龙眼体胚发生中期发育同步化的初步调控

试验以龙眼"红核子"胚性愈伤组织为材料,对龙眼体细胞胚胎发生进行同步化调控,2,4-D浓度为0.07mg/L时获得了心形胚,2,4-D浓度为0.05mg/L和0.06mg/L时获得了鱼雷形胚,2,4-D浓度为0mg/L时获得了高度同步化的子叶形胚。研究表明,通过培养基中2,4-D浓度的微量调整,基本能够控制龙眼体胚发育中期心型、鱼雷形胚的发育同步化。     

锯叶棕体细胞胚胎发生及植株再生体系的建立

从锯叶棕成熟种子中成功实现体细胞胚胎发生和植株再生。成熟种子放在MS培养基上培养,加入0.15%活性炭,452μmol/L 2,4-D和14.7μmol/L N6-2i P,所有成熟合子胚培养5周后长出体胚簇,12周后,外植体转移到2,4-D浓度减到90.4μmol/L的MS培养基中进行体胚增殖,之后体胚转移到含有0.9,9μmol/L TDZ或没有生长调节剂的基本培养基中转化成小植株。9μmol/L TDZ对植株再生是无效的,然而,在0.9μmol/L TDZ中作次培养有12%胚胎能长成完整植株,没有生长调节剂中35%胚胎长出嫩枝,这些嫩枝转移到含有22.2μmol/L NAA的培养基中全部都会生根。picloram和2,4-D对锯叶棕幼苗愈伤的诱导效果最佳,6-BA次之,对子叶来说,picloram和2,4-D对愈伤的诱导起不到任何作用,而对茎尖的诱导效果最好。     

基因型和采样时期对甜樱桃体细胞胚胎发生的影响

以不同基因型甜樱桃的未成熟胚为材料,从幼胚的采样时期、蔗糖浓度和2,4-D等方面探讨了甜樱桃体细胞胚胎发生的影响因素。结果表明：采样时期在花后35 d左右,幼胚≤5 mm时,胚性愈伤组织形成的频率较高（92.9%）;体细胞胚胎发生的适宜培养基为MS＋2,4-D 2.0 mg/L＋蔗糖40 g/L。     

板栗胚珠培养研究初报

以板栗胚珠为外植体,筛选了板栗胚珠培养适宜的外植体采摘时期、生长调节剂组合、培养基中碳源种类、培养基中糖浓度等指标,并深入探讨了板栗胚珠培养中存在的急需解决的技术问题,为板栗体细胞胚胎高频发生体系的建立奠定了基础结果表明: ①在板栗胚珠离体培养中,适宜的外植体采摘时间为板栗第1次盛花期后的30～44 d;②单独使用0.5或1.0 mg/L的2,4-D、6-BA、TDZ均不能诱导板栗胚珠的体细胞胚胎发生;③不同种类的细胞分裂素与2,4-D配合使用时,其种类和浓度直接影响出胚率,6-BA与2,4-D配合使用的效果明显优于KT、TDZ、ZT分别与2,4-D的组合,6.0 mg/L的2,4 D和0.5 mg/L的6-BA配合使用,有利于诱导胚珠的体细胞胚胎发生;④板栗胚珠培养中,胚性愈伤组织的发生与2,4-D浓度、细胞分裂素种类、细胞分裂素浓度都显著相关,4.0 mg/L的2,4-D和1.0 mg/L的TDZ 配合使用,利于诱导胚性愈伤组织的发生;⑤使用白砂糖作为培养基中的碳源最好,其效果明显优于蔗糖、葡萄糖、麦芽糖;⑥培养基中白砂糖浓度为10～40 g/L时,都能诱导板栗胚珠的体细胞胚胎发生,但外植体死亡率呈现出随糖浓度增加而升高的趋势.      

河南省育成花生品种的幼叶体细胞胚胎诱导

选用河南省育成的5个不同类型的花生品种,在6种培养基配方及2种光照处理下进行胚小叶外植体诱导体胚效率研究。结果表明,豫花1号、豫花22号、豫花9719、豫花9847等4个品种体细胞胚诱导率均在2,4-D浓度为15 mg/L时最高,2种光周期处理的趋势一致,豫花9719的体细胞胚诱导率最高。在4周全黑暗培养条件下,豫花12号体细胞胚诱导率在2,4-D浓度为5 mg/L时最高,而在暗2周转光暗交替(其中光照培养16 h,黑暗培养8 h)2周处理条件下,2,4-D浓度为10 mg/L时体细胞胚诱导率最高,达45.00%;可见暗培养的平均诱导率低于暗2周转光暗交替2周处理。因此,以育成品种胚小叶为外植体直接诱导体细胞胚,2,4-D浓度以10~15 mg/L为宜,暗2周转光暗交替2周处理的体细胞胚诱导率较高。     

秦艽体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以秦艽子叶与胚轴为外植体,诱导秦艽体细胞胚胎发生并建立植株再生体系。结果表明：不同外植体以及植物激素浓度和种类对体细胞胚胎发生均有一定影响,其中秦艽的子叶胚性愈伤组织的诱导率最佳激素组合为2,4-D1.0mg/L,6-BA0.5mg/L,其诱导率为61.3%,对胚轴胚性愈伤组织诱导最佳激素为2,4-D1.0mg/L,其诱导率为42.3%。将胚性愈伤组织转接至MS培养基,都可产生再生植株。     

新疆雪莲的体细胞胚胎发生及植株再生

通过对新疆雪莲进行胚性愈伤诱导培养(MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.05 mg/L),体细胞胚胎发生诱导培养(MS+2,4-D 0.1mg/L),体细胞胚胎分化培养(MS+PEG 25 g/L),体细胞胚胎萌发(MS+GA35 mg/L)和壮苗培养(MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.3 mg/L),首次通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲的植株再生,生根率100%,成活率达60%,为其大规模人工栽培奠定了基础。     

花生子叶不定芽的诱导和组织细胞学观察

以MS＋6.79μmol/L2,4-D＋22.19μmol/L6-BA为诱导培养基,以花生成熟种子子叶为外植体,诱导出大量丛生芽和少量体细胞胚;组织细胞学观察发现,子叶外植体不经过愈伤组织,直接诱导分化出丛生芽和体细胞胚,属于直接发生途径;并且子叶丛生芽和体细胞胚起源于外植体表皮或皮层细胞,为外起源方式。     

东北天南星体细胞胚胎发生及植株再生体系的优化

为建立东北天南星体细胞胚胎发生体系,以东北天南星幼叶为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导、体细胞胚胎发育及植株再生的培养基。结果表明,东北天南星叶片胚性愈伤组织及胚性细胞复合体诱导最适宜的培养基为MS+6-BA 2.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L,诱导率为98%;体细胞胚胎发育及植株再生最适宜的培养基为MS+6-BA 0.9 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 0.1 mg/L,体细胞胚萌发率为99.5%,萌发的胚20 d后全部发育成完整植株。     

北美蓝云杉体细胞胚发生技术研究

研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+PEG40001.0g/L,胚性愈伤组织增殖率最高为102.27%;3)IBA可促进成熟体细胞胚的诱导,以1/2LM+IBA0.5mg/L+ABA2.0mg/L(以上4种培养基均附加蔗糖30g/L,谷氨酰胺450mg/L,水解酪蛋白500mg/L,琼脂5.0g/L,pH=5.8)的体细胞胚诱导率最高,为38.10%;4)在1/2MS+1.0g/L活性炭的培养基上,体细胞胚萌发,子叶生长但胚根发生较少。北美蓝云杉体细胞胚诱导过程中出现严重的畸形胚现象及生根难的问题,今后有待进一步研究。     

SAHA处理供体细胞对山羊克隆胚胎早期发育的影响

为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂羟肟酸(SAHA)对体细胞和山羊核移植胚胎早期发育的影响,采用不同浓度SAHA处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其AcH3K9水平、细胞增殖能力、细胞周期及胚胎发育情况、乙酰化水平、多能性基因的表达水平。结果显示,SAHA处理后GEFs的AcH3K9水平显著上升(P0.05),2.5μmol/L SAHA处理浓度即可显著提高GEFs组蛋白H3K9的乙酰化水平;浓度≤2.5μmol/L时,对细胞增殖能力无明显影响;浓度为5.0μmol/L和10.0μmol/L时,细胞活力显著下降(P0.05)。AcH3K9上调会引起G0/G1和S期的细胞比例下降(P0.05)。因此,选择经2.5μmol/L SAHA处理的供体细胞进行核移植。试验组的胚胎卵裂率和囊胚率显著高于对照组(P0.05),其卵裂率接近于卵胞质单精子注射(ICSI)组。试验组的囊胚率乙酰化水平显著高于对照组,且低于ICSI组(P0.05)。与对照组相比,试验组囊胚的Oct4、Sox2和Nanog的mRNA表达水平均上升(P0.05),且均接近于ICSI组。说明,选用2.5μmol/L SAHA处理供体细胞可提高体细胞核移植效率和胚胎品质。     

龙眼体细胞胚发生中期的蛋白质组学研究

 【目的】了解龙眼体细胞胚发生中期（球形胚至子叶形胚）蛋白质组的变化,为进一步阐明植物体细胞胚发生的机制提供依据。【方法】进行龙眼体细胞胚发生中期的同步化调控,采用双向电泳和质谱对龙眼体细胞胚发生中期的蛋白质组变化进行分析。【结果】龙眼体细胞胚发生中期表达蛋白的种类随着体细胞胚的发育逐渐减少,但在鱼雷形胚阶段其种类数量有所回升,且增加的蛋白分子质量小于66.0 kD,pI主要集中在5.00—7.00。成功鉴定了35个差异蛋白,发现了多个与体细胞胚发生密切相关的蛋白。1/2以上的蛋白与代谢途径有关,多个蛋白与氧化胁迫有关。RAN2 和 GTPase ObgE在龙眼体细胞胚发生中期发生了活跃的变化。【结论】随着体细胞胚的发育,细胞不断分化,体细胞胚中表达的蛋白种类减少。氧化胁迫相关蛋白、RAN2 和 GTPase ObgE与龙眼体细胞胚发生的调控有关。     

越南紫薯胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎形成

【目的】越南紫薯〔Ipomoea batatas（L.）Lam〕品质优良,薯块均匀,商品性好,但产量偏低,产量性状亟待遗传改良,体细胞胚胎发生是快速繁殖和保持种性稳定的基础,对紫薯的遗传改良有重要意义。采用激素处理越南小紫薯外植体,研究越南紫薯的体细胞胚胎再生途径,为通过体细胞无性系变异筛选紫薯高产优质新材料提供新方法。【方法】以市场销售的越南紫薯为材料,以叶片和茎段作外植体,探讨植物生长调节物质种类（6-BA、NAA、2,4-D、ABA）及配比对越南紫薯培养的影响,建立越南紫薯体细胞胚胎发生及再生植株体系。【结果】叶片和茎段诱导愈伤组织培养基相同,难易程度一致,诱导配方为 MS+6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L;在普通愈伤组织诱导形成胚性愈伤组织过程中,2,4-D 起重要作用,其他激素起辅助作用,较好的诱导配方为 MS+6-BA 0.1 mg/L + 2,4-D 2.0 mg/L;在胚性愈伤组织诱导产生体细胞胚过程中,ABA 起着重要作用,并进一步发育和分化的适宜的培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。【结论】叶片和茎段愈伤组织诱导最佳培养基为 MS+6-BA 1.0 mg/L+0.2 mg/L NAA,愈伤组织转化为胚性愈伤最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L +2,4-D 2.0 mg/L;胚性愈伤形成体细胞胚胎最佳培养基为 MS+6-BA 0.1 mg/L + NAA 0.2 mg/L + ABA 0.5 mg/L。     

龙眼胚性愈伤组织体胚发生同步化调控及组织细胞学观察

以龙眼“红核子”胚性愈伤组织为材料 ,对龙眼体细胞胚胎发生进行同步化调控 ,并采用石蜡切片进行组织形态学观察 .结果表明 ,通过控制培养基中 2 ,4-D质量浓度可以调控龙眼体胚的发育进程 ;龙眼胚性愈伤组织的胚胎发生一般是内起源 ,且起源于单细胞     

巴西橡胶树花药体细胞胚胎发生的研究—培养基配方优化及体胚发生的组织学观察

利用来自巴西橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg)未成熟花药的愈伤组织进行了体细胞胚胎发生的研究。采用附加BAP、NAA及2,4-D各1mg/L的改良MS培养基诱导获得带有明显前胚结构的胚性愈伤组织。将这些愈伤组织再转移到含有1mg/L激动素及0.1mg/LIAA的培养基上进行培养继而获得体细胞胚胎。胚性愈伤组织的组织学研究结果显示,体细胞胚胎产生于愈伤组织外表的分生组织细胞。此外,在愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生中均观察到克隆变异的发生。     

玉米和胡萝卜的体胚发生与蛋白质表达

[目的]研究玉米和胡萝卜体胚发生中的生理生化变化,从而为调控其体胚发生过程提供依据。[方法]研究单子叶植物代表玉米和双子叶植物代表胡萝卜体胚发生的适合培养基,并利用电泳技术对其体胚发生过程中的可溶性蛋白进行比较。[结果]培养基MS＋6-BA1.0mg/L＋2,4-D0.2mg/L＋CH500mg/L较适于玉米愈伤组织的发生;培养基B5＋2,4-D0.2mg/L＋6-BA0.2mg/L较适于胡萝卜愈伤组织的发生。玉米愈伤组织中存在活跃的蛋白表达;而胡萝卜愈伤组织中的蛋白表达水平则比下胚轴对照明显下降。二者蛋白质表达的差异可能与物种差异有关。[结论]发现了单子叶植物和双子叶植物体胚发生中蛋白质表达的规律。     

月季优质品系的高效繁殖体系研究

以古老月季优质品系的小叶及复叶柄为外植体,探讨了月月粉（Rosa chinensis‘Pink China’）自交后代一优良品系月月红粉（Rosa chinensis‘Red and Pink’）的愈伤组织诱导、体细胞胚胎发生与增殖及植株高效再生的方法。结果表明,2,4-D可能是月月红粉最适宜愈伤诱导的生长激素;最佳外植体为复叶柄;同时添加L-p和AgNO₃对体细胞胚发生有促进作用;在MS+（3.0,4.0,5.0,6.0 mg/L）2,4-D+400 mg/L L-p+10 mg/L AgNO₃+3%Glucose+3 g/L GEL培养基上,外植体最初形成愈伤组织,经过16周培养后均不同程度发生体细胞胚;适合月月红粉体细胞胚增殖的培养基为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.05 mg/L BA+3%Glucose+0.3%GEL。体细胞胚在萌发培养基1/2 MS+3%Glucose+0.3%GEL+1.0 mg/L BA+0.01 mg/L NAA上萌发培养,最终建立了以月月红粉体细胞胚发生途径为基础的高效再生体系,为加快蔷薇属植物...     

枸杞体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以甘肃农业大学林学院实验基地内“宁杞 2 号”枸杞为材料,幼果用 0.1 % HgCl2进行消毒,在无菌条件下取出未成熟胚进行诱导,在胚成苗后进行继代和生根培养。培养结果表明:以 MS 为基本培养基,附加 6-BA1.0 mg/L和 IBA0.5 mg/L对体细胞胚胎诱导最有效;在 2,4-D为 1.0 mg/L和 1.5 mg/L时的培养基上胚性愈伤组织诱导率较高,分别为 51.0 %和 56.7 %;黑暗低温(10℃)处理 5d 不但可以促进细胞胚胎的发生,而且可以提高其发生的频率(60.0%)。     

龙眼体胚发生过程中特异蛋白的IEF和SDS-PAGE分析

植物体细胞胚胎发生的机理研究是目前植物细胞工程的前沿和优先发展领域 [1] .体细胞胚胎发生被认为是分离胚胎发育相关基因的良好替代体系 ,同时 ,进行体细胞胚胎发生研究对于研究植物细胞全能性的机制、基因的表达和胚胎的发育具有重要意义 [2 ] .龙眼 ( Dimocarpuslongan Lour.)是我国南方的重要热带、亚热带特产果树 .在龙眼上已建立了木本植物中最为优良的体细胞胚胎发生系统 [3 ,4] .体细胞胚胎与合子胚在生化上具有相似性 .蛋白质是基因表达的产物 ,而体细胞胚胎发生是胚胎发生相关基因按一定时空顺序表达的结果 .在体细胞胚胎发生…     

姜黄素对菊花DNA甲基化及其生长发育的影响

采用0、100、200、400μmol/L不同浓度的姜黄素对菊花神马组培苗进行处理,利用甲基化敏感扩增多态性技术(MSAP)分析DNA甲基化水平,并观察植株生长状况。结果表明:姜黄素处理对菊花花期的影响达到了显著水平,以200μmol/L姜黄素处理的菊花最早开花,花期可提前5~8 d。MSAP分析结果表明,经姜黄素处理的菊花组培苗的DNA甲基化比率随姜黄素浓度的升高而降低,在0、100、200、400μmol/L姜黄素处理下,甲基化比率分别为58.40%、50.44%、48.24%和46.00%。经姜黄素处理的菊花组培苗矮化萎蔫,叶片数减少,分芽能力减弱。移植至室外后,植株矮化等表型抑制作用稳定遗传。表明姜黄素处理菊花可使其基因组甲基化水平降低,产生表观遗传变异,导致提前开花。