青梅果超氧化物歧化酶粗酶的提取及活性研究

[目的]测定青梅果超氧化物歧化酶（SOD）活性,筛选青梅果SOD粗酶提取最有效的方法。[方法]以重庆綦江青梅果为原料,采取不同料液比提取青梅SOD粗酶,以Sevage法除去杂蛋白,硫酸铵分级沉淀。同时对各步骤所得S0D粗酶活性、蛋白量、比活的检测结果进行比较。[结果]H3P04缓冲液的用量对SOD粗酶的提取有直接影响。当H3PO4缓冲液与梅果的比例为3：1时,测得酶的比活最高,为25．34U／mg蛋白;粗酶液按3：1体积比加入的氯仿-乙醇混合液除去杂蛋白效果明显;粗酶液添加（NH4）2SO4至90％饱和度沉淀SOD效果好,比活较提取液上升51．43U／mg蛋白。[结论]青梅果SOD粗酶提取的最佳条件：H3PO4缓冲液与青梅比例为3：1,温度为25～30℃,pH值为7．8,Sevage法除去杂蛋白,（NH4）2SO4盐析从35％添加至90％饱和度沉淀SOD。该条件下,总蛋白为215．13mg,酶总活力为5415．74U／mg蛋白,比活为25．34U／mg蛋白。     

淋浆水中SOD提取工艺研究

[目的]研究从淋浆水中提取SOD酶的工艺条件。[方法]以陕西太白酒厂酿酒后的淋浆水为材料，比较甲苯、异丙醇和乙醇一氯仿3种有机溶剂从淋浆水中提取SOD粗酶液的效果，研究温度和pH对SOD酶活力的影响以及不同异丙醇浓度对SOD提取的影响，采用丙酮2次沉淀对SOD进行分离纯化，并采用H2O2，和乙醇一氯仿对样品SOD酶类型进行敏感性鉴定。[结果]试验确定以80％的异丙醇为最佳粗酶液提取条件。丙酮2次沉淀得到纯化的SOD产品，其酶比活为1026U／mg，酶回收率达65．2％。该酶经H：0：和乙醇一氯仿敏感性鉴定为Cu·Zn．SOD，对热和酸碱度具有一定稳定性，在50℃以下，酶相对活性保持在91．2％～100％，pH为3．0～10．0时SOD活性保持在74．1％一93．6％。[结论]该提取工艺过程简便，易操作，是较为理想的从淋浆水中提取SOD的工艺。     

蜗牛酶中纤维素酶的分级分离

[目的]探索用分级沉淀方法去除蜗牛酶中非纤维素酶的效果。[方法]向粗酶液中加入硫酸铵,使溶液中的硫酸铵从10％饱和度以10％为梯度逐渐递增到100％的饱和度,用考马斯亮蓝法测定蛋白含量,DNS法测定纤维素酶活力。[结果]硫酸铵饱和度达到40％时原酶液中的大部分非纤维素酶杂蛋白开始沉淀,但此时所得沉淀的比活力最低;在50％饱和度下分离出的沉淀中纤维素酶的活力最高,在50％及之后的几个饱和度时,分离出了较多的纤维素酶蛋白,表明硫酸铵分级沉淀蜗牛酶可以显著提高其中纤维素酶的活力。[结论]用50％的饱和度分级沉淀蜗牛酶中的纤维素酶最合理。     

麻疯树种子β-1,3葡聚糖酶的优化提取及其部分性质分析

用NaCl浓度、pH值和 (NH4)2SO4饱和度三因子优化麻疯树种子中β-1,3葡聚糖酶粗酶的提取条件.结果表明,麻疯树种子在pH 7.0的条件下用含1 mol*L-1 NaCl的5 mmol*L-1磷酸缓冲液和用60 %～80 %饱和度的(NH4)2SO4沉淀后提取得到的β-1,3葡聚糖粗酶总酶活和经纯化的β-1,3葡聚糖酶总酶活均高于所试其它条件,也高于前人的研究约2倍.纯化的β-1,3葡聚糖酶经酶学性质和稳定性测定,其最适作用温度为 40～50 ℃,最适pH为7;在30～55 ℃以及pH 6～8 范围内最稳定.理化性质分析表明,该酶具特有的紫外吸收光谱、荧光光谱和氨基酸组成.通过Western 杂交的方法检测到β-1,3葡聚糖酶仅存在于种子中而在根、茎、叶中未见分布.     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

猕猴桃中SOD提取工艺研究

[目的]寻找一条从植物中提取出较纯净S01）的廉价工艺路线。[方法]利用超氧化物歧化酶（SOD）耐热等性质,对以猕猴桃为原料制备的SOD粗酶液分别进行热变性、等电点、丙酮沉淀处理,以得到纯度较高的SOD酶液。[结果]试验确定了热变性、等电点、丙酮沉淀处理猕猴桃中的SOD粗酶液的最佳提取参数分别为65℃下25min、pH5．0、V丙酮：VSOD酶液=1：1,并且依次用3种方法下的最佳参数进行提取,得到的蛋白样品经分析达到了电泳纯。[结论]研究可为植物中SOD的廉价提取提供参考依据。     

番茄中超氧化物歧化酶提取工艺的优化

[目的]对番茄中超氧化物歧化酶(SOD酶)的提取工艺进行优化,旨在进一步开发植物SOD酶源。[方法]以富含SOD酶的番茄为试验材料,选取浸提缓冲液的pH值、浸提时间、热处理温度、热处理时间4个因素进行正交试验设计,优化提取工艺。[结果]番茄中SOD酶最佳提取工艺为缓冲液pH7.8、浸提时间2 h、热处理温度50℃、热处理时间30 min。[结论]该工艺简便高效地从番茄中提纯了超氧化物歧化酶,可用于实际生产,为后续进一步纯化研究该酶奠定了基础。     

资丘木瓜总黄酮提取工艺研究

[目的]研究资丘木瓜总黄酮提取工艺条件。[方法]以AlCl3试剂测定资丘木瓜总黄酮,在单因素试验的基础上,以总黄酮含量为指标,考察料液比、乙醇浓度、水浴温度等因素对提取效果的影响,并采用正交试验优选出最佳提取条件。[结果]影响资丘木瓜总黄酮的3个因素主次顺序为温度料液比乙醇浓度,其中温度和料液比对资丘木瓜黄酮类化合物的提取率影响较明显;最佳提取工艺为浓度50%乙醇为提取剂,水浴温度80℃,料液比1∶8(g/ml),提取时间3 h,提取次数4次;在此条件下,资丘木瓜总黄酮的提取率为1.348%。[结论]该试验确定的最佳工艺稳定性好且简便易行。     

转基因玉米中植酸酶蛋白沉淀条件探索

为了对玉米中表达的植酸酶蛋白的酶学性质进行深入研究,以转基因玉米籽粒中提取的植酸酶粗提液为研究材料,探索了植酸酶和总蛋白的溶解度与硫酸铵饱和度之间的关系,结果显示在0~60%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶仅占初提液中总植酸酶含量的1.85%,而在此范围内沉淀的总蛋白却占初提液的总蛋白含量的57%,植酸酶比活为0.44 U/mg;在60%～80%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶和总蛋白分别占初提液中各自含量的58%和10%,植酸酶比活为84.4 U/mg;在80%～90%硫酸铵饱和度范围沉淀的植酸酶收率占初提液中含量的1.9%。因此选用60%～80%硫酸铵饱和度分级沉淀植酸酶,在此条件得到的植酸酶比活比粗提液的植酸酶比活（13.8 U/mg）高6.1倍。     

螺旋藻藻蓝蛋白在水和磷酸缓冲液中稳定性的对比研究

[目的]为了寻找一种代替磷酸缓冲液的提取溶液,满足尽量保持其活性的要求。[方法]分别用蒸馏水和磷酸缓冲液,采用研磨法提取藻蓝蛋白并保存。[结果]两者提取效果差别不大。但是,水保存的藻蓝蛋白溶液比磷酸缓冲液保存的藻蓝蛋白溶液易分解。[结论]综合试验条件及藻蓝蛋白稳定性影响因素考虑,可确定pH变化为藻蓝蛋白分解的主要原因;蒸馏水可代替磷酸缓冲液用于提取藻蓝蛋白,活性维持时间不超过15d。     

木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯

[目的]为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供必要的技术支持。[方法]由高产几丁质酶的木霉菌株YHS-1液体振荡培养得到木霉几丁质酶粗酶液,分别测定了木霉菌株YHS-1在不同时间、不同温度下的几丁质酶活值,优化木霉产酶条件。并研究了几丁寡糖的制备及提纯方法。[结果]供试木霉最佳产酶温度为35℃,最佳产酶时间为4 d,此时酶活值为55 U。几丁质酶粗酶液通过(NH4)2SO4分级沉淀、阴离子交换柱层析、SDS-PAGE提纯后可以达到层析纯,出现单一并且峰值很高的层析峰,电泳确认2条带,分别为几丁质外切酶和几丁质内切酶。几丁寡糖用初提纯的几丁质酶与过量的胶态几丁质反应得到粗溶液,再经过蛋白质沉淀和冷冻离心后得到纯化。[结论]建立了木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯方法,为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供了必要的技术支持。     

普通山地红壤可溶性氮不同条件下的提取效率比较

[目的]针对目前土壤可溶性氮的提取方法在提取剂种类、水土比及土样保存状态(新鲜和风干)等方面的不同,分析普通山地红壤可溶性氮不同条件下的提取效率,以期为土壤可溶性氮提取提供试验依据。[方法]利用常绿阔叶林植被下普通山地红壤,分别以其新鲜土和风干土为试验材料,探讨2 mol/L KCl和0.5 mol/L K2SO42种提取剂在水土比4∶1、6∶1和10∶1下提取土壤可溶性氮的差异,研究该类型土壤可溶性氮不同提取条件下的提取效率。[结果]KCl比K2SO4更适合用于提取土壤NH4+-N,KCl提取的NH4+-N不仅量大且稳定性好,K2SO4则需在较大水土比下才能充分提取土壤NH4+-N;2种提取剂在NO3--N提取上的差异性很小,但低水土比下KCl提取NO3--N的稳定性高于K2SO4;两者提取的NO2--N性能非常接近;在土壤SON的提取中,2种提取剂的差异较小,KCl提取的SON量少于K2SO4,但稳定性高于K2SO4,二者的SON提取量具有极显著相关性;用K2SO4提取MBN时可以不考虑水土比的影响,但使用KCl则必须慎重选择水土比。提取新鲜样时KCl和K2SO4之间的差异大于提取风干样时的差异,所以在对新鲜样中可溶性氮提取时应更注重提取剂的选择。[结论]该试验结果为提高土壤可溶性氮的提取效率,增加测定结果的可比性奠定了试验基础。     

不同处理对苜蓿叶蛋白提取的影响

[目的]探索苜蓿叶蛋白的最佳提取条件.[方法]设置了不同料水比、加热温度、絮凝时间、pH,研究其对苗蓿叶蛋白提取的影响.[结果]当料水比为1:4,加热温度为70℃,絮凝时间为9 min,pH为5.0时,苜蓿叶蛋白得率和粗蛋白提取率均最高.[结论]该研究可为叶蛋白的开发与利用提供理论依据.     

黑曲霉产木聚糖酶的固态发酵条件优化

[目的]研究培养基组成和培养条件对黑曲霉固态发酵产木聚糖酶的影响。[方法]以木聚糖酶酶活为评价指标,利用单因素试验和L9（34）正交试验考察摇瓶发酵条件下培养基组成、pH值、培养时间、培养温度和接种量对黑曲霉产生木聚糖酶的影响。[结果]最佳培养基组成为：麸皮与玉米芯质量比5∶3,（NH4）2SO4、KH2PO4、CaCl2和MgSO4相对于固体料的质量百分数分别为1.0%、0.2%、0.1%和0.1%）,料液比1∶1.7;最优培养条件为：pH值7.5、培养温度28℃、培养时间60h,其间翻曲2～3次;在此工艺条件下,木聚糖酶的活力可达14698.21IU/g。[结论]该优化条件为木聚糖酶的工业化生产和应用提供了依据。     

抗烟草青枯病拮抗菌的筛选及抑菌活性研究

[目的]为了筛选能有效防治烟草青枯病的生防菌株。[方法]对从土壤中分离到的链霉菌产生的次生代谢产物的抑菌活性和理化性质采用管碟法进行了测定。[结果]离体条件下,发酵液具有耐热性,在100℃以下仍具有较强的抑菌活性。在一定的pH值范围内(pH值3.8～9.0),拮抗能力无明显差异,其中在接近中性条件下拮抗活性较强。拮抗物质经胰蛋白酶处理后,拮抗活性亦无明显变化。经终浓度为2 mol/L(NH4)2SO4处理过的粗发酵液,其上清液与沉淀均具有拮抗活性,沉淀经SDS-PAGE凝胶电泳检测证明其拮抗物质具有蛋白质性质。[结论]1#链霉菌具有很好的开发研究价值。     

绿豆核酸酶的提取及活力测定

[目的]优化绿豆核酸酶的提取条件并测定其活力。[方法]利用单因素和正交试验,考察提取时间、料液比、p H、芽长几个因素对从绿豆芽中提取核酸酶的影响,优选出各影响因素的最佳水平,并进行活力测定。[结果]提取时间20 h,料液比1∶12(g∶m L),p H 3.0,芽长是绿豆长的4倍时,绿豆核酸酶酶活最高为478.86 U/m L。影响绿豆核酸酶提取的因素主次顺序依次为提取时间、p H、料液比、芽长。采用饱和度为80%的硫酸铵盐析沉淀后,酶活达1 569.6 U/m L,较提纯前提高了2.28倍。[结论]该研究可为核酸酶的开发利用提供参考。     

二甲胺-丙烯酰胺阳离子聚丙烯酰胺的合成与表征

[目的]分析二甲胺-丙烯酰胺阳离子聚丙烯酰胺的合成与表征。[方法]以丙烯酰胺、二甲胺和甲醛为原料,以亚硫酸氢钠和过硫酸铵作为引发剂合成阳离子聚丙烯酰胺(CPAM),采用正交试验来确定CPAM合成的最优方案,并对CPAM进行阳离子度、分子量的测定及红外光谱表征,分析其对制胶废水处理的效果。[结果]制备CPAM的最佳工艺为m(丙烯酰胺)∶m(甲醛):m(二甲胺)=20∶15∶11、反应温度为35℃、反应时间为6 h、引发剂(亚硫酸氢钠和过硫酸铵)质量分数是0.4%;随高聚物的分子量和阳离子度增大,制胶废水絮凝效也增强;分子量检测并结合红外谱图表明由丙烯酰胺、二甲胺等在试验条件下合成了阳离子聚丙烯酰胺。[结论]CPAM对制胶废水有很好的絮凝效果。