的防效研究

 为了明确醚菌酯对假禾谷镰孢的抑制作用,本研究采用菌丝生长速率法和孢子萌发抑制法分别测定了醚菌酯对2019年从河南省13个地市分离的50株假禾谷镰孢的毒力。两种方法结果表明,醚菌酯对供试50株菌株的EC₅₀值范围分别在0.127 3~3.070 9 μg·mL^-1和0.001 3~0.070 9 μg·mL^-1,平均EC₅₀值为(1.304 1±0.804 2)μg·mL^-1和(0.017 4±0.017 0)μg·mL^-1。敏感性频率分布图显示,两种方法分别有80％(40株)和70％(35株)的菌株敏感性频率呈正态分布,其平均EC₅₀值分别为(1.135 2±0.531 2)μg·mL^-1和(0.011 4±0.006 3)μg·mL^-1,可作为假禾谷镰孢对醚菌酯的敏感性基线。方差分析结果表明,同一县市的假禾谷镰孢对醚菌酯的敏感性差异较大,EC₅₀值变化范围为0.545 2~2.156 4 μg·mL^-1和0.001 9~0.036 7 μg·mL^-1。聚类分析结果显示,河南省假禾谷镰孢对醚菌酯敏感性差异与菌株的地理来源无明显关联性。温室防效结果显示,小麦种子与醚菌酯悬浮种衣剂进行拌种处理可以起到一定防治效果,0.42 μL AI/2g处理防效最高,防治效果可达50.33％。本研究结果可为河南省假禾谷镰孢对醚菌酯的敏感性监测提供信息,同时为醚菌酯对小麦茎基腐病的防治提供理论依据。     

河北省梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑的敏感性

 为明确河北省梨树褐斑病菌(Septoria piricola Desm) 对苯醚甲环唑的敏感性,采用菌丝生长速率法测定了苯醚甲环唑对从该省11个地市分离的133 株菌株的毒力,通过方差及聚类分析法对测定结果进行了分析,并分别研究了苯醚甲环唑与双胍三辛烷基苯磺酸盐、吡唑醚菌酯、戊唑醇敏感性的相关性。结果显示:梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑菌丝生长的最低抑制浓度为3 μg·mL^-1;供试133株菌株对苯醚甲环唑的EC₅₀范围在0.032 2~1.882 2 μg·mL^-1 之间,平均EC₅₀为(0.488 8 ±0.003 9) μg·mL^-1;敏感性频率分布图显示,病菌群体中存在着对苯醚甲环唑敏感性较低的亚群体,但 81.95% 供试菌株敏感性频率呈正态分布,将此部分菌株的 EC₅₀平均值为(0.319 3±0.001 8) μg·mL^-1 作为梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑的敏感性基线。方差分析及聚类结果均显示,不同县市内的菌株对苯醚甲环唑EC₅₀的最大值和最小值之比为1.7~7.5;各县市的菌株对苯醚甲环唑敏感性不同,苯醚甲环唑EC₅₀平均值变化范围在0.207 4~0.961 2 g·mL^-1 之间,最大值是最小值的4.6倍;梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑的敏感性与其对双胍三辛烷基苯磺酸盐、吡唑醚菌酯的敏感性之间无明显相关性,与戊唑醇的敏感性之间存在相关性,苯醚甲环唑与双胍三辛烷基苯磺酸盐、苯醚甲环唑与吡唑醚菌酯可以复配使用。表明河北省梨树褐斑病菌群体中尽管存在着敏感性较低的亚群体,但可通过药剂复配进行防控。     

河北省梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑的敏感性

 为明确河北省梨树褐斑病菌(Septoria piricola Desm) 对苯醚甲环唑的敏感性,采用菌丝生长速率法测定了苯醚甲环唑对从该省11个地市分离的133 株菌株的毒力,通过方差及聚类分析法对测定结果进行了分析,并分别研究了苯醚甲环唑与双胍三辛烷基苯磺酸盐、吡唑醚菌酯、戊唑醇敏感性的相关性。结果显示:梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑菌丝生长的最低抑制浓度为3 μg·mL^-1;供试133株菌株对苯醚甲环唑的EC₅₀范围在0.032 2~1.882 2 μg·mL^-1 之间,平均EC₅₀为(0.488 8 ±0.003 9) μg·mL^-1;敏感性频率分布图显示,病菌群体中存在着对苯醚甲环唑敏感性较低的亚群体,但 81.95% 供试菌株敏感性频率呈正态分布,将此部分菌株的 EC₅₀平均值为(0.319 3±0.001 8) μg·mL^-1 作为梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑的敏感性基线。方差分析及聚类结果均显示,不同县市内的菌株对苯醚甲环唑EC₅₀的最大值和最小值之比为1.7~7.5;各县市的菌株对苯醚甲环唑敏感性不同,苯醚甲环唑EC₅₀平均值变化范围在0.207 4~0.961 2 g·mL^-1 之间,最大值是最小值的4.6倍;梨树褐斑病菌对苯醚甲环唑的敏感性与其对双胍三辛烷基苯磺酸盐、吡唑醚菌酯的敏感性之间无明显相关性,与戊唑醇的敏感性之间存在相关性,苯醚甲环唑与双胍三辛烷基苯磺酸盐、苯醚甲环唑与吡唑醚菌酯可以复配使用。表明河北省梨树褐斑病菌群体中尽管存在着敏感性较低的亚群体,但可通过药剂复配进行防控。     

大豆花叶病毒单克隆抗体(SMV-McAb)的研究

 用大豆花叶病毒免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sq2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗大豆花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,S-1、S-2和S-3。它们的鼠腹水滴度高达1:10⁷,能被大豆花叶病毒兔抗血清所阻断。单克隆抗体与其它三种植物病毒不起反应,对大豆花叶病毒的不同株系有特异性差异。     

马铃薯环腐病棒杆菌单克隆抗体的制备

 用马铃薯环腐病棒杆菌的细胞壁蛋白粗提物作为抗原,应用杂交瘤技术,成功地建立了六株分泌抗马铃薯环腐病棒杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株CH₁、CH₂、CH₃、CH₄、CH₅和cH₆。对这些杂交瘤细胞株所分泌的相应六种单抗McAb₁、McAb₂、McAb₃、McAb₄、McAb₅和McAb₆进行专化性测定的结果表明,McAb₄对环腐病菌具有亚种特异性,其它5种单抗除与环腐病菌呈阳性反应外,还与其它亚种的棒杆菌有不同程度的交叉反应。细胞株CH₄经体外培养传代30余代和液氮冻存5个月,其分泌抗体的滴度无明显改变。McAb₄属于IgG2a亚类,其诱发的小鼠腹水抗体效价达1:2×10⁵,CH₄的染色体数为95-102条。应用ELISA夹心法,McAb₄所能检测环腐病菌的最低浓度为10³个细菌/毫升。检测感染环染环腐病的马铃薯汁液,稀释1000倍仍呈阳性反应。     

应用单克隆抗体检测大麦黄花叶病毒

作者应用已建立的大麦黄花叶病毒(BaYMV)的4F_(10)单克隆抗体杂交瘤细胞株,经小白鼠腹水生产单克隆抗体,用过碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶标记的酶标单克隆抗体。并由此建立了检测大麦黄花叶病毒的标准的双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)。其检测提纯病毒的灵敏度为3.0μg/ml左右,感病大麦叶片汁液的最大稀释度为1:2560,病茎稀释度为1:160。对采自我国7个主要BaYMV发病区感病的样品进行了检测,绝大多数均显示强阳性,只有宝山样品例外。本项试验为BaYMV诊断的标准试剂盒的建立进行了有益的尝试。     

丽蚜小蜂的粉虱寄主选择性及后代蜂发育适合度

温室白粉虱和烟粉虱常混合发生,危害严重。丽蚜小蜂是粉虱类害虫的重要寄生性天敌,被广泛应用于温室作物上粉虱的防控。本文分别以温室白粉虱和烟粉虱作为扩繁寄主,经多代连续扩繁,各自建立起稳定的丽蚜小蜂种群（分别以W1和W2表示）,以这两种小蜂种群为天敌试虫,研究了其对不同寄主植物上混合发生的两种寄主粉虱若虫的寄生选择性及其后代蜂生长发育适应度表现。结果表明,番茄、茄子、菜豆上温室白粉虱和烟粉虱的同龄若虫同时存在时,小蜂W1和W2均偏好寄生于温室白粉虱,且寄生其若虫内后代蜂的发育历期显著短于寄生烟粉虱若虫内的发育历期;黄瓜上两种粉虱混合存在时W1偏好寄生于烟粉虱,且寄生其若虫内后代蜂的发育历期显著短于寄生温室白粉虱若虫内的发育历期,但寄主植物及粉虱对丽蚜小蜂的羽化率均无显著影响。综合来看,无论饲养寄主为温室白粉虱或是烟粉虱,丽蚜小蜂均偏好寄生温室白粉虱,且寄生温室白粉虱内的后代蜂发育适合度较高,这对指导寄生蜂的人工饲养及有效利用具有重要的理论意义和应用价值。     

植物内生蜡样芽孢杆菌M22 Mn-SOD基因的克隆及在大肠杆菌中表达

 通过PCR和反向PCR,从蜡样芽孢杆菌M22中扩增到2条长度为1 322 bp和1 395 bp的基因片段(GenBank登录号为AY540749和AY468485),分别含657 bp和627 bp的开放阅读框,各自编码218个和208个氨基酸残基的功能蛋白。2个蛋白氨基酸序列同源性为46%,均不含信号肽。与其它锰超氧化物歧化酶序列同源性高,保守氨基酸残基类型及位置与其它Mn-SOD相同,可确定2个基因均为蜡样芽孢杆菌Mn-SOD基因。分别将2个基因的开放阅读框插入载体pET-22b (+)构建表达质粒pET-sodA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达。SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量分别为28 kD和27 kD。转入pET-sodA的SOD缺陷型大肠杆菌QC779转化子恢复在10μmol/L paraquat的LB平板上生长的能力。活性电泳显示,M22的Mn-SOD在QC779中成功表达。     

引起马铃薯软腐的菊欧氏杆菌的生物型和血清型

 从全国23个省、市、自治区的46份马铃薯块标本中分离到25株菊欧氏杆菌(Erwinia carysanthemi).经58项细菌学性状的研究,发现它们在酒石酸钠,乳酸钠,丙酸钠,菊糖,蜜二糖,D—山梨醇等项反应中有差别.据此将这25个菌株分为3个生物型,其中生物型Ⅰ是来自江苏的10个菌株;生物型Ⅱ是来自四川仁寿县和彭县的,也是10个菌株;生物型Ⅲ共4个菌株来自河北和内蒙。生物型Ⅰ和Ⅱ与Dickey系统中的生物型Ⅱ相似,而生物型Ⅲ则与任何已划分的生物型都有一定差异.     

我国观赏植物软腐病病原细菌的研究

 从广东、福建、湖南、江西及浙江5省7市采集的14科33种观赏植物上分离到199株软腐欧文氏杆菌菌株,44项理化性状鉴定结果:126株为胡萝卜软腐欧文氏杆菌胡萝卜变种(Erwinia carotovora pv. carotovora简称Ecc)、7株为菊欧文氏杆菌(Erwinia chrysanthemi简称Ech)、66株介于Ecc和Ech之间的中间型(I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V)。Ecc和中间型菌株是我国观赏植物的主要病原细菌。在本文中首次报道了竹芋科(竹芋)、苋科(千日红)两科及一些植物种:芦荟、白穗花、玉簪、黄精、富贵竹、兜兰、砂仁及饿术草是软腐欧文氏杆菌的新的寄主植物。血清学研究表明,Eca、Ecc及Ech这三个种之间不发生交叉反应,但同一个种内是可以起反应的。另外,Ecc与中间型相互之间有沉淀反应,表明它们之间的亲缘关系较近。     

丽蚜小蜂对雪莲果和烟草繁育温室白粉虱的适应性

雪莲果和烟草均属于大叶型植物,是繁育温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum Westwood的理想寄主植物。为了明确雪莲果作为中间寄主植物大量繁育丽蚜小蜂Encarsia formosa Gahan的可行性,在人工气候室条件下,比较研究了丽蚜小蜂在雪莲果和烟草繁育温室白粉虱上的寄生率、羽化率和发育历期。研究结果表明,丽蚜小蜂对雪莲果和烟草繁育的温室白粉虱3龄若虫寄生率最高,分别为84.2%和80.3%,且对雪莲果繁育的温室白粉虱1和2龄若虫寄生率均显著高于烟草;丽蚜小蜂寄生两种寄主植物繁育的温室白粉虱羽化率除1龄外差异均不显著,其中寄生雪莲果和烟草繁育3龄粉虱若虫的羽化率最高,分别为94.7%和93.8%;丽蚜小蜂寄生雪莲果繁育1～4龄若虫发育历期分别为21.4、15.5、13.7和13.3 d,且寄生雪莲果各龄粉虱若虫发育历期除1龄外均短于烟草。综合来看,与烟草相比,丽蚜小蜂对雪莲果繁育的温室白粉虱表现出更好的适应性,特别是对3龄若虫表现出最好的发育适合度,这为进一步开发利用雪莲果为中间寄主植物大量繁育丽蚜小蜂提供了理论依据。     

抗白粉病小麦-中间偃麦草双体异附加系的鉴定

 对从中间偃麦草与普通小麦品种烟农15杂交后代(BC₃F₆)中选育的双体异附加系山农Line15的形态学、白粉病抗性、细胞学、基因组荧光原位杂交(GISH)及RAPD进行鉴定分析.结果表明它的主要形态性状介于双亲之间;白粉病抗性鉴定结果表明山农Line15对白粉病高抗近免疫;根尖细胞染色体数目为2n=44,PMC MI染色体构型为2n=22Ⅱ;以中间偃麦草总基因组DNA为探针的基因组荧光原位杂交(GISH),结果表明山农Line15是在小麦的遗传背景中附加了2条中间偃麦草染色体,为小麦-中间偃麦草双体异附加系;遗传分析表明山农Line15的抗白粉病基因基本上可以确定来源于中间偃麦草的染色体;RAPD分析表明:在供试的120个随机引物中有1个引物S170(-5'-ACA ACG CGA G-3'-)能在山农Line15中稳定地扩增出特异带型,可以作为山农Line15所附加的中间偃麦草染色体的特异分子标记.     

甘蔗花叶病毒田间杂草寄主鉴定

正玉米矮花叶病1963年在美国俄亥俄州首次报道[1],我国1968年在河南省首次报道。甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起我国玉米矮花叶病的主要病原[2, 3]。根据基因组序列的系统发育分析,SCMV分为4个组,其中第I组分布最广,第IV组是新发现的一个强毒株系,近年来的发生呈上升趋势[4, 5]。SCMV属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus),粒体为弯曲线状。其由蚜虫非持久性传播[6],能侵