RNA干扰技术在蜱研究中的应用

蜱是仅次于蚊子的第二大疾病传播媒介,分布广泛,对人和动物的健康危害严重。RNA干扰技术已经成功应用于新秀丽小杆线虫、黑腹果蝇、真菌及哺乳动物等方面的研究。本文就蜱体内RNA干扰的机理,RNA干扰方法以及在鉴定蜱基因功能、疫苗抗原筛选以及蜱与蜱传病原体的相互作用研究上的应用进行综述分析,探讨存在的问题和进一步应用前景。     

RNAi技术及其在寄生虫研究中的应用

RNA干扰（RNA inter／erence,RNAi）是一种新兴的基因阻断技术,它通过双链RNA分子的介导,特异性降解相应序列的mRNA,从而导致转录后水平的基因沉默,该技术自1998年首次报道以来已取得了重大研究进展。本文就RNAi的作用机制、特点及其在寄生虫基因功能研究、寄生虫疫苗及抗寄生虫药物有效靶点的筛选等方面作一综述。     

动物RNA病毒VLPs疫苗的研究进展

RNA病毒引发了众多的人类、动物重大疫病和公共卫生事件,然而目前尚无针对RNA病毒的特效药物,开发安全且有效的疫苗是控制RNA病毒感染的最有效手段,新型疫苗研发和使用已经是第3次疫苗革命的主题。病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)是病毒的一种或几种结构蛋白构成的纳米级空心颗粒,不含有感染性遗传物质,无法自我复制,具有较高安全性。另外,VLPs形态结构与天然病毒粒子类似,保留了天然病毒粒子的空间构象,易被宿主免疫系统有效的识别、摄取和递呈,进而高效地诱导T细胞和B细胞的免疫反应,是近年来新型疫苗领域中的研究热点。现对RNA病毒结构与功能、VLPs疫苗的分类、包装与嵌入、表达系统及载体动能、免疫原性评价、蛋白定量及纯化等方面进行综述。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传技术的研究进展

反向遗传操作技术可以在DNA水平上对RNA病毒基因组进行各种修饰或改造,然后通过拯救病毒的表型变化来判断这些基因操作的效果,从而可以对病毒基因组的表达调控机制、病毒致病的分子机理等进行研究。本文就反向遗传操作技术在PRRSV基因功能结构研究以及新型疫苗开发等研究中的应用进行了综述。     

反义技术及其在预防医学中的应用

反义技术就是根据碱基互补原理 ,利用人工或生物合成的特异互补的DNA或RNA片段 (或其修饰产物 )抑制或封闭基因表达的技术 ,包括反义RNA技术 ,核酶技术和反义寡核苷酸技术。文中介绍了反义RNA技术、核酶技术和反义寡核苷酸技术等反义核酸技术的原理 ,以及反义核酸技术在基因和某些特定蛋白的研究 ,在肿瘤性疾病、病毒性疾病和转基因研究等预防医学领域方面的应用     

核酶（Ribozyme）抗病毒研究进展

核酶（Ribozyme）是一类具有催化RNA切割反应功能的RNA分子，它通过碱基配对有效序列特异地切割靶RNA[1]。近年来证实，核酶广泛存在于自然界，其二级结构已经研究清楚。通过设计并人工会成核酶，催化RNA内特定碱基间磷欧转酯反应和水解功能RNA，抑制病毒基因表达，从而有效地阻断病毒的复制繁殖[2，3]。目前在抗病毒疾病研究中，由于病毒抗原漂移和超强毒株的出现以及母源抗体的干扰等原因，经常出现疫苗接种失败或弱毒疫苗毒力返祖等潜在危险，因而人们正在努力寻求这种新的继反义RNA与反义DNA等的抑制病毒基因表达的防疫途径，…     

RNA干扰及其在动物传染病预防上的应用

RNA干扰技术是近几年发展起来的分子生物学新技术,广泛应用于基因功能研究和人畜疾病预防。在RNaseⅢ的协助下,siRNA能够结合并切断相应基因的mRNA,从而阻断基因的表达。siRNA可以是人工体外合成,也可以是转染到细胞内的重组载体转录产生。对碱基上某些基团的取代会影响到siRNA的干扰活性及其对RNA酶的耐受性。由于siRNA只有不到30个碱基的长度,很容易在病毒的不同亚型和变异株之间找到保守序列,且应用后能快速产生抗病毒作用,这是疫苗和抗病毒药物不具备的优点。     

慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰

慢病毒载体是高效的基因转导工具,能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞.将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达,它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段.应用慢病毒载体进行转基因动物的制备,转基因的效率将得到显著提高.慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点,它能在哺乳动物的各类细胞、多种疾病的离体细胞中实现稳定的RNA干扰.该技术被广泛用于基因功能的研究,在疾病的基因治疗上也具有良好的前景.     

慢病毒载体及慢病毒介导的RNA干扰

慢病毒载体是高效的基因转导工具,能将外源基因序列稳定导入分裂期细胞和非分裂期细胞.将慢病毒载体与RNA干扰结合能在哺乳动物的各类细胞中特异性抑制同源基因的表达,它将是基因功能研究和基因治疗的有力手段.应用慢病毒栽体进行转基因动物的制备,转基因的效率将得到显著提高.慢病毒介导的RNA干扰具有高效、稳定、特异性强的特点,它能在哺乳动物的各类细胞、多种疾病的离体细胞中实现稳定的RNA干扰.该技术被广泛用于基因功能的研究,在疾病的基因治疗上也具有良好的前景.     

RNA干扰技术在动物繁殖中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA诱发的转录后水平的基因沉默现象,是近几年发展起来的基因表达调节新机制,广泛地存在于真菌、植物和动物中。到目前为止,已有很多试验证明,RNAi作为一种基因功能研究的新手段,在动物繁殖研究中发挥了极其高效的作用。作者主要介绍了RNAi的研究历史、分子机制、作用特点、生物学意义及在动物繁殖中的应用。     

RNAi技术及其在动物传染病预防上的作用

近年研究发现,除体液和细胞两大免疫系统外动物体内还存在着另一种古老的免疫机制.一些短的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)通过结合细胞内相应基凶的mRNA,可以阻止该基因表达,这就是RNA干扰现象(RNA interference,RNAi).RNAi在线虫和果蝇的研究中被发现后,很快发展成为基因功能研究的有力工具.由于RNAi具有超越疫苗和抗病毒药物的诸多优点,它也给许多疾病的防治提供了新思路[1].本文主要就其作用机制和动物病毒性疾病预防的应用研究作一阐述.     

鸡传染性支气管炎病毒反向遗传技术研究进展

鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)感染引起的鸡的一种急性、高度接触性传染性病。IBV基因组非常容易发生突变和重组，给该病防控带来巨大困难，因此高效疫苗和有效药物的研发非常重要。反向遗传技术是研究RNA病毒的重要技术。通过反向遗传技术可以在DNA分子水平定向改造病毒序列，对病毒的基因功能、致病机制以及新型疫苗进行研究。论文对构建IBV操作系统的策略、利用反向遗传技术研究IBV基因结构和功能、研发新型疫苗以及开发病毒载体的最新进展进行综述，为IBV及其他冠状病毒相关研究提供参考。     

反义技术及其选择性应用研究进展

反义技术利用DNA或RNA分子通过Watson Crick碱基配对原则与目的基因的mRNA互补结合,通过各种机制使其降解或抑制其编码蛋白的翻译,从而抑制目的基因的表达,包括反义寡核苷酸技术、核酶技术和小干扰RNA技术。与基因敲除等功能缺失性研究方法相比,反义技术具有投入少、周期短、操作简单等优点,因此受到了广泛的关注。文中介绍了反义RNA技术、核酶技术和反义寡核苷酸技术等反义核酸技术的原理及其主要应用,对几种常用反义技术的选择性应用及存在的问题进行概述。     

RNA干扰技术及其在蜜蜂基因功能研究中的应用前景

RNA干扰作用(RNA interference,RNAi)是生物界一种古老且进化上高度保守的现象,自发现以来便成为研究基因功能的有效手段。作者重点介绍了RNA干扰技术发现的历史过程和作用机制,阐述了其在昆虫功能基因组学方面的应用进展,展望了其在蜜蜂基因功能研究中的应用前景。     

反义长链非编码RNA调控机制及其在畜禽生理过程中的作用研究进展

反义长链非编码RNA是一类新型的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)，约占总lncRNA的40%，在真核生物体内广泛存在。反义lncRNA主要通过顺式或反式作用方式作用于其正义基因或其他基因。反义lncRNA几乎在机体所有调控水平上都发挥作用，广泛参与畜禽生长发育、繁殖及疾病与免疫等生理过程。本文对反义lncRNA的类型、调控机制及其在畜禽生理过程中的作用研究进展进行综述，为反义lncRNA的鉴定及功能研究提供依据和参考。     

转基因表达的调控方法

转基因动物技术作为一种研究基因功能的技术体系 ,在生命科学研究领域有着广泛的应用前景。有效地使精确的遗传基因修饰在动物体内得到表达并实现世代间的传递是转基因技术的关键。近年来由于转座子、逆转录病毒的运用以及采用加入或去除某些基因的体细胞的克隆技术的发展 ,不同物种转基因的培育方法日趋简便。 Cre-L ox P系统越来越多地用于从基因组中去除特定的序列或靶向整合外源DNA。四环素等系统已被证实可获得确切的转基因表达。具有反式显性阴性效应的与 DNA形成三链螺旋的 RNA、反义 RNA(包括 :含 RNA干预和核酶的双链 RNA)以及蛋白质的表达均被证实可特异性地抑制宿主或病毒基因的表达。文章综述了转基因的概念、表达及调控转基因表达的常用方法     

ORN及其类似物的天然抗病毒活性与临床应用研究进展

病毒来源的免疫刺激RNA寡聚核苷酸(ORN)及其类似物是一类重要的病原相关分子模式(PAMPs),通过TLR7/8激活机体的免疫系统释放一系列干扰素和炎性细胞因子,发挥天然抗病毒免疫。ORN及其类似物可作为免疫调节剂或疫苗佐剂预防和治疗病毒病、自身免疫病和肿瘤。论文就ORN及其类似物的天然抗病毒活性和临床应用等研究进展进行综述。     

猪瘟病毒E0和E2基因变异及猪瘟净化方法的研究

猪瘟是危害养猪业的烈性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为16种A类法定动物传染病之一。随着分子生物学研究的不断发展,人们对猪瘟病毒的基因结构、基因功能、检测手段、野毒和疫苗毒的鉴别以及疫苗预防方法有了更深入的认识。文章就猪瘟基因的结构特点、E0和E2基因的功能和变异的研究等方面进行了综述,以期对我国猪瘟病毒基因及其基因变异的研究提供一定依据,同时结合本实验室建立的对猪瘟病毒野毒和疫苗毒建立的二重PCR鉴别诊断和猪瘟净化方案的研究进行了综述,以期为猪瘟防治及净化方案的制定提供一定的参考。     

结核分枝杆菌相关非编码RNA研究进展

结核分枝杆菌引起的结核病仍然是全球危害最严重的疾病之一,由于结核分枝杆菌耐药性增强和艾滋病蔓延,结核病又有卷土重来之势。非编码RNA(non-coding RNA,nc RNA)具有基因调控作用。结核分枝杆菌相关的非编码RNA分为细菌体内的s RNA(small RNA)和宿主体内的非编码RNA两大类,其中现已发现结核分枝杆菌内有5’和3’端非编码RNA、反义转录产物、基因间s RNA等多种nc RNA,其多以与靶基因碱基互补影响靶基因表达。宿主细胞内有微小RNA和长非编码RNA,这两类非编码RNA功能与作用机制不尽相同。微小RNA作用机制与细菌内s RNA类似,其中mi R-155等是研究的热点;长非编码RNA的研究才刚刚兴起,其功能比微小RNA更加广泛,将会成为未来的热门研究领域。研究这两大类非编码RNA对于理解结核分枝杆菌在宿主细胞中的存活机制及致病机理以帮助研发新型疫苗、药物诊断方法等有着非常重要的意义。