橡胶树尖孢炭疽菌绿色荧光蛋白（GFP）标记转化株的获得

建立了根癌农杆菌介导转化橡胶树尖孢炭疽菌(Collectotrichum acutatum)获得T-DNA插入突变体的体系:在尖孢炭疽菌孢子浓度10~6个/mL、农杆菌浓度OD_(600)=0.15～0.2后在200μmol/mL的乙酰丁香酮(AS)诱导6 h,共培养48 h.转化效率可达150～300个/10~6个分生孢子.获得的转化子通过PCR检测绿色荧光蛋白基因、Southern 杂交验证、分生孢子的荧光观察,结果表明:被测转化子基因组中确实整合了目的片段,成功获得了橡胶树尖孢炭疽菌菌株CHY-1绿色荧光蛋白标记转化子.     

茎点霉真菌Phoma adianticola引起的一种茶树新病害

对一种引起茶树芽头褐变的病原进行了分离鉴定研究。通过柯赫氏法则,成功分离得到了致病菌株。菌株PDA培养条件下的形态学和rDNA-ITS分子鉴定结果表明,此病原菌为茎点霉属真菌。按照茎点霉属真菌鉴定程序开展了鉴定研究。此菌在OA和MA培养基上培养7 d后,菌落平均直径6.0~6.4 cm;分生孢子器圆球形,具孔口,器外壁光滑或有菌丝附着;分生孢子橄榄球形,无隔,多数具2个游球,大小为4.9~6.3μm×2.1~2.8μm;NaOH颜色反应呈黄绿色。根据上述特征,初步鉴定此病原菌为Phoma adianticola。由P.adianticola引起的茶树芽头褐变可能是茶树的一种新病害。根据此菌侵染后的症状,暂将其表述为茶树褐芽病。     

一种新发生的大豆茎枯病病原菌鉴定

鉴定了一种新发生的大豆茎枯病病原菌。在酸化PDA培养基上所有病原菌分离物菌落呈白色,气生菌丝呈密集的卷毛状,有时部分区域显黄绿色;培养基背面开始无色,随后产生大的、扩展的黑色子座。在接种的大豆茎秆上产生大小不等的黑色子座和分散的分生孢子器。共产生2类分生孢子,其中α型分生孢子丰富,无色,单孢,椭圆至纺锤状形,大小4.05～7.57μm×1.48～3.25μm,含2个油滴;β型分生孢子极少见,无色,线形。在培养基及大豆茎秆上未发现有性态。致病性测定表明选择的分离物引起合丰25大豆100%植株发病和种子腐烂。用AluI、RsaI和HhaI酶切通用引物对ITS4/ITS5扩增的rDNA-ITS产物,所有分离物都产生与大豆拟茎点种腐病菌Phomopsis longicolla一致的酶切谱带;序列比对发现测序的2个分离物ITS序列与GenBank中9个P.longicolla分离物ITS序列100%同源。这是我国首次报道大豆田间发现P.longicolla,而且能引发严重的大豆茎枯病。     

辽宁省玉米穗腐病致病菌新知镰孢的分离鉴定与生物学特性研究

通过形态学和分子生物学方法鉴定菌株Fa11-9。结果表明,菌株Fa11-9产生的大型分生孢子镰刀形,3～5个分隔;小型分生孢子长椭圆形,单胞,延伸因子与新知镰孢聚为一类,确定菌株Fa11-9为新知镰孢(Fusarium andiyazi)。通过接种与再分离鉴定试验,完成柯赫式法则。利用十字交叉法和血球计数板计数法研究营养和环境条件对新知镰孢生长速度和产孢的影响,结果表明,菌丝生长温度范围为15℃～40℃,最适温度为25℃;光照条件对菌丝生长影响不显著;生长最适碳、氮源分别为麦芽糖、硝酸钠,促进分生孢子产生的最适碳、氮源分别为蔗糖、酵母。新知镰孢在辽宁省可引起玉米穗腐病。     

多基因序列鉴定油茶炭疽病原Colletotrichum boninense新种

油茶炭疽病是中国油茶最重要的病害之一，为进一步对油茶炭疽病原进行研究，通过柯赫氏法验证，从海南澄迈和江西分宜的油茶叶上分离到有别于其它炭疽病菌的致病菌3株。菌株在PDA培养基上，菌落圆形，呈奶油色至橙黄色，菌丝生长速度为10.8~11.3 mm/d；附着胞为椭圆形，呈深褐色至棕黑色，边缘整齐，大小为（5.3±0.9）μm×（16.1±1.1）μm；分生孢子初为橘黄色，后形成黑色孢子团，大小为（14.5±2.5）μm×（5.6±1.6）μm。多基因系统发育树显示3株病原菌与博宁炭疽菌（Colletotrichum boninense）的模式株MAFF 305972聚为一个进化枝，且达到100％的置信度。结合其形态和多基因分析，结果表明：3个菌株为博宁炭疽菌（C. boninense），是能侵染油茶树的炭疽菌种。     

中粒种咖啡新发砖红镰刀叶枯病病原菌鉴定及其病原生物学分析

针对引起海南省白沙农场中粒种咖啡成株叶片呈砖红色枯萎症状的一种未知病害的病原菌进行分离，分离得到菌株21BS02-1和21BS02-2。将分离菌株接种到叶片并观察症状，发现菌株21BS02-1的发病症状与田间症状一致，通过再分离获得的菌株发病症状也与初始病原菌症状一致，由此确定菌株21BS02-1即为致病菌。菌株21BS02-1的菌落主要呈白色，毡状，菌丝致密，菌落中央呈玫瑰色；其菌丝体细长，部分菌丝为有隔菌丝；大型分生孢子两端稍弯曲，形状似镰刀，其大小为(56.26~175.76)μm × (12.93~19.78)μm，有3~7个分隔；小型分生孢子较少，呈椭圆形，0~1个分隔；根据形态特征初步鉴定该病原菌为镰刀菌（Fusarium sp.）。进一步对菌株21BS02-1的ITS、β-tubulin、TEF基因序列进行克隆测序，经Blast搜索表明，其ITS、β-tubulin、TEF序列与Fusarium lateritium的同源性分别达到99.56%（MN686293）、100%（KJ00154）、99.68%（KF918550）。3个单基因聚类树均一致，表明菌株21BS02-1属于砖红镰刀菌（F. lateritium）。生物学特性测定表明，致病菌21BS02-1最适合的培养基为OMA和CMA培养基；碳源为蔗糖时的利用率最高；牛肉浸膏为致病菌最适生长的氮源；12 h光暗交替条件下菌丝生长最快；pH在7~9范围内最适合该致病菌生长。本研究是砖红镰刀菌（F. lateritium）侵染中粒种咖啡较为详细的报道。     

紫外光的照射与绿缰菌对多菌灵敏感性变化的关系

为了探明紫外光的照射与绿僵菌对多菌灵的敏感性变化的关系,首先进行了绿僵菌对多菌灵的敏感性测定。结果表明,所有供试野生型菌株的MIC均小于5.0μg/mL,EC50为1.658￣1.853μg/mL。紫外光对绿僵菌分生孢子照射后的结果表明,各菌株均出现了抗性菌落,突变率为2×10-6￣7×10-5,且这些抗性突变体能在600μg/mL下缓慢生长,EC50在245.47￣302.00μg/mL,其抗性至少比野生型菌株(<5.0μg/mL)高120倍。抗性突变体经再次的紫外光照射后,均回复突变成野生型菌株的敏感状态,在多菌灵5.0g/mL的PPDA培养基中均不能生长。表明了由紫外光诱导的绿僵菌抗性突变体在有紫外光的环境中其抗性是不稳定的。     

香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种在几种培养基上的生长特性

测定10株分离自广东省不同香蕉种植区的香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种在不同培养基上的形态、生长速率和产孢能力的差异。结果显示,不同生理小种菌株在PDA、Komada改良培养基、粉蕉组织浸提液培养基和香蕉组织浸提液培养基上的形态、生长速率和产孢能力等特性差异不明显,不能依据这些特性区分1号和4号生理小种;但在康乃馨叶片琼脂(Carnation leaf agar,CLA)培养基上产生的孢子形态具有明显差异,4号生理小种的菌株产生典型的尖镰刀状大孢子,孢子多6个隔,长约(36.80±5.33)～(44.93±4.80)μm,宽约(3.40±0.20)～(4.27±0.25)μm,占总孢子数的比例较大,为(40.87±9.67)%～(62.50±7.84)%,而1号生理小种个体产生的大型孢子前端钝圆,弯曲程度低,多4个隔,孢子长约(22.31±3.89)～(25.01±6.16)μm,宽约(3.42±0.23)～(3.90±0.24)μm,占总孢子数的比例很小,为(2.55±1.95)%～(4.50±1.76)%。     

进境美国大豆夹杂向日葵茎溃疡病菌的检疫鉴定

向日葵茎溃疡病菌是我国进境植物检疫性病原真菌。自进境美国大豆夹杂的向日葵种籽上,采用常规平板法分离并纯化获得1株疑似向日葵茎溃疡病菌Diaporthe helianthi菌株8616S3。形态学特征观察表明,该菌株在PDA上产生大量分生孢子器和β型分生孢子,但未见有性阶段。经rDNA ITS基因序列比对分析,发现该菌株与GenBank中多个向日葵茎溃疡病菌菌株的ITS基因序列同源性达99%以上,位于同一个分支。致病性测定结果表明,该菌株可侵染向日葵茎部,引起典型向日葵茎溃疡病症状。美国是我国主要大豆进口来源国,这是我国首次从进境美国大豆夹杂物中截获向日葵茎溃疡病菌D.helianthi。     

黑胫病菌(Leptosphaeria biglobosa)在油菜叶片和茎中的侵染过程观察

为明确黑胫病菌(Leptosphaeria biglobosa)在甘蓝型油菜叶片和茎中的侵染及扩展过程,利用绿色荧光蛋白(GFP)标记的黑胫病菌株接菌油菜叶片,利用激光共聚焦显微镜观察菌株在油菜叶片和茎中的侵染过程.结果表明,接种油菜叶片7 h后,分生孢子萌发并长出芽管;17 h后,芽管侵入气孔;24 h后,分生孢子全...     

橡胶树臭根病菌的鉴定及其生物学特性研究

利用海南省橡胶树臭根病病株上采集的病根样本,采用菌索组织分离法获得菌落后,进行子实体诱导产生分生孢子,再经单孢分离纯化获得菌株HNDZ001,通过柯赫氏法则验证、形态学特征观察及分子生物学技术对该菌株进行鉴定,确定菌株HNDZ001为引起橡胶树臭根病的匐灿球赤壳菌(Sphaerostilbe repens Berk.&Br.)。生物学特性测定结果表明,菌株HNDZ001在PDA培养基上菌落近圆形,表面黄白色,致密,背面呈深褐色至浅黄色,后期会产生黄褐色菌索和孢梗束;该菌菌丝生长的适宜条件为温度25~34℃、p H 7~9,最适生长条件是温度28℃、pH值为8、甘露醇为碳源、牛肉浸膏为氮源、完全黑暗,且在黄瓜汁培养基上菌丝生长最好。     

氮饥饿对玉米大斑病菌生长和发育的影响

以改良Fries合成培养基为基础,观测氮饥饿胁迫条件下玉米大斑病菌菌株01-11和03-22在菌落生长速度、分生孢子产生时间和数量、菌落形态和颜色等方面的变化。结果发现,在缺氮条件下,培养6 d后菌落生长停滞,颜色变淡;菌丝稀疏,老化程度加快;分生孢子出现时间提前,但产孢数量减少。研究结果说明,氮元素对玉米大斑病菌的生长和发育有非常重要的作用。     

草海桐链格孢叶斑病菌生物学特性及杀菌剂的室内筛选

西沙群岛草海桐链格孢叶斑病发生普遍,前期笔者鉴定了该病的病原菌为长柄链格孢菌（Alternaria longipes）。为进一步明确该病原菌的生物学特性及其对杀菌剂的敏感性,采用生长速率法对长柄链格孢菌的生物学特性进行了初步研究,并测定了苯醚甲环唑等13种杀菌剂对该病原菌的室内毒力。结果表明：该菌菌落最适生长培养基为马铃薯葡萄糖固体培养基（PDA）,其次是马铃薯蔗糖固体培养基（PSA）;适宜生长温度范围为25~30℃,最适生长温度为28℃;适宜生长pH为5.0~7.0,最适pH为6.0;最佳碳源为蔗糖,而果糖不利于菌落生长;最佳氮源为甘氨酸,而尿素不利于菌落生长;光照时间对菌落生长无显著影响。室内毒力测定表明,苯醚甲环唑水分散粒剂的抑菌效果最好,EC₅₀值为0.15 μg/mL,其次是氟硅唑乳油、己唑醇悬浮剂和戊菌唑乳油,其EC₅₀值分别为0.37、0.44和0.51 μg/mL,嘧菌酯悬浮剂和多菌灵可湿性粉剂的抑菌效果最差,EC₅₀值均大于3000 μg/mL。     

中国木薯白点病发生调查及病原生物学特性研究

2007—2018年,本课题组在对中国木薯主栽区的病害调查中发现了一种国内尚未记载的叶斑病。病害主要危害叶片,形成圆形或不规则形、常密集分布的白色至黄褐色的病斑,故命名为白点病。该病在云南、海南、广西等地区均有发生,绝大多数主栽品种和部分新育成种质均受害。经病菌分离和回接实验以及病菌形态观察、核糖体基因间隔区和β-微管蛋白基因序列分析,将该病病原鉴定为链格孢(Alternaria alternata)。病菌离体培养实验表明,菌丝生长最适条件为V9、OA、CA或CMA培养基,28℃,D-麦芽糖、D-山梨醇或D-乳糖,硝酸钠,光暗交替,pH8。分生孢子萌发最适温度为28℃,而致死温度为60℃处理5min。杀菌剂敏感性测定结果表明,在所测试的10种药剂中,10%苯醚甲环唑WG和25%吡唑醚菌酯WG的EC50值分别为0.12、0.47 mg/L,对菌丝生长抑制率最高。     

湘莲腐败病菌的鉴定和抑菌药剂筛选

湘莲腐败病是一种对湘莲危害极其严重的病,发病严重时,可导致莲藕严重减产甚至绝收。本试验从患病的莲藕上完成了对病原菌的分离,并对该致病菌进行了纯培养,从病菌的生物学特质、ITS序列分析及致病性接种鉴定等方面,确定该病菌的病原菌类型为尖镰孢菌。同时应用菌丝体生长速率法,对生产中防治湘莲腐败病的常用化学农药如多菌灵、百菌清等进行室内毒力测定,选择出最适的防治药剂。测试结果显示,不同药剂对病原菌菌丝生长的抑制作用存在明显的差别,抑制效果最明显的为硫磺·多菌灵,抑制中浓度（ EC50）为19．87μg/mL;其次为多菌灵,EC50为104．11μg/mL。     

木霉菌(胞外水解酶)拮抗大豆根腐病病原菌的机制研究

通过室内试验与温室试验研究了具有生防能力的木霉菌株Trichoderma MM35所分泌的胞外水解酶在拮抗大豆根腐病病原菌（F．oxysporum、R．solani）中的作用。试验结果表明：以病原菌F．oxysporum烘干的菌丝体作唯一碳源,可以诱导Trichoderma MM35分泌几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶。β-1,3-葡聚糖酶高水平诱导表达在前,几丁质酶诱导表达在后。土壤中接种Trichoderma MM35、F．oxysporum和R．solani之后都能够检测到几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性。向有病原菌F．oxysporum的土壤中接种Trichoderma MM35,土壤中几丁质酶活性能够显著升高。向有病原菌R．solani的土壤中接种Trichoderma MM35,土壤中的几丁质酶、G-1,3-葡聚糖酶活性都显著升高。     

甘肃中部地区亚麻枯萎病病原菌及其致病性差异研究

从亚麻根部分离到尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、茄病镰刀菌(F.solani)、串珠镰刀菌(F.moniliforme)、半裸镰刀菌(F.semitectum)、砖红镰刀菌(F.lateritium)5个种的101个菌株。依据柯赫式法则,确定其病原菌为尖孢镰刀菌。利用盆栽法做致病性测定,结果表明87个镰刀菌菌株的致病性差异显著。     

6种杀菌剂对马铃薯枯萎病菌的室内毒力测定

选择75%百菌清可湿性粉剂(WP)、36%甲霜灵锰锌悬浮剂(SC)、70%恶霉灵可湿性粉剂(WP)、50%甲基硫菌灵可湿性粉剂(WP)、6%春雷霉素可湿性粉剂(WP)、22.5%抑霉唑乳油(EC)6种杀菌剂对3种马铃薯枯萎病病原菌进行室内毒力测定。结果表明:6种药剂对病原菌菌丝生长的抑制效果差异很大,50%甲基硫菌灵(WP)和22.5%抑霉唑(EC)对3种病原菌的抑菌效果均很好,EC50分别为1.69、5.59、5.03μg/mL和3.60、5.17、1.58μg/mL。     

芒果树回枯病病原菌鉴定及其生物学特性研究

对芒果树回枯病病原菌进行鉴定,并对该病病原菌进行生物学特性测定。结果表明：引起芒果树回枯病的病原菌为可可球二孢菌（Botryodiplodia theobromae Pat.）。该菌菌丝最适生长温度为28～32 ℃,致死温度为60 ℃、10 min,最适pH值5～9;菌丝生长最佳碳源为蔗糖,木糖不适于该菌生长;最佳氮源是蛋白胨;全光照有利于该菌生长。     

福建荔枝酸腐菌的生物学特性研究

对福建省分离的荔枝酸腐病菌的形态学特征、生长速度、产孢、分生孢子萌发及侵染的影响因子进行研究.结果表明:福建荔枝酸腐病的病原菌为白地霉(Geotrichum candidum);该菌最适生长温度为24～28℃,pH值为8～9,光照时间为12～20h,最适生长与产孢培养基为PDA,分生孢子致死温度为65℃,10min;该菌分生孢子的萌发率与pH值、培养基、光照时间、温度及营养成分等有关,其中该菌在24～32℃,光照时间为16～20h,培养15 d时所产生的分生孢子萌发率最高;该菌不同培养时间所产生的分生孢子及不同温度条件对其侵染荔枝的能力也不同,培养10d所产生的分生孢子侵染力最强.侵染最适温度为28～32℃.该菌除了寄生荔枝外,人工接种还能侵染胡萝卜、番茄、水蜜桃、龙跟、葡萄、茄子和黄瓜.试验结果为进一步了解该病的发生危害提供理论依据.