42份高粱与苏丹草及其2个杂交种DNA指纹图谱的构建

选用100个RAPD引物和95对SSR引物进行PCR扩增,旨在构建42份高粱和苏丹草品种资源及2份国审品种高粱-苏丹草杂交种的DNA指纹图谱。结果表明,从100个RAPD引物中筛选到9个多态性高、重复性好的引物,多态性条带比率为64.06%,利用4个核心RAPD引物可以为每份品种构建1张特定的数字指纹,并通过其中1个引物F-01构建了1张能鉴别2个杂交种的RAPD指纹图谱,不过该图谱不能区别皖草3号与其父本Sa。从95对SSR引物中筛选出多态性丰富的引物73对,多态性条带比率为86.06%,通过3对核心SSR引物就可以构建42份高粱和苏丹草的SSR数字指纹,同时利用其中1对SSR引物txp18,寻找到2个杂交种的互补带,从而构建了2个高粱-苏丹草杂交种的SSR指纹图谱,这张SSR指纹图谱不仅能鉴别皖草2号和3号,还可以把杂交种与其亲本区别开来。     

42份高梁与苏丹草及其2个杂交种DNA指纹图谱的构建

选用100个RAPD引物和95对SSR引物进行PCR扩增,旨在构建42份高粱和苏丹草品种资源及2份国审品种高粱苏丹草杂交种的DNA指纹图谱。结果表明,从100个RAPD引物中筛选到9个多态性高、重复性好的引物,多态性条带比率为64．06％,利用4个核心RAPD引物可以为每份品种构建1张特定的数字指纹,并通过其中1个引物F-01构建了1张能鉴别2个杂交种的RAPD指纹图谱,不过该图谱不能区别皖草3号与其父本Sa。从95对SSR引物中筛选出多态性丰富的引物73对,多态性条带比率为86．06％,通过3对核心SSR引物就可以构建42份高梁和苏丹草的SSR数字指纹,同时利用其中1对SSR引物txp18,寻找到2个杂交种的互补带,从而构建了2个高粱-苏丹草杂交种的SSR指纹图谱,这张SSR指纹图谱不仅能鉴别皖草2号和3号,还可以把杂交种与其亲本区别开来。     

低氢氰酸含量高丹草新品系及其亲本的 SSR 分析简

 为明确４个低氢氰酸含量的高丹草新品系ＳＬＣＮ １１、ＳＬＣＮ １２、ＳＬＣＮ １３、ＳＬＣＮ １４及其亲本散穗高粱、黑壳苏丹草、白壳苏丹草、红壳苏丹草和棕壳苏丹草在ＤＮＡ 水平上的差异程度,以育成登记的高丹草品种蒙农青饲３号为对照,对其进行了ＳＳＲ 分析。试验从２００个高粱ＳＳＲ 引物中筛选出多态性丰富、重复性好的１２对引物,利用这些引物对１０个材料进行ＰＣＲ 扩增共得到５０９个多态性位点,多态性百分率达８７．３０％。每对引物扩增的ＳＳＲ指纹图清晰、稳定,可作为鉴别４个高丹草新品系及其亲本的分子依据。１０个供试材料间的遗传距离（ＧＤ）变幅在０．３１６５～０．６６９２之间,平均为０．５３５９;以ＧＤ 值０．５０为基准,将１０个材料划分为５类：蒙农青饲３号、散穗高粱、ＬＣＮ-１１、ＳＬＣＮ-１２、ＳＬＣＮ-１３为一类;ＳＬＣＮ-１４、棕壳苏丹草为一类;白壳苏丹草、黑壳苏丹草、红壳苏丹草各单独为一类。该研究为下一步低氢氰酸含量高丹草新品种育成及登记利用奠定了基础。     

ISSR 分子标记对９种狗牙根的鉴定分析

 狗牙根是全球最重要品种最丰富的暖季型草坪草种之一，种或品种间形态相同，传统的形态学方法、田间区试法等不能准确作出鉴定，ＩＳＳＲ 分子标记被认为是目前准确高效的品种鉴定技术。本试验以９种常用狗牙根为对象，利用ＩＳＳＲ 标记技术对９份材料间的遗传多样性进行了研究，构建了９份材料的指纹图谱。由ＩＳＳＲ 标记分析结果可知，１３条引物组合共获得５４条清晰可辨的总条带，多态性条带数３４条，平均每对引物扩增出４．１条带，多态性位点百分率为６４．１５％，品种间的遗传相似系数（ＧＳ）范围在０．５４７～０．９６２，变幅为０．４１５，说明供试材料具有比较丰富的遗传多样性。ＵＰＧＭＡ 聚类分析结果表明，ＧＳ＝０．８０６时，９种常用狗牙根品种可聚为５类。黑杰克和南京狗牙根为第１类，普通狗牙根和瑞拉第２类，阳江狗牙根为第３类，摄政王为第４类，Ｔ ４１９、小矮人、老鹰草为第５类。利用ＩＳＳＲ 引物ＵＢＣ８１０和ＵＢＣ８５７的扩增产物电泳图为基础构建的指纹图谱可以鉴定出９种狗牙根品种。     

正交设计优化山野豌豆ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系与引物筛选

 采用正交试验设计,以山野豌豆叶片ＤＮＡ 为模板,从Ｍｇ^２＋ 、ｄＮＴＰ、引物和ＴａｑＤＮＡ 聚合酶４种因素３个水平,对山野豌豆ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 反应体系进行优化,并比较了不同浓度模板ＤＮＡ 对扩增效果的影响,建立了山野豌豆的ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 最佳反应体系。结果表明,山野豌豆ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 最佳反应体系为：２μＬ１０×ＰＣＲｂｕｆｆｅｒ（不含Ｍｇ^２＋ ）、３０ｎｇ的模板ＤＮＡ、引物２．０μｍｏｌ／Ｌ、Ｍｇ^２＋ ２．０ｍｍｏｌ／Ｌ、ＴａｑＤＮＡ 聚合酶１．５Ｕ、ｄＮＴＰ０．２ｍｍｏｌ／Ｌ,总体积为２５μＬ。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以引物浓度影响最大,ｄＮＴＰ 浓度的影响最小。运用该体系对３份山野豌豆种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从９８对ＳＲＡＰ 引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的２０对引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为ＳＲＡＰ分子标记技术进行山野豌豆分子遗传学研究奠定了基础。     

多花黑麦草品种（系）间杂交及其杂种后代犛犚犃犘遗传分析

 以多花黑麦草１２个杂交组合的亲本与后代共７０个材料，采用ＳＲＡＰ 分子标记技术研究杂种与双亲之间的扩增谱带多态性，以甄别真假杂种。结果表明，１）用１０ 对引物组合共得到多态性条带１０１ 条，平均每对引物扩增出１０．１条多态带，多态性位点百分率为７７．１％。表明供试材料在ＤＮＡ 水平上多态性较高，能够很好的揭示材料间的差异，利用ＳＲＡＰ进行品种和杂种鉴定是可行的。２）所鉴定的６２个后代中ＳＲＡＰ扩增电泳带型表现出同父、同母、综合和不同于亲本的新带型等多种类型。结合多对引物综合分析所鉴定的６２ 个后代中，有４８ 个后代具有父本的特征带，这４８个后代可以鉴定为真杂种。     

利用RAPD技术构建四倍体苜蓿遗传连锁图谱

 利用随机扩增ＤＮＡ 多态性分子遗传标记（ＲＡＰＤ）对Ｆ₂ 群体进行分析。Ｆ₂ 群体由Ｆ_１ 群体（高产紫花苜蓿×高抗黄花苜蓿得到Ｆ_１代）自交获得。应用ＭＡＰＭＡＫＥＲ／ＥＸＰ（３．０）与ＪｉｏｎＭａｐ４．０并结合ＭａｐＤｒａｗＶ２．１软件构建四倍体苜蓿的遗传连锁图谱。从１９２个随机引物中筛选出７２个引物,对９４个Ｆ_２ 个体及Ｆ_１ 双亲ＤＮＡ 样本进行了ＲＡＰＤ 扩增,共获得５１个ＲＡＰＤ 标记,构建了四倍体苜蓿分子遗传连锁框架图,其中包含８个连锁群,标记覆盖的基因组总长度约为１２６１．５ｃＭ,标记间平均距离为２４．７３ｃＭ。本图谱为构建饱和的四倍体苜蓿分子遗传图谱提供了框架结构,为进一步开展苜蓿分子遗传方面的研究奠定了基础。     

２０个黑麦草品系的SRAP 遗传多样性分析

 利用ＳＲＡＰ分子标记技术对２０个黑麦草品系的遗传多样性进行了分析。结果发现,５３个引物组合共扩增出７６５条带,其中多态性带共５９７ 条,多态性比率为７８．９５％。平均每对引物扩增出的带数和多态性条带数分别为１４．４和１１．２条。各黑麦草品系间的遗传相似系数在０．４８５～０．７２７,平均为０．６２７。从ＵＰＧＭＡ 聚类分析的结果来看,以阈值０．６３可将这２０个品系分为４类。２个多花黑麦草品系并不聚在一类,而是分散在１８个多年生黑麦草品系中。另外,ＵＰＧＭＡ 聚类结果与这些品系的来源基本一致,这说明ＳＲＡＰ 标记适用于黑麦草品系间的遗传多样性研究。     

中国西南区鸭茅种质遗传变异的犛犛犚分析

用ＳＳＲ 标记对来自中国西南地区（四川、云南、贵州、重庆）的１１份鸭茅种质的１１０个单株进行遗传多样性研究。结果表明,１）２１对引物共扩增出多态性条带１４３条,平均每对引物扩增出６．８条,多态性条带比率（PPB）达９０．７％;多态性信息含量（PIC）范围为０．１７（Ａ０１Ｆ２４）～０．４５（Ａ０１Ｅ０２）,平均为０．３３;Ｓｈａｎｎｏｎ多样性指数（I）范围在０．０４６３～０．３４７７,表明供试鸭茅种质具有丰富的遗传多样性。２）ＡＭＯＶＡ 分析表明,６３．９３％的遗传变异存在于种质内部,种质间变异仅为２１．９３％,二倍体与四倍体鸭茅群体间遗传差异不显著。３）对各地理类群基于Ｎｅｉ氏无偏估计的遗传一致度可将１１份鸭茅分为２ 大类：来自重庆和贵州的３ 份二倍体材料ＹＡ２００６３、ＹＡ２００６４ 和ＹＡ０２１０１聚为Ｉ类,其余８份材料聚为ＩＩ类,来自相同或相似生态地理环境、相同倍型的材料基本聚为一类,呈现出一定的相关性。     

玉米ＳＳＲ 引物和甘蔗ＥＳＴ－ＳＳＲ引物在芒属中的通用性研究

 芒属种质资源是芒属能源作物新品种育种的基础。为了给开展芒属的相关遗传分析提供基础,本研究以中国芒属植物全部７个种类为材料,对３８２对玉米ＳＳＲ 引物和１００对甘蔗ＥＳＴ－ＳＳＲ 引物的通用性进行研究以筛选有效的微卫星分子标记。筛选分前期筛选以获得初步有效的引物和后期使用这些初步有效的引物对全部供试材料进行扩增２个环节进行。结果表明,在全部８４份供试材料中都能实现稳定ＰＣＲ 扩增且条带清晰、有多态性、能准确判读的玉米ＳＳＲ 引物和甘蔗ＥＳＴ－ＳＳＲ 引物分别为３９对（１０．２１％）和１３对（１３．００％）。这５２对引物在所有供试材料中扩增总共得到２５０条带。其中在芒属中产生２２０条带,而多态性条带为２０６条（９３．６４％）,平均每对引物获得３．９６条多态性条带。在扩增条带中,出现了不少特异性条带。基于全部２５０ 条带计算得到的遗传相似度（ＧＳ）为０．５８８～０．９８８。采用非加权类平均法聚类的结果表明,在ＧＳ＝０．６８水平上,中国芒属植物分为两大类：第一类由尼泊尔芒、双药芒、红山茅构成,第二类由芒、五节芒同荻、南荻组成;在ＧＳ＝０．８２水平上,芒与五节芒同荻与南荻分开;在ＧＳ＝０．８８时,芒与五节芒分开。结果初步表明中国芒属植物遗传多样性比较丰富。其中,芒、五节芒、荻和南荻的相似性较高,相似度为０．７８０～０．９８８,说明它们之间的遗传距离较近,而尼泊尔芒、双药芒、红山茅同这四者的遗传距离却较远。因此建议在中国芒属植物的遗传改良和新品种选育时,亲本选配可以适当考虑这三者,以拓宽杂交种的遗传基础。     

结缕草属植物SRAP－PCR体系的建立和优化

以ＳＤＳ法提取的结缕草属植物叶片ＤＮＡ 为模板,分别采用单因子试验和正交设计试验２种方法,对影响结缕草属植物ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 的MG²⁺ 、ｄＮＴＰ、引物、ＴａｑＤＮＡ 聚合酶和模板ＤＮＡ 五个因素进行优化试验。单因子试验分别研究各因素在多水平条件下对ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 反应体系的影响,得到最佳反应条件。正交设计采用Ｌ１６（４５）方案,综合考虑各因素间的相互作用,通过直观分析法获得各影响因素的最佳反应水平。根据４对引物对６ 份结缕草属植物材料扩增结果的验证比较,２种方法所获得的最佳反应体系存在一定的差异。通过综合比较和分析２种方法的优化体系扩增出的条带数、多态性条带数及多态性比率,最终建立了结缕草属植物ＳＲＡＰ－ＰＣＲ 的最佳反应体系：MG²⁺２．００ｍｍｏｌ／Ｌ、ｄＮＴＰ２２０μｍｏｌ／Ｌ、引物０．２０μｍｏｌ／Ｌ、ＴａｑＤＮＡ 聚合酶０．５０Ｕ、模板ＤＮＡ６０ｎｇ、２μＬ１０×ｂｕｆｆｅｒ,总体积为２０μＬ。这一优化体系的建立为今后利用ＳＲＡＰ标记技术进行结缕草属植物遗传多样性、种质鉴定、遗传连锁图谱及亲缘关系分析等方面的研究提供了科学的依据。     

鸡传染性法氏囊病病毒野毒株VP2基因高可变区酶切位点分析

参照澳大利亚鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）００２７３ 毒株基因组序列设计的 １ 对引物,位于 Ｖ Ｐ２ 高可变区两端,通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ,扩增了 ５ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 山东分离株 Ｖ Ｐ２ 基因的 ６０７～１ ０８０ 位核苷酸片段（ａａ２０３～３０６）。 Ｐ Ｃ Ｒ 产物经纯化后,分别用 Ｄｒａ Ⅰ、 Ｓａｃ Ⅰ、 Ｓｓｐ Ⅰ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓａｕ３ Ａ Ｉ共 ５ 种限制性内切酶（ Ｒ Ｅ）进行消化处理,结果 ５ 个分离株均为 Ｄｒａ Ⅰ（－ ）、 Ｓａｃ Ⅰ（－ ）和 Ｓａｕ ３ Ａ Ｉ（＋ ）, Ｌ Ｃ２ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（＋ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｊ Ｎ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（－ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｌ Ｃ２ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（＋ ）, Ｊ Ｎ、 Ｌ Ｌ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（－ ）;５ 个分离株的酶切图谱与美国变异株迥异,而 Ｔ Ａ 株与日本超强毒株 ９０１１ 相类似。５ 个分离株与现用疫苗株对比,至少在 Ｖ Ｐ２ 可变区内存在着一定的差异,这可能是 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 接种免疫鸡群仍然暴发 Ｉ Ｂ Ｄ 的原因之一。     

山西白羊草种质资源遗传多样性的 ISSR 分析简

 利用ＩＳＳＲ 分子标记技术对山西３３个白羊草种质资源进行遗传多样性分析。白羊草种质间遗传变异较稳定，１０条ＩＳＳＲ 引物共扩增出９９条带，多态性比率（Ｐ）为５２．２３％；通过ＰｏｐＧｅｎ３２软件计算出：等位基因数（Ｎａ）为１．５２５３±０．５０１９，有效等位基因数（Ｎｅ）为１．２９４１±０．３６６５，Ｎｅｉ’ｓ基因多样性（Ｈ）为０．１７２３±０．１９８３，Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数（Ｉ）为０．２５９０±０．２８４１；通过ＮＴＳＹＳｐｃ１．２０ｃ软件计算出３３ 份材料间的遗传相似系数（ＧＳ）为０．８１８８～０．９８０１，遗传距离（ＧＤ）为０．０２００～０．１９８８。结果表明，３３份种质材料居群水平的遗传多样性较低，而自然条件下白羊草进行无融合生殖可能是导致白羊草居群遗传多样性较低的原因之一。     

不同传染性法氏囊病病毒分离株VP2基因部分核酸序列及其编码蛋白的比较

根据已报告的传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列,在病毒 Ｖ Ｐ２ 区域,设计 １ 对引物,并在 ２ 引物上分别加 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ酶切位点。对 ２ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 分离株 Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４,用异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ,然后进行逆转录和 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增,将扩增片段经酶切纯化后克隆于 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中,以双脱氧链末端终止法测定 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列。将测定的分离株与标准对照株（ Ｓ１） Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｖ Ｐ２ 基因片段的核苷酸序列进行计算机分析比较, Ｊ Ｓ３ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ３ 与 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９９％ 。推导编码蛋白氨基酸序列, Ｊ Ｓ３ 和 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ , Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９６％ , Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９８％ 。这表明在我国流行的 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 毒株与标准毒株相比不仅在免疫学反应上有差异,而且在病毒核酸序列上有变异,这种变异是造成疫苗免疫失败或免疫逃避的分子基础。     

高丹草SSR引物设计及分子遗传框架图谱构建

利用高粱EST序列和BAC克隆,以Primer 5.0程序设计了10对高丹草SSR引物,结果发现有3对引物在皖草2号高丹草的亲本间表现多态性,其中2对来自BAC的引物可用于遗传连锁图谱构建.除以上10对SSR引物外,再选取已公布的245对高粱SSR引物,以180个皖草2号(TX623A×S722)的F2代单株作为构图群体,构建了一个包括4个连锁群、33个SSR标记的高丹草遗传图谱,图谱覆盖基因组长度458.5cM,平均图距13.8cM.     

应用PAPD方法对鸡败血霉形体DNA多态性的研究

用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法,通过筛选的５个随机引物（ＯＰＨ－０２,ＯＰＨ－０５,ＯＰＨ－０７,ＯＰＨ－１３,ＯＰＧ－１６）,对１４株鸡败血霉形体（ＭＧ）国际标准株和国内分离株进行了ＤＮＡ多态性研究。结果表明,５个引物共产生２１种条带,其中有３个条带分别为２个菌株所特有,扩增产物片段的长度在１５０～４５００ｂｐ之间,所有菌株均有１条共同条带,以ＯＰＨ－０５扩增产物的多态性最丰富。根据样品ＤＮＡ所获得的菌株间相似性指数表明,Ｄ９６０３与Ｄ９６０７相似指数最高,Ｓ６,Ｋ３９１３和Ｄ９６０４三者相互间相似性指数最低。提示ＲＡＰＤ方法可用于霉形体遗传标记的分析。     

海滨雀稗体细胞突变体犛犘SP２００８-３的特异性分析

 以海滨雀稗体细胞突变体ＳＰ２００８-３和Ａｄａｌａｙｄ（对照）为材料,对其植物学特征和叶片表皮气孔特性进行了比较,结合染色体鉴定和ＲＡＰＤ 技术,探索了海滨雀稗体细胞突变体ＳＰ２００８-３的特异性。结果表明,与对照Ａｄａｌａｙｄ相比,ＳＰ２００８-３ 匍匐茎节间长、茎直径分别显著减小３４．７７％ 和１１．７６％,叶片长度、宽度分别显著增加２２．５５％和１１．１１％,而直立茎节间长、茎直径无显著差异;叶片上表皮气孔器密度显著增加２０．５８％,气孔器长度和宽度分别显著减小９．６４％和６．３１％;叶片下表皮气孔器密度显著增加４０．６２％,气孔器长度和宽度分别显著减小６．７３％和５．３３％。ＳＰ２００８-３体细胞染色体数目为２n＝２０,与对照Ａｄａｌａｙｄ染色体数目相同。ＲＡＰＤ 结果显示,采用随机引物Ｓ３６９扩增,ＳＰ２００８-３缺失１条约１１００ｂｐ的条带,表明其在ＤＮＡ 水平上与Ａｄａｌａｙｄ存在差异。     

高粱—苏丹草杂交种的应用可行性研究及其选育

利用生产上推广的６个粒用高粱杂交种和４个高粱杂交种为对照,与随机组配的１５个高粱－苏丹草杂交种进行比较。结果表明,高粱－苏丹草杂交种做饲用生产能力上仅次于甜高粱杂交种,但在早熟优质等若干特性上优于甜高粱,有些组合还高于甜高粱杂交种的生产能力。该类型杂交种干物质及绿色体的日生产能力高于甜杂２号２１．１％和４１．２％,原因是杂最高。     

高粱×苏丹草A1和A3细胞质杂种的牧草产量品质及结籽性

目前，有关高粱×苏丹草（Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ Ｌ．）Ａ１和Ａ３细胞质杂种的农艺性状进行比较的资料尚未见报道。研究旨在比较Ａ１和Ａ３细胞质对高粱×苏丹草杂种的成熟性、结籽性，高度，牧草产量及品质的影响。１９８９年，有８个苏丹草各的花粉授给雄性不育的Ａ１和Ａ３细胞质高粱品系，所得杂种于１９９０￣１９９１年种在内布拉斯大学的田间试验室。按裂区种植，自交为主区，细胞质处理为副区。土壤为粉质粘壤土     

几种小麦族禾草及其杂交后代基因组DNA的RAPD研究

应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术分析蒙古冰草、航道冰草及其种间杂种Ｆ、ＢＣ１代和加拿大披碱草、野大麦及其属间杂种Ｆ１代的基因组ＤＮＡ差异性。筛选出能检测咯亲本及杂交后代间遗传差宜引物；从ＤＮＡ分子水平验证出亲本加拿大坡碱草和野大麦两属间经亲本蒙古冰草、航道冰草二种间的亲缘关系远；杂种Ｆ１代的ＲＡＰＤ图谱有明显偏母本的倾向，随机扩增多态性ＤＮＡ技术可用于牧草远缘杂种鉴定及遗传育种研究。