哺乳动物细胞无血清培养基研究进展

随着哺乳动物细胞培养种类、规模和应用范围的不断扩大以及安全性能要求的不断提高,无血清培养基的研制已经成为细胞工程领域的重要课题.许多类型的哺乳动物细胞无血清培养基配方得到了研究开发和优化,且有些已经进入第3代无蛋白无血清培养基研制阶段.论文重点概述了无血清培养基在添加因子作用机制、细胞分化条件、细胞和组织移植以及肿瘤治...     

昆虫细胞无血清培养基研究进展

随着昆虫杆状病毒表达载体系统的广泛应用,昆虫细胞大规模无血清培养已成为一种发展趋势。目前的昆虫细胞培养基中主要有糖类、维生素、氨基酸、脂类、无机盐、有机酸等基础成分,此外还需要添加血清或酵母提取物和水解乳蛋白等血清替代物。然而使用血清会带来诸多难以解决的问题,因此开发使用血清替代物和无血清培养基已成为生物制品行业关注的主要方向。论文综述了昆虫细胞无血清培养基的研究进展,包括研究历程、研究现状、基础成分和其他添加物等。     

Vero细胞无血清培养基研究进展

Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可的生产人和动物疫苗的细胞系。为了避免外来污染和血清中不确定成分对细胞生长及其下游工作带来的影响,用无血清培养基或化学成分明确的培养基培养Vero细胞已成为病毒疫苗生产的一个重要发展趋势。Vero细胞无血清培养基的组成包括基础培养基和添加因子两大部分,常见的添加因子有转铁蛋白、胰岛素、微量元素、生长因子和维生素等。论文对Vero细胞无血清培养基的研究进展做一综述,以期为Vero细胞的无血清培养基研制及疫苗的生产提供参考。     

国产商品化无血清培养基

上海旭太生物工程有限公司最近成功自行试制了在BHK21细胞和非洲绿猴肾Vero细胞的无血清培养基。这二种培养基在各自的细胞上按中国生物制品的操作规程的要求，在少血清时（1％～2％的血清）传代培养，而后用无血清培养基作维持培养。目前技术传代培养已可传到7代，无血清培养可维持2代，这样满足了疫苗生产目前的工艺要求。     

昆虫细胞无血清培养基的研究

为开发昆虫细胞无血清悬浮培养基,以基础培养基Grace's Insect medium为基础,添加葡萄糖、水解乳蛋白、酵母粉和PF-68等组份后,分别接种Sf-21、Hi-five两种昆虫细胞进行无血清悬浮培养。结果显示:两株昆虫细胞生长均较好,均能够很好的全悬浮生长,Sf-21细胞最高密度可达(39.8±2.6)×105/ml,Hifive细胞最高密度可达(44.4±1.0)×105/ml。本研究为昆虫细胞培养提供一种无血清悬浮培养基配方,为我国利用昆虫细胞杆状病毒表达系统生产生物制品提供基础保障。     

无血清培养基诱导破骨样细胞分化

探索了无血清培养基对RAW264.7细胞诱导破骨样细胞（osteoclast-like-cell,OCL）分化的影响。结果显示,无血清条件下,M-CSF＋RANKL能够诱导RAW264.7细胞分化产生TRAP阳性OCL,F-actin及Hoechst33258染色观察到OCL骨架结构完整、核规则,具有骨吸收活性。这表明在无血清条件下RAW264.7细胞可诱导分化产生OCL,但其存活时间短,此外,M-CSF在其分化过程中具有不可替代的作用。     

Marc-145细胞的无血清悬浮培养基开发

为开发适合Marc-145细胞生长的无血清悬浮培养基,试验将贴壁Marc-145细胞转入Celer-S001培养基中进行悬浮适应,通过混料试验和水解物筛选试验获得适应Marc-145细胞快速扩增的无血清悬浮培养基,对悬浮培养的Marc-145细胞进行猪繁殖与呼吸综合征病毒感染并检测病毒效含量,评价悬浮培养的Marc-145细胞的病毒扩增能力。结果表明：Marc-145细胞可以在Celer-S001培养基中悬浮培养,其比生长速率为(0.25±0.06)/d;适应Marc-145细胞快速扩增的最优无血清悬浮培养基由B3和B8培养基以0.54∶0.46比例混合,并添加2 g/L的水解物H3构成,Marc-145细胞的比生长速率为(0.51±0.03)/d,密度为3.73×10⁶ cells/mL;细胞接毒后的病毒含量最高可达(5.25±0.25)lgTCID₅₀/mL,表明细胞仍然保持着病毒扩增能力。说明试验成功开发了适合Marc-145细胞生长的无血清悬浮培养基,Marc-145细胞在该培养基中生长良好,具有病毒扩增能力。     

动物细胞无血清培养技术研究进展

生物医药是21世纪的朝阳产业,动物细胞无血清培养技术在生物医药领域中发挥着重要作用。无血清培养技术包括无血清培养基的开发、适应细胞株的驯化以及细胞规模化培养技术等关键技术,以细胞生物反应器高密度培养技术作为基础的细胞无血清悬浮培养技术推动了生物制药的快速发展。     

以KnockoutTM SR无血清培养基培养小鼠精原干细胞的研究

精原干细胞(SSCs)是睾丸内具有自我复制和分化为精子潜能的干细胞,它的体外培养是精子发生机理研究和制作转基因动物等的新途径[1-2]。近几年的研究表明,SSCs在体外的自我增殖需要胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和饲养层细胞等的支持[3-10],并且睾丸支持细胞和血清均可导致培养的     

哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术研究进展

随着生物制品行业的快速发展,哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术已经运用到越来越多的领域中。该技术能够扩大哺乳动物细胞培养的规模,提高生物制品的产量及质量,拓宽哺乳动物细胞的应用领域,并促进哺乳动物细胞生产实现工业化与产业化。但悬浮驯化后的细胞,与父母代细胞相比,蛋白表达水平与生长调节通路均发生了不同程度的改变,使其生产性能受到影响。对此,国内外学者开展了大量的研究并取得了较好进展。作者阐述了哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术的研究现状以及临床生产工艺的优化策略,以期为哺乳动物细胞无血清全悬浮培养技术的发展提供参考。     

应用无血清MA12增菌培养基制备禽霍乱荚膜抗原疫苗的免疫试验

在马丁汤培养基中不加血（清），而用ＭＡ１２增菌剂替代含血因子制备禽霍乱荚膜抗原菌（ＣＣＡ），其蛋白质含量和免疫原性不受影响，免疫保护率为７０％以上。未发现对家禽有任何副作用。免疫有效期与常规含血（清）培养基制备的ＣＣＡ苗相似，可达５个月。ＣＣＡ苗同样适用于禽霍乱暴发群紧急接种。加ＭＡ１２增菌剂的无血马丁汤培养基用于制备ＣＣＡ苗的成功，将为培养禽多杀巴氏杆菌和大批量生产ＣＣＡ苗提供了新途径。     

应用无血清MA_12增菌培养基制备禽霍乱荚膜抗原疫苗的免疫试验

在马丁汤培养基中不加血(清),而用MA_(12)增菌剂替代含血因子制备禽霍乱荚膜抗原苗(CCA),其蛋白质含量和免疫原性不受影响,免疫保护率为70％以上。未发现对家禽有任何副作用。免疫有效期与常规含血(清)培养基制备的CCA 苗相似,可达5个月。CCA苗同样适用于禽霍乱暴发群紧急接种。加MA_(12)增菌剂的无血马丁汤培养基用于制备CCA苗的成功,将为培养禽多杀巴氏杆菌和大批量生产CCA苗提供了新途径。     

蛋源无血清培养基培养鸡类囊胚和鸡、人成纤维细胞的研究

试验采用新鲜种蛋(A0组)和无精蛋(B0组)蛋清培养基培养鸡类囊胚、鸡成纤维细胞和人成纤维细胞；比较了以类囊胚形式存在的鸡胚胎干细胞和鸡成纤维细胞、人成纤维细胞在利用蛋清组分上的区别。结果显示：(1)与B0组相比,A0组培养的类囊胚和鸡成纤维细胞表现出了生长优势,而这点在人成纤维细胞没有体现。(2)类囊胚形成期集中利用蛋白质,其中卵清蛋白的相对量下降最快；人成纤维细胞的蛋清培养液中胰蛋白酶抑制剂显著下降,且也发生在培养早期；鸡成纤维细胞的培养液组分在整个过程中都无显著变化。     

从无IgG的组织培养基中纯化单克隆抗体

本文介绍的方法，可以从组织培养物上清中，快速纯化单在隆抗体。此法简便，经济，产物纯度的能力。可以将大量的上清快速过柱。但蛋白Ｇ不能区分单克隆抗体（ｍＡｂ）和其他无关的ＩｇＧ，如存在于培养物上清中的牛ＩｇＧ。因此在用作标准组织培养基之前，将胎牛血清（ＦＣＳ）通过蛋白Ｇ，而除去牛ＩｇＧ。将产生大鼠抗小鼠和小鼠抗小鼠ｍＡｂ的杂交瘤培养于无牛ＩｇＧ的培养物中，随后将此培养物上清通过蛋白Ｇ，因而产生高纯度和     

用低血清培养基和常规培养基培养细胞对FMDV增殖影响的比较

对15批用低血清培养基培养的细胞与用常规培养基培养的细胞进行口蹄疫病毒增殖培养对比试验,结果表明:两者之间在FMDV增埴指标上,LD50和TCID50无明显差别；低血清培养基比常规培养基病变时间短1h.     

无血清培养基IVD101和G1/G2在牛体细胞核移植中的应用研究

通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基（IVD101、G1／G2）条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1／G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa＋5％FBS作为对照组。无血清培养基IVD101和G1／G2的囊胚发育率与对照组无显著性差异（41．2％±9．1％、42．2％±10．8％,48．0％±9．2％,P〉0．05）。通过囊胚差异染色和冷冻／解冻胚胎存活率分析胚胎质量,发现无血清培养基ICM／Total略低于对照组（31．8％±10．5％、29．5％±11．9％vs ．33．0％±14．8％）,但无显著性差异（P〉0．05）;3个组别的囊胚经程序化冷冻／解冻后无血清培养基的存活率（IVD101、G1／G2）略高于对照组,但差异不显著（84．8％、80．4％＇US．77．3％,P〉0．05）。结果证明无血清培养基（IVD101、G1／G2）可以支持体细胞核移植重构胚的体外发育,且其对程序化冷冻的耐受性与添加血清组（CR1aa＋5％FBS）相似。     

无乳链球菌研究进展

无乳链球菌(S.agalactiae)是一种引起人畜及水产动物发病和死亡的重要病原菌,本研究对无乳链球菌的分离鉴定、致病性、致病因子、血清型、遗传相关性、耐药性及耐药机制及疫苗研制等方面进行了综述,同时对无乳链球菌未来研究方向和研究前景进行了展望,以期为今后研制有效的药物及疫苗,更好地防范、治疗无乳链球菌性疾病提供理论基础。     

中药血清药理学研究进展

中药复方制剂的化学成分极其复杂,经过体外煎煮或其他制备过程,再经口服以后在体内发生一系列变化,有的是药物本身物质发挥作用,有的是经过肝脏代谢的产物发挥作用,有的则通过第二信使间接起作用。