厚朴和凹叶厚朴的质量评价

利用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）建立简单、快速、精确、同时测定厚朴和凹叶厚朴中绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、和厚朴酚、厚朴酚的测定方法。色谱分离是反相C₁₈柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,在检测波长294 nm处进行分析。在研究的浓度范围内线性良好,r大于0.9995,回收率为98.28%～104.19%。该方法有效地应用于测定24个源于不同产地、不同采集时间的厚朴和凹叶厚朴样品中7个化学成分的测定。根据这7个特征化合物的浓度,利用聚类分析（HCA）及组成分分析（PCA）对这些厚朴和凹叶厚朴样品进行分类和区分,为合理利用和指导中药资源提供了依据。     

不同树龄凹叶厚朴7种次生代谢产物积累研究

目的:建立研究同一地域来源、不同树龄的凹叶厚朴7种次生代谢产物质量分数变化,为确定凹叶厚朴最佳采收条件提供参考依据.方法:利用高效液相色谱法(HPLC)对绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、和厚朴酚与厚朴酚进行分离,并建立标准曲线及回归方程.分析随着树龄的增加,其叶、枝皮、茎皮和根皮中7种次生代谢产物质量分数积累情况.结论:不同树龄的凹叶厚朴叶片、枝皮、茎皮和根皮中7种代谢产物质量分数随着树龄积累差异较大,绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷和槲皮素等主要存在于在树龄相对较小的叶片和枝皮中,随着树龄从7年增加至26年其积累变化不明显;厚朴酚与和厚朴酚主要分布于凹叶厚朴的树皮中,其中根皮质量分数最高,茎皮、枝皮次之;7至13年树龄的植株,其厚朴酚与和厚朴酚积累量随树龄增加而明显增加,13至26年树龄的植株随树龄增加二者积累量增幅不大.因此,凹叶厚朴的最适采收对象是树龄超过13年之后的植株.     

秦巴山区不同季节厚朴叶中厚朴酚含量的测定

[目的]从秦巴山区4月和8月的厚朴叶中提取厚朴酚,并测定其厚朴酚的含量,为综合利用厚朴叶提供理论依据。[方法]用甲醇分别提取4月和8月厚朴叶的厚朴酚,精密称定,用甲醇定容至25 ml容量瓶中,利用高效液相色谱法测定厚朴叶中厚朴酚的含量。高效液相色谱法工作条件为紫外检测波长294 nm,色谱柱为C18（4.6 nm×150.0 nm,5μm）,柱温23℃,进样量15μl,流速1 m l/min,流动相甲醇∶水=79∶21。[结果]秦巴山区厚朴叶中的厚朴酚含量存在差异,4月厚朴叶中厚朴酚的含量为0.29‰,8月厚朴叶中的厚朴酚含量为0.32‰。[结论]秦巴山区8月厚朴叶中厚朴酚含量比4月稍高,可从叶子中提取厚朴酚。     

高效液相色谱法测定厚朴中7种代谢产物含量

[目的]采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定厚朴（Magnolia officinalis Rend.et Wils.）中7种代谢产物含量。[方法]色谱条件：Shim-pack CLC-ODS色谱柱（150mm×6mm,5μm）;检测波长：320和294nm;流动相：A相为乙腈,B相为0.1%甲酸,采用梯度洗脱。[结果]峰面积（y）对绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、厚朴酚和和厚朴酚对照品溶液浓度（x）的回归方程分别为：y=1E＋05x-306360（r=0.9998）、y=5E＋04x-79920（r=0.9994）、y=5E＋04x-55280（r=0.9999）、y=5E＋04x-60530（r=0.9999）、y=2.5E＋04x-57010（r=0.9998）、y=2E＋04x＋7102（r=0.9999）和y=2E＋04x＋11028（r=0.9999）,各对照品溶液在3.125～100.00μg/ml内与峰面积有良好的线性关系。绿原酸、芦丁、金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素、厚朴酚和和厚朴酚对照品的加样回收率分别为103.98%、101.65%、99.17%、103.59%、103.59%、102.44%、104.62%,RSD分别为3.37%、2.86%、3.02%、2.89%、2.86%、1.18%、3.67%。厚朴中各部位7种化合物含量存在一定的差异,在叶中,7种代谢产物均有积累,其中和厚朴酚、厚朴酚和槲皮苷的含量较高,金丝桃苷和槲皮素的含量较低。[结论]该研究建立的HPLC法简捷、方便,稳定性和重复性好,可为进一步开发利用厚朴提供依据,并为同时测定黄酮类化合物及酚类化合物提供新的方法。     

海珠湿地植物群落与水质的关系

以海珠国家湿地公园一期为研究对象,设置８个样点对海珠湿地的水质状况进行监测．结果表明,再力花（Ｔｈａｌｉａ ｄｅａｌｂａｔａ）＋美人蕉（Ｃａｎｎａ ｉｎｄｉｃａ）－苦草（Ｖａｌｌｉｓｎｅｒｉａ ｎａｔａｎｓ）群落、美人蕉＋菖蒲（Ａｃｏｒｕｓ ｃａｌａｍｕｓ）－苦草群落、再力花＋风车草（Ｃｙｐｅｒｕｓ ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉｕｓ）－苦草群落和花叶芦竹（Ａｒｕｎｄｏ ｄｏｎａｘ ｖａｒ． ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）＋铜钱草（Ｖａｌｌｉｓｎｅｒｉａ ｎａｔａｎｓ）－苦草群落等４个植物群落生长的水体中总磷、总氮、ＮＨ＋４－Ｎ和化学需氧量的浓度均较低,水体水质较好,由此推测苦草对水质净化效果明显．     

凹叶厚朴内生真菌产厚朴酚及和厚朴酚菌株的筛选

利用现代检验技术对药用植物凹叶厚朴中内生真菌代谢产物进行筛选,通过对凹叶厚朴中分离得到的34株内生真菌进行液体发酵培养,采用紫外-可见分光光度法,高效液相色谱法分析各菌株代谢产厚朴酚及和厚朴酚的能力。经初步检测结果发现,其中有1株菌代谢能够产生厚朴酚;另有1株菌代谢能够产和厚朴酚。为下一步研发凹叶厚朴内生真菌代谢产物提供理论依据,丰富内生真菌菌种资源库。     

厚朴叶的开发利用研究进展

综述了近年来对厚朴叶化学成分其及药理活性的研究现状,结果证明其中的总酚、挥发油、棕榈酮等具有明显的生物活性,从厚朴叶中提取的厚朴酚及和厚朴酚的含量因其不同的采收季节、不同产地和不同的提取工艺而有显著差别。介绍了厚朴叶在药用、日用化工、植物源杀菌剂的开发与应用研究进展。     

高效液相色谱法同时测定柑橘果实中18种类黄酮的含量

【目的】建立一种高效液相色谱法同时测定柑橘果实中18种类黄酮（圣草次苷、二氢槲皮素、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、野漆苷、槲皮苷、圣草素、香峰草苷、枸橘苷、柚皮素、木犀草素、山奈酚、香叶木素、橙黄酮、川陈皮素、橘皮素）的含量。【方法】 色谱柱为ZORABX SB-C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm）,流动相为甲醇-甲酸-水,梯度洗脱,流速为0.7 mL•min-1,柱温25℃,检测波长黄烷酮为283 nm、黄酮和多甲氧基黄酮为330 nm、黄酮醇为367 nm。【结果】 18种类黄酮在42 min内完全分离,线性范围为62.4—960 mg•L-1（r=0.9996—1.0000）,定量限为0.05—0.133 μg•mL-1,回收率为88.70%—104.76%,相对0.33%—3.05%（n=6）。【结论】该方法简便、快速、准确、可靠,适合柑橘果实中18种类黄酮的含量测定。     

正交法优选厚朴叶中厚朴酚与和厚朴酚的提取工艺

[目的]优选厚朴叶中厚朴酚与和厚朴酚的提取工艺条件。[方法]以厚朴酚与和厚朴酚的总提取率为考察指标,采用正交试验法对厚朴叶中厚朴酚与和厚朴酚的提取条件进行优选。[结果]最佳提取条件为:料液比1∶10(g/ml),乙醇浓度80%,提取次数1次,提取时间1.5 h。[结论]该提取工艺方法合理,有效成分提取效率较高,适用于厚朴叶中活性成分的提取。     

棉铃虫5龄幼虫对棉酚和印楝素的味觉适应性行为研究

【目的】研究棉铃虫幼虫对棉酚和印楝素的味觉适应性行为,为棉铃虫的防治提供参考依据。【方法】采用叶碟法和味觉感受器切除法进行不同取食条件下棉铃虫5龄幼虫的取食选择行为试验。供试化合物为处理后终浓度为2mmol／L的棉酚和印楝素。【结果】正常人工饲料饲养的棉铃虫幼虫对棉酚和印楝素均十分敏感,取食对照叶碟量显著高于处理叶碟（P〈0．05）;切除中栓锥感受器后棉铃虫幼虫取食含棉酚或含印楝素的叶蝶量与正常叶碟有显著差异（P〈0．05）,而切除侧栓锥感受器后棉铃虫幼虫取食含棉酚或含印楝素的叶蝶量与正常叶碟差异不显著（P〉0．05）;以含有低浓度取食抑制素的人工饲料饲养的棉铃虫幼虫对棉酚和印楝素不敏感,取食对照叶碟量与处理叶碟无显著差异（P〉0．05）。【结论】棉酚和印楝素是棉铃虫幼虫的取食抑制素,侧栓锥感受器中含有对棉酚和印楝素敏感的味觉神经元,不同取食经历的棉铃虫幼虫对棉酚和印楝素具有行为适应性。     

体外培养法探讨不同蛋白源对大菱鲆肠道菌群的影响

肠道菌群是动物正常生长发育中必不可少的重要组成部分,与动物健康密切相关,高比例的豆粕替代鱼粉作为鱼类饲料蛋白源严重影响了鱼类健康。采用3种不同种类的平板培养基对大菱鲆肠道不同部位菌群数量进行了体外模拟培养,证实了大菱鲆肠道各部位间均存在大量的微生物,且大菱鲆肠道可培养的需氧菌数量高于厌氧菌,前肠可培养的微生物数量也相对较多。采用DGGE指纹图谱检测和Bio-rad的Quantity One分析软件研究了蛋白源体外发酵对大菱鲆肠道菌群结构差异的影响。结果表明,大菱鲆肠道菌群受不同蛋白源的影响,且厌氧发酵条件下,发酵豆粕和鱼粉有着相似的主菌群结构。通过对内容物及发酵液的PCR-DGGE指纹图谱进行聚类分析和切胶回收,发现有氧条件下,菌群种类亲缘关系受蛋白源影响较大,且变形菌门为大菱鲆肠道利用蛋白的优势菌群。     

草鱼肠道抗菌肽对细菌形态结构的影响及理化性质研究

通过扫描电子显微镜观察草鱼肠道抗菌肽处理后的大肠杆菌、金色葡萄球菌、嗜水气单胞菌的形态结构的变化.结果显示,经过抗菌肽处理后的细菌形态发生变化,菌体严重变形,表面变得粗糙,出现皱褶,胞膜破裂.对草鱼肠道抗菌肽的理化性质的研究结果显示,草鱼肠道抗菌肽具有很好的热稳定性,耐胰蛋白酶特性.     

鲈鱼肠道内产蛋白酶菌的分离与筛选

[目的]探索产蛋白酶菌对鲈鱼肠道菌群的影响。[方法]利用酪蛋白培养基和脱脂乳培养基,从健康鲈鱼肠道中筛选产蛋白酶的益生菌,并利用福林-酚试剂法测定其酶活力。[结果]从健康鲈鱼肠道中共筛选出18株产蛋白酶的益生菌,占健康鲈鱼肠道菌群的17.7%;18株菌均具有产蛋白酶酶活力,其中SC14、SE1、SF7和SG22株产酶活力特别强,相对酶活力分别为2.285、3.618、2.190、4.474U/ml。[结论]为今后制成益生菌制品应用于水产养殖,提高养殖动物的存活率和生长速度提供了理论基础。     

桑叶叶际和家蚕肠道细菌群落结构及功能分析

家蚕是我国重要的经济昆虫,主要以桑叶为食,了解家蚕肠道及所食桑叶叶际微生物对减少家蚕病害具有重要意义。以5龄第3天的家蚕幼虫和所食桑叶为研究对象,利用高通量测序技术对家蚕肠道和叶际细菌的16S rDNA V3-V4区序列进行测序分析。结果表明：桑叶叶际和家蚕肠道各部位细菌的多样性指数（Shannon指数和Simpson指数）无显著差异（P > 0.05）;NMDS分析显示桑叶叶际细菌与家蚕肠道细菌各自聚类,家蚕肠道各部分的细菌菌群无显著差异。桑叶叶际和家蚕肠道中共注释到的主要分类阶元有29 个门、268 个属：前4个优势门为变形菌门（Proteobacteria）、厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）和放线菌门（Actinobacteria）;芽孢杆菌属Bacillus为桑叶叶际细菌的最优势属,泛菌属Pantoea为家蚕前肠细菌的最优势属,鞘氨醇单胞菌属Sphingomonas为家蚕中肠和后肠细菌的最优势属。通过功能预测可知,消化系统、免疫系统、能量代谢、代谢性疾病和传染性疾病在家蚕的前肠、中肠中占比较高,氨基酸代谢、碳水化合物代谢、神经退行性疾病、免疫系统疾病、脂类代谢、其他氨基酸代谢、心血管疾病和核苷酸代谢在家蚕的后肠中占比较高。家蚕肠道细菌群落与叶际细菌群落前4个优势菌门一致;家蚕肠道的前肠和中肠功能菌群相似,与后肠差异较大。     

柞蚕肠道菌群分析及产酶菌的筛选与鉴定

 【目的】研究柞蚕肠道菌群结构及产酶菌,探寻具有新的生理功能的微生物,用于研制微生态制剂,以提高柞蚕生产的叶丝转化率及抗病能力。【方法】采用培养法分离柞树叶饲喂的5龄柞蚕幼虫肠道细菌,通过生理生化特性结合16S rDNA系统发育分析,对其肠道细菌群落类型进行鉴定,采用筛选培养基筛选产纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶的菌株。【结果】获得的柞蚕肠道菌有芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌,其中以芽孢杆菌为主要菌群。芽孢杆菌是肠道菌中产纤维素酶、蛋白酶的主要菌群;葡萄球菌产蛋白酶能力较弱;肠杆菌不产酶。【结论】柞蚕肠道菌与家蚕肠道菌群结构相似,筛选出的产酶菌活性较高,可以制备微生态制剂用于蚕业生产。     

海洋动物中微生物的分离与抗金黄色葡萄球菌活性筛选

为了从海洋环境中寻找新的抗金黄色葡萄球菌抗生素,分离并筛选了广西北海70个海洋动物表皮或肠道中的微生物.样品处理后,分别用M1、马丁和高氏培养基分离细菌、真菌及放线菌,以卡那霉素作标准曲线对分离菌株发酵上清测活.分离出250株细菌,64株真菌,6株放线菌.产生抗金黄色葡萄球菌活性物质的细菌为28株,占细菌总数的11.2 %;能产生抗金黄色葡萄球菌活性物质的真菌为12株,占真菌总数的18.8%;能产生抗金黄色葡萄球菌活性物质的放线菌为2株.实验证明海洋动物表皮及肠道存在丰富的抗金黄色葡萄球菌微生物,且部分未见报道.     

投饵与不投饵池塘刺参肠道异养菌区系比较

从2007年6月到2008年5月,对威海市荣成不投饵刺参养殖池塘和青岛市胶南投饵刺参养殖池塘内的刺参肠道内的异养细菌总活菌数的周年变化进行了调查,并分析了刺参肠道内异养细菌的区系组成。结果表明,投饵与不投饵池塘中刺参肠道内活菌的数量随季节总体变化趋势相似,均为春夏季较低,秋冬季较高,但不投饵池塘刺参肠道内活菌数量在0．01水平显著高于投饵池塘。通过对分离得到的菌株鉴定,发现308株细菌分别属于20个属。在投饵和不投饵池塘中,刺参肠道内的优势菌均为弧菌、假单胞菌和芽孢杆菌,但在投饵池塘中,刺参肠道内的弧菌和芽孢杆菌的比例明显高于不投饵池塘,假单胞菌和其他细菌的比例则明显低于不投饵池塘。不投饵池塘刺参肠道细菌Shannon-Wiener多样性指数在夏季明显高于投饵池塘,其他季节差异不明显。从异养细菌的种类组成看,色杆菌属、Endozoicimonas、瑰杆菌属、副球菌属、短杆菌属、Jeotgalicoccus、Glaciecola仅出现在不投饵池塘刺参肠道内,而屈扰杆菌属、希瓦氏菌、八叠球菌属则仅出现在投饵池塘刺参肠道内。     

越夏期蜜蜂肠道细菌种类鉴定

从越夏期意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂成虫肠道中分离、纯化、培养,获得9株细菌.通过形态学观察和生理生化特性研究,从9株细菌中鉴定出芽孢杆菌属(Bacillus)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、泛生菌属(Pantoea)、肠杆菌属(Enterobacter).     

乳酸菌在不同开食制度下对新生仔猪胃肠道发育的影响

将12窝仔猪随机分为4组,即在饲喂与不饲喂开食料2种饲养制度下,分别设饲喂乳酸菌剂组和饲喂脱脂乳的对照组,每组3个重复.仔猪于7日龄开食,21日龄断奶,开食早期饲喂乳酸菌剂或脱脂乳.于仔猪7、14、21、24、35日龄每窝屠宰一头,取胃底、十二指肠、空肠组织进行组织形态学观察.结果表明:乳酸菌促进断奶后仔猪胃底腺盐酸细胞的增加(P<0.01),开食促进断奶前后胃底腺盐酸细胞的增加(P>0.05);乳酸菌和开食可促进断奶前十二指肠肠绒毛高度的维持,前者作用较短暂,后者的作用则更为明显,但两者对空肠肠绒毛无显著影响;添加乳酸菌与开食之间不存在互作效应.     

患病罗汉鱼疑似病原菌分离鉴定与药敏试验

[目的]分离鉴定患病罗汉鱼疑似病原菌,并进行药敏试验。[方法]对患病罗汉鱼进行体表、口腔、鳃、肾、肝、肠等器官及肌肉组织的病理变化观察。在病灶（下颌）、肾、肝、鳃处分离细菌,并对分离的细菌进行初步鉴定和药敏试验。[结果]在病灶（下颌）、肾、肝、鳃处分离出3株优势细菌。通过菌落形态观察以及生理生化测定,鉴定出该3株细菌分别为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）、假单胞菌（Pseudomonas sp.）、链球菌（Streptococcus sp.）,适宜盐度分别为：10.00‰~20.00‰0、.01‰~1.00‰、0.01‰~1.00‰,对四环素、红霉素、土霉素等药物高度敏感。[结论]为找到预防与治疗罗汉鱼疾病的有效手段提供了科学依据,同时也为其他观赏鱼细菌性疾病的防治提供参考和借鉴。