广西奶水牛结核病三种检测方法的比较

应用牛结核变态反应、PCR和分离培养3种方法,对奶水牛进行牛结核病检测,比较3种检测方法的符合率。结果表明,1850头奶水牛中有78头奶水牛的皮内变态反应结果为阳性,而对变态反应阳性的牛样品进行PCR检测和分离鉴定,分别鉴定出4份和2份牛分枝杆菌。阳性检出率以变态反应为最高(4.22%),PCR和分离鉴定的较低,分别为0.21%和0.11%。变态反应与PCR检测、分离鉴定的符合率较差,而PCR检测与分离鉴定的符合率相对较接近。因此建议,在对奶水牛群进行结核病检测时,应先以变态反应检疫牛群,再结合PCR检测进行综合诊断,更有利于奶水牛结核病的检测与净化。     

牛源分枝杆菌变应原对免疫豚鼠变态反应试验

本文采用牛结核PPD检出阳性牛分离的分枝杆菌(包括有牛分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、乌胞内分枝杆菌2型及9型、副结核分枝杆菌、偶发分枝杆菌以及草分枝杆菌等),制成灭活免疫原进行豚鼠接种,并以各种分枝杆菌PPD进行变态反应检查,以观察其发生交叉反应的情况。试验结果表明:各种分枝杆菌除发生主反应外,均表现出明显的相互交叉的变态反应,尤以瘰疬分枝杆菌、乌胞内分杆菌2型及9型、副结核分枝杆菌以及牛分枝杆菌等交叉严重。提示:在牛结核及副结核的检疫中出现其它分枝杆菌干扰的假阳性反应。     

浅谈奶牛结核病检疫净化中存在问题

北京市密云县自2003-2007年,用结核分枝杆菌PPD进行皮内变态反应试验共监测出结核阳性奶牛544头,阳性率1.3%,并对74头结核可疑奶牛进行跟踪调查,其中有25头奶牛淘汰,有49头奶牛,经过复检后有5头检测为阳性,阳性率为10.2%,有44头检测为阴性。因此,做好奶牛的检疫净化工作,扑杀结核阳性牛,净化畜群,着重做好结核疑似奶牛的复检和隔离以及新引进奶牛的检疫、隔离以及消毒工作,是切断传染源防控结核病的重要手段。     

牛分枝杆菌广西分离株ESAT-6基因鉴定及遗传进化分析

根据GenBank中牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis,M.bovis）的ESAT-6基因序列（No：BX248347）设计1对引物,PCR扩增获得2株牛分枝杆菌广西分离株（mt359、mt370）,纯化产物与pMD18-T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,对经双酶切和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序及同源性比较分析。结果表明,牛分枝杆菌广西分离株mt359、mt370与GenBank中已发表的6株毒株（5株结核分枝杆菌和1株牛分枝杆菌）的核苷酸同源性及推导的氨基酸同源性均为100.0%,与牛分枝杆菌标准株C680001的核苷酸同源性及推导的氨基酸同源性均为96.6%。说明致病性牛分枝杆菌的ESAT-6基因十分保守,不存在种间差异。     

浅谈犁倭镇奶牛结核病检疫

按照牛结核病提纯结核菌素变态反应操作的方法,对226头奶牛进行监测检疫。结果表明,222头奶牛为结核病阴性,3头为可疑,其中1头为高度可疑。建议对高度可疑牛只作淘汰处理,对其他可疑牛只作进一步复检,仍为可疑者,按照阳性对象处理。     

BA—Dot—ELISA检测牛结核血清抗体的研究

利用BA—Dot—ELISA检测72份结核变反阳性牛血清,阳性率为69.5％,比常规ELISA(44.4％)高。用该法检测布鲁氏菌病、粘膜病、传染性鼻气管炎、白血病病牛血清及堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌高免牛血清均无交叉反应,但对50份副结核变反阳性牛血清出现了一定的交叉。该法重复性好,简便快速,结果判定不需特殊仪器。     

应用PCR试剂盒对奶牛结核病的检测

应用聚合酶链式反应技术制备的PCR式剂盒,对贵州省某奶牛场140份血样和奶样标本中的结核分枝杆菌进行检测,结果显示:在111份奶样中有8份为阳性,阳性检出率7.2%。在39份血样中12头牛为阳性,阳性检出率为30.76%。本试验对PPD检测与PCR检测法进行验证,将1200头牛中PPD检测阳性牛和可疑牛,再用PCR法进行检测,PCR法阳性牛共计20头份,阳性检出率为1.67%,PPD法阳性牛24头份,阳性检出率为3.67%。结果表明:PCR试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点。     

γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用

【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况,为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查,共检疫5478头奶牛和1580头奶水牛。【结果】2008～2011年从广西南宁、柳州、北海、钦州、桂林等市累积检测出皮内变态反应阳性奶牛63头、水牛17头,阳性检出率分别为1.15％和1.08％,总体上广西奶牛及水牛结核病阳性率呈现逐年降低的趋势。通过采用自制水γ－干扰素EusA检测试剂盒和Bovigam牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒对牛结核病进行检测,发现γ-干扰素ELISA检测的牛结核病阳性率低于皮内变态反应,且准确度高。【结论】对牛群进行结核病检测时,先以变态反应检疫牛群,再结合γ-干扰素ELISA检测进行综合判断,更有利于牛结核病的检测与净化。     

副结核分枝杆菌McAb的某些特性鉴定

以超声波粉碎的副结核分枝杆菌地方株Ｃ２抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经与ＮＳ－１骨髓瘤细胞三次融合，获得了３株能稳定分泌抗副结核分枝ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系，其染色体数目为７８－１１０条，分别为ＩｇＭ和ＩｇＧ２。应用间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养液，腹水和血清效价为１０＾－２～１０＾－７。交叉试验证明，ＭｃＡｂＯ１与受试的各株副结核分枝杆菌反应强烈，与牛分枝杆菌和草分枝杆菌有微弱特异性抗原之一。ＳＤＳ－Ｐ     

应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分枝杆菌

本研究建立1种双重PCR技术,用于区分鉴定结核与非结核分枝杆菌.在最佳扩增反应条件下.检测引物P1、P2和P3、P4扩增结核分枝杆菌的特异性及敏感性,并对19株结核分枝杆菌和9株非结核分枝杆菌临床分离株进行扩增鉴定.结果表明,引物P1、P2能扩增所试13株结核和非结核分枝杆菌,P3、P4仅扩增结核分枝杆菌复合群菌种,两对引物同时扩增3种非分枝杆菌均为阴性.两对引物双重PCR检测结核分枝杆菌DNA的敏感性分别为100pg/μl和10pg/μl.检测28株临床分离株,结核分枝杆菌可扩增出368bp和225bp 2条带,非结核分枝杆菌仅扩增出一条361bp～383bp带.因此,该双重PCR技术的建立为结核及非结核分枝杆菌的快速鉴定提供了1个可供选择的手段.     

排除牛结核变态反应中禽结核干扰的研究

以牛型结核菌素和禽型结核菌素对黑龙江省部分地区300头牛进行牛结核病检测,按OIE、中国和欧共体对皮内变态反应判定标准进行结果判定,同时以ELISA方法对牛血清进行检测。不同方法不同标准检测结果的比较分析结果表明:在牛结核的检疫中存在禽结核的干扰,采用牛型结核菌素和禽型结核菌素皮内变态反应结合ELISA方法进行检疫可排除禽结核的干扰。     

猪源MAIC菌分离及其血清型的研究

本文首次报道了我国屠宰渚淋巴结中的人畜共患病原菌——MAIC菌的分离及其血清型的研究结果。结果表明:我国亦有猪的非典型分枝杆菌病存在,本试验共分离出17株MAIC菌,分离率达5.6％,且经过研究证明它们分别属于MAIC菌的4、9、19型,以4型最多,这与世界各地如日本及欧美等国的报道均有差异。     

应用基因分型技术研究牛结核分枝杆菌分子流行病学

牛分枝杆菌是引起牛结核病(bTB)的病原体,侵染宿主广泛,可感染多种家畜和野生动物,对人类和动物健康构成巨大危害。随着多年不懈的研究,有关分枝杆菌分子流行病学的知识积累不断增加。作者对近年来应用新的基因分型技术研究牛结核分枝杆菌分子流行病学方面的一些研究进展。这些技术包限制性片段长度多态性分析(RFLP)、PCR介导的间隔区寡核苷酸分析(spoligotyping)、数目可变串联重复位点(VNTR)等。主要用于对人、牛、家畜以及野生动物的结核病分子流行病学进行分析和监测。另外,还利用一系列敏感的基于PCR的技术从分枝杆菌杆菌复合体(NTM)中对菌型进行鉴别。对分枝杆菌感染分子流行病学的全面了解,有助于对本病扩散传播机制的深入研究。可为制定科学防治结核病的措施做出贡献。     

几种牛副结核琼扩抗原的比较

利用免疫学方法制备了牛副结核细胞浆抗原、细胞壁声波粉碎抗原、Sephadex-G200层析抗原和草柱亲和抗原，分别与牛副结核阳性、弱阳性及阴性血清进行琼扩散试验。结果表明：细胞浆抗原、细胞壁超声波粉碎抗原与阳性、弱阳性血清之间，以及层析抗原和草柱亲和抗原与阳性血清之间有沉淀线出现，而其它的均无沉淀线出现。12个月后，重复该试验，结果细胞浆抗原、细胞壁超声波粉碎抗原阳性血清之间有沉淀线出现，而与弱阳性血清之间以及层析抗原和草柱亲和抗原与阳性血清之间均推动了沉淀线。结果显示：细胞浆抗原和细胞壁声波粉碎抗原在用作牛副结核琼护抗原时，优化层析抗原和草柱亲和抗原。     

Delayed hypersensitivity: bone marrow as the source of cells in delayed skin reactions

Adult Lewis rats were thymectomized, irradiated, and restored with bone marrow from allogeneic (or F(1)) donors. They were passively sensitized to tuberculin by a subsequent transfer of Lewis lymph node cells and were given intradermal skin tests with tuberculoprotein. In 24-hour skin reactions the majority of cells, in successive experiments, were shown to be allogeneic (or F(1)) with the use of isoantibody against the antigens of the transplanted marrow cells and by the indirect fluorescent antibody technique. Our results demonstrate that the non-specific cells making up a large proportion of the infiltrating elements in tuberculin skin reactions probably originate in the bone marrow.     

鹿结核病的病原分离

作者从1986年7月到1988年5月在吉林省和北京市不同地区10个鹿场,用牛型OT点眼试验,选取阳性反应的鹿只48头,捕杀后,采取眼观有病变的肺和淋巴结为病料共96份,按照《分枝杆菌鉴定规程》对96份病料进行了细菌的分离。共分离出36株分枝杆菌,分离率为75.0％(36/48)。试验证明,对鹿体分枝杆菌的分离前处理采用4％H_2SO_4处理较好。选用丙酮酸钠和改良罗氏培养基适合于分枝杆菌的分离培养。涂片采用Ziehl—Neelsen染色法较好。菌体的形态、大小及培养特性与其他动物的分枝杆菌一致。     

A novel real-time RT-PCR with TaqM an-MGB probes and its application in detecting BVDV infections in dairy farms

A real-time RT-PCR assay using Taq Man-MGB probes was developed to detect and type the bovine viral diarrhea virus(BVDV) in cattle.Universal primers and Taq Man-MGB probes were designed from the 5′-untranslated region of known pestiviral sequences.Prior to optimizing the assay, c RNAs were transcribed in vitro from the BVDV 1 and BVDV 2 RTPCR products to make standard curves.The detection limit of the assay was 1.72×102 copies for BVDV 1 and 2.14×102copies for BVDV 2.The specificity of the assay evaluated on several BVDV strains including bovine herpesvirus 1(BHV 1), foot and mouth disease virus(FMDV) and several classical swine fever virus(CSFV) strains showed specific detection of the positive virus over 40 cycles.The assay was highly reproducible with the coefficient of variance ranging from 1.04 to 1.33% for BVDV 1 and from 0.83 to 1.48% for BVDV 2, respectively.Using this method, we tested a total of 2 327 cattle from three dairy farms for the presence of BVDV persistently infected(PI) animals.In this assay, each RT-PCR template contained a mixture of ten samples from different animals.The occurrence rate of PI cattle in three farms ranging from 0.9 to 2.54% could represent partly the PI rates in cattle farm in China.In conclusion, using our real-time PCR assay, we could effectively detect and type BVDV and identify PI cattle in a rapid and cost-effective manner.