小鼠冻胚分割试验

研究了分害虫所用溶液，冷冻前胚胎发育时期和分割后将半胚是否装入透明带对冻胚分割效果的影响，结果表明：①将解冻囊胚分割后，无论是否将半胚装入透明带对冻胚分割的效果均无显著影响（P＞0.05）；②在PBS中分割解冻桑椹胚和囊胚的效果无显著差异（P＞0.05）；③与分割解冻桑椹胚相比，在蔗糖液中分割解闲囊胚可显著提高冻胚分割效果（P＜0.05）。将在蔗糖液中分割冻囊胚获得10对半胚移植于5只受体，结果有2只妊娠，共获得半胚仔鼠6只，其中2对为同卵双生。     

胚胎分割液及分割方法对绵羊体外胚分割效果的影响

主要研究了胚胎分割液、分割方法和胚胎发育时期对绵羊体外生产胚胎的影响.体外采集绵羊卵丘卵母细胞复合体,成熟培养24 h,经过体外受精培养,得到体外胚胎样品.借助显微操作仪,将体外受精的桑葚胚和囊胚分割,体外培养半胚,观察其发育情况.结果发现:在D-PBS+0.2 mol/L蔗糖液与D-PBS+5%PVP液中分割桑葚胚和囊胚,其分割成功率及半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三者均无差异显著性(P＞0.05);用显微分割法和徒手分割法分割桑葚胚和囊胚,其分割成功率、半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数均无差异显著性(P＞0.05);比较桑葚胚和囊胚分割,囊胚的分割成功率显著高于桑葚胚的分割成功率(P＜0.05),而半胚的囊胚发育率及半胚细胞数均无差异显著性(P＞0.05).结果表明:在D-PBS液中分别添加0.2 mol/L的蔗糖和5%的PVP都可作为绵羊体外胚的胚胎分割液;显微分割法和徒手分割法均可用于绵羊体外胚胎的分割;囊胚比桑葚胚更适于胚胎分割.     

水牛胚胎分割技术的研究

为探讨水牛桑椹胚去致密化和不同分割方法对水牛切割胚发育效果的影响,将体外受精获得的水牛桑椹胚(第5d)和囊胚(第6~7d)分割后进行体外培养,观察其发育情况.结果显示:(1)水牛桑棋胚经去致密化处理后,其分割成功率(67.69% vs.51.71%)和囊胚发育率(58.30% vs.41.13%)均显著高于未处理组(P<0.01),但囊胚细胞数差异不显著(P>0.05);(2)以直接分割法和单臂分割法分别分割桑椹胚和囊胚,其分割成功率、囊胚发育率和囊胚细胞数三者均无显著差异(P>0.05).可见,水牛桑椹胚去致密化有利于切割胚的成活和发育,而直接分割法和单臂分割法均可用于水牛桑椹胚和囊胚的分割.     

奶牛胚胎切割移植试验报告

以裸胚切割和透明带内切割两种方法,切割31枚奶牛早期胚胎,一分为二。将41枚半胚(其中38枚成对)分别移植给26头受体牛,6头移植怀孕,成功率为23.1%,移植有透明带的半胚和无透明带的裸半胚怀孕成功率都为25%。2半胚在同一透明带内(透明带内切割)的怀孕成功率为40%,而将裸半胚重新装入空透明带内的移植5头(受体全为黑白花奶牛),均未怀孕。桑椹胚分割成半胚移植怀孕成功率为21.1%,而早期囊胚则为28.6%。     

小鼠胚胎分割方法及同卵双生试验

选择小鼠晚期桑椹胚和早期囊胚,采用下列方法进行分割:A、显微手术刀直接分割;B、酶消化透明带后分割;C、显微玻璃针去带分割;D 酶——机械去带分割。共分割277枚胚胎,分割成功264枚(95.3%)。将其中480枚半胚作体外培养,A,B,C,D 各组半胚发育到囊胚的发育率分别为65.7%(92/140)、54.2%(65/120)、63(63/100)、64.2%(77/120)。将用 A法分割的48枚半胚移植于12只受体鼠,结果有4只怀孕,共产11只半胚鼠,其中4对有同卵双生仔鼠。     

奶牛冷冻胚胎规模化移植效果研究

为了提高奶牛良种化程度,对奶牛冷冻胚胎的规模化移植效果进行了研究。结果表明:PG二次肌注法的发情率显著高于(P<0.05)PG一次肌注法,两种方法的发情同期率均超过85%,受体牛发情时间多集中在肌注PG后48～72h;胚胎解冻后的复苏率达到82.58%,且早期囊胚与囊胚的复苏率要高于桑椹胚(P>0.05);共移植受体牛218头,受胎97头,受胎率为44.5%,且春、秋季的移植效果差异不显著(P>0.05)。为奶牛冻胚的规模化移植研究提供了参考依据。     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。     

杜泊羊冷冻胚胎移植的影响因素

为进一步提高杜泊羊的冻胚移植成功率,于春秋两季同期处理湖羊和小尾寒羊受体共997只(次),同期发情782只(次),发情率达78.4%,其中湖羊春秋两季平均发情率为84.6%,显著高于小尾寒羊(73.9%)(P＜0.01),秋季两品种平均发情率83.3%,显著高于春季75.8%(P＜0.01);对431只发情受体羊进行移植,总妊娠率为58.5%(252/431),产羔率为58.0%(250/431).其中湖羊为受体的春秋两季平均妊娠率62.5%,高于小尾寒羊(54.7%);秋季两品种的平均妊娠率为64.8%,显著高于春季(52.5%).囊胚移植后的平均妊娠率为61.5%,显著高于桑椹胚(41.5%),其中A级囊胚为67.4%,显著高于B级囊胚(P＜0.05)和所有桑椹胚(P＜0.01);B级囊胚显著高于B级桑椹胚(P＜0.05),B级囊胚与A级桑椹胚间及A、B级桑椹胚间均无显著差异;C级囊胚和桑椹胚均未见妊娠.此外,受体羊卵巢黄体发育状况及移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响.     

水牛胚胎分割技术的研究

为探讨水牛桑椹胚去致密化和不同分割方法对水牛切割胚发育效果的影响,将体外受精获得的水牛桑椹胚（第5d）和囊胚（第6～7d）分割后进行体外培养,观察其发育情况。结果显示：（1）水牛桑椹胚经去致密化处理后,其分割成功率（67．69％vs．51．71％）和囊胚发育率（58．30％vs．41．13％）均显著高于未处理组（P〈0．01）,但囊胚细胞数差异不显著（P〉0．05）;（2）以直接分割法和单臂分割法分别分割桑椹胚和囊胚,其分割成功率、囊胚发育率和囊胚细胞数三者均无显著差异（P〉0．05）。可见,水牛桑椹胚去致密化有利于切割胚的成活和发育,而直接分割法和单臂分割法均可用于水牛桑椹胚和囊胚的分割。     

用RPE冷冻器冷冻小鼠胚胎试验

用RPE冷冻器冷冻42枚桑椹胚和13枚囊胚。冷冻液为1M甘油杜氏磷酸盐缓冲液,胚胎采用0.25ml细管包装。0℃时置入冷冻器。以1℃/分降温,-6.5～-7℃诱发结晶,再以0.5℃/分(0.3～0.8℃/分)降温至-30℃,然后投入液氮。35℃水浴解冻。桑椹胚与囊胚的冻后存活率分别为71.4％(30/42)和53.8％(7/13),差异不显著(P>0.05)。胚胎冻后发育步调很不一致。     

包被方法对小鼠半胚冷冻效果的影响

将小鼠囊胚一分为二后,采用血清-琼脂法(A),透明带-琼脂法 (B)和双层透明带法(C)包被半胚。在RPE冷冻仪的控制下,对包被半胚进行冷冻。解冻后将360枚半胚进行体外培养。A,B,C三组的半胚发育率分别为69.2％(83/120),67.5％(81/120)和60％(72/120)。将12对在冷冻前用A法包被的解冻半胚移植于6只假孕母鼠,结果有3只妊娠,共产半胚鼠8只,其中3对为同卵双生。实验证明,本研究建立的血清-琼脂包被法操作简便,效果良好,便于应用,是一种较理想的包被半胚新方法。     

不同发育时期鼠胚对一步细管内冷冻一解冻耐受性的研究

本试验采用一步添加防冻剂（１０％甘油）、１２．５％蔗糖一步细管内脱除甘油，３７℃温水快速解冻法，对３９３枚处于不同发育时期的优良胚胎做了冷冻研究，旨在探索不同发育时期的胚胎对一步细管内冷冻解冻耐受性存在的差异，为哺乳动物胚胎冷冻和移植提供资料。解冻后体外培养结果表明，晚期桑椹胚（包括致密桑椹胚和致密后桑椹胚两个阶段）的抗冻能力最强，体外发育率致密桑椹胚为８０．０％（３２／４０）、致密后桑椹胚为７８．０％（３２／４１）；早期桑椹胚和早期囊胚次之，体外发育率为６２．２％（２８／４５）和６６．１％（３９／５９）；囊胚和扩展囊胚的抗冻能力最低，体外发育率仅为５１．６％（３１／６０）和５４．５％（１８／３３）。     

山羊半胚体外培养试验

研究了培养基、血清浓度和培养温度对山羊半胚体外发育的影响。结果表明:与杜氏磷酸缓冲液和TCM—199相比,在改良Whitten氏液中进行体外培养可显著提高半胚体外发育率(P<0.05);用改良Whitten氏液进行体外培养,含10％和15％犊牛血清组的半胚发育率显著高于5％血清组(P<0.05),极显著地高于无犊牛血清组(P<0.01);在38～39℃的条件下培养半胚的效果显著优于36℃(P<0.05),但在37～39℃的范围内,温度对半胚体外发育率无显著影响(P>0.05)。     

铜对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育的影响

研究了氯化铜对牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育潜力的影响。培养液中铜的浓度以原子吸收光谱法测定。培养液中铜的浓度为0(对照组)、0.46和0.68 mg·L-1。结果表明,试验组在卵母细胞成熟和受精卵发育至2细胞率与对照组差异不显著(P>0.05),但试验组较对照组显著提高了桑椹胚和囊胚的发育率(P<0.05)。在卵母细胞体外成熟培养的0~22 h、受精卵培养的0~48 h、48~96 h、96~144 h和144~192 h,0.46 mg·L-1试验组培养液中铜浓度分别下降了4.3%、8.7%、26.0%、28.3%和30.4%,0.68 mg·L-1试验组培养液中铜浓度分别下降了2.9%、7.4%、23.5%、25.0%和27.9%。培养液中铜对牛早期胚胎培养至桑椹胚和囊胚有重要的作用,早期胚胎发育48 h后对培养液中微量元素铜的需求明显增加。     

机械分割的小鼠桑椹胚和囊胚的发育能力

利用机械方法二等份分割小鼠的桑椹胚、早期囊胚和晚期囊胚,并在体外培养分割的半胚到晚期囊胚。将这些囊胚移植到假孕受体鼠子宫内以评价他们附植后发育的能力。在体外培养中发现,囊胚期分割的胚胎比桑椹胚期分割的胚胎有较高的成活率。通过附植前胚胎细胞数量分析得知,囊胚期半胚的细胞数量大约是对照组的一半,但内细胞团细胞与整个胚胎细胞的数量比不变。虽然从半胚发育到囊胚期的胚胎附植率仅略低于对照组,但半胚形成胎儿的能力却显著低于全胚。组织学分析表明,附植后的这种低成活率现象是由于缺乏卵柱发育造成的,而此卵柱则与半胚中的内细胞团的细胞数量减少有关。移植到第3天假孕受体鼠中的半胚,附植后的发育情况明显地比移植到第4天受体中的好。     

醋酸铅对小鼠胚胎体内发育毒性的研究

采用饮水染毒法研究碱式醋酸铅对小鼠早期胚胎体内发育的毒性。将体重 (1 5± 2 ) g的母鼠随机分为高剂量、中剂量、低剂量染毒组和对照组。从试验的第 1天起 ,染毒组小鼠分别于下午 1 7:0 0至次日上午 8:0 0自由饮用 5 .0 ,1 .0和 0 .2 g/L醋酸铅溶液 ,次日上午 8:0 0至下午 1 7:0 0更换为自来水 ,如此循环 ,持续 2 1 d;对照组小鼠一直自由饮用自来水。染毒结束后 ,进行正常饲喂、饮水至试验结束。从第 2 6天开始对小鼠进行超排 ,超排小鼠分别在注射 h CG后的 4 8,72和 96 h回收输卵管及 /或子宫胚胎。结果显示 ,在注射 h CG后 4 8h回收胚胎时 ,染毒各组超排小鼠正常 2～ 4 - C胚胎占回收总数的比率与对照组无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;72 h回收胚胎时 ,高、低剂量组的桑葚胚比率极显著低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,中剂量组则显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ;96 h回收胚胎时 ,高剂量组囊胚比率极显著低于对照组 (P<0 .0 1 ) ,中、低剂量组的囊胚比率与对照组差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,且此时各染毒组的退化胚比率均极显著高于对照组 (P<0 .0 1 )。结论认为 ,铅能显著影响体内胚胎从 2 - C期进一步发育为桑葚胚和囊胚 ,并使胚胎发育延迟、停滞和退化     

小鼠胚胎直接投入液氮冷冻保存试验

室温下,将292枚小鼠胚胎在含128.9g/L甘油PBSS(含20％犊牛血清的磷酸盐缓冲液)和含193.2g/L甘油+85.6g/L蔗糖PBSS内分别孵育片刻,装管后直接投入液氮冷冻保存。冻胚快速解冻后,用含342.3g/L蔗糖PBSS脱去甘油,用PBSS清洗后镜下观察评定,胚胎回收率为86.9％(254/292),胚胎形态正常率为77.1％(196/254)。其中部分桑椹胚经体外培养,囊胚发育率为71.4％(20/28)。将110枚冻胚移植给7只受体,3只妊娠,产仔12只(5,7),妊娠率为43％(3/7),产仔率为10.9％(12/110),其中囊胚移植1只受体妊娠产仔3只,产仔率为25％(3/12)。     

除精浆提高冷冻精液品质的实验研究

采用离心洗涤法去除精浆后,对精液进行冷冻处理。发现:1、除精浆精子冻后的活率、Ⅰ类顶体率和精子畸形率与未除精浆组存在显著差异(P<0．05);2、除精浆使稀释后精液精浆中GOT和LDH活性明显升高(P<0．05)。从平衡后到解冻后各组GOT和LDH活性都呈上升趋势。但除精浆试验组比未除精浆试验组上升缓慢;3、除精浆试验组精子的穿卵率、卵内平均精子数都显著高于未除精浆试验组(P<0．05);4除精浆离心洗涤液用生理盐水和脱脂乳-卵柠液．两者之间无显著差异(P>0．05)。