解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响

分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大.     

温度和保存时间对猪精子顶体酶活性的影响

为了探讨温度和液相保存时间对猪精子顶体酶活性的影响,采用紫外分光光度计检测猪精子顶体酶活性。结果显示:(1)鲜精、冷休克和热休克每106精子顶体酶活性分别为5.38、5.20和5.16 mIU,差异不显著(P>0.05)。(2)鲜精在4、17、25、30、37和39℃时每106精子顶体酶活性分别为4.29、5.01、5.03、5.17、4.78和4.61 mIU,随着温度的升高精子顶体酶活性逐渐提高,当温度达到30℃时达到最高,且4℃和30℃时差异显著(P<0.05)。(3)液相精液在4℃保存超过1 d时精子顶体蛋白酶活性显著下降(P<0.05);在17、25和39℃保存超过2 d时顶体酶活性显著下降(P<0.05),且在17℃保存效果较好。结论是猪精子顶体蛋白酶活性受温度的影响,在17℃的条件下3 d内保存的猪精子顶体酶活性最佳。     

不同稀释液2—5℃保存鸡精液的研究

试验使用不同稀释液在2—5℃稀释保存鸡精液,测定了体外保存的精子活力和pH值变化。随保存时间的延长,不同稀释精液的精子活力和pH值下降幅度有差异。精子活力与pH值密切相关。精液稀释保存24小时的受精率以BPSE液最高(86.37％),与新鲜未稀释精液的受精率无显著差异;不同稀释液的受精蛋孵化率均无显著差异。用BPSE液加氧和减压保存的效果均无改进。Lake液以1:1(精液:稀释液,v/v)的倍数稀释,保存24小时后精子活力和pH值明显低于较高稀释倍数(1:2或1:3);保存24小时的受精率显著低于输精前加入BPSE液调整Lake液后的受精率。     

保存温度对奶牛细管冻精解冻后有效活力的影响

为探讨0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的最佳保存环境和适宜的输精时段,本试验对奶牛细管冻精40℃下20 s解冻后在0℃～4℃,14℃～16℃,25℃～27℃下分别保存2,4,6,8,10h的活力进行了测定.结果表明:在本次实验中,奶牛细管冻精解冻后在0℃～4 ℃和14℃～ 16℃保存到10h精子活力0.434±0.0167和0.423±0.0196与初解冻精子活力(0.441±0.030)差异不显著(P＞0.05);在25℃～27℃随保存时间延长精子活力呈下降趋势,保存6h精子活力和初解冻相比差异显著(P＜0.05),保存8,10h差异极显著(P＜0.01).从而得出,奶牛细管冻精解冻后在0℃～4℃和14℃～16℃保存10h以内,精子活力仍然维持在一个较高水平,符合输精要求,在此温度和时间范围内进行长距离携带,对精液质量影响小,可以达到预期的输精效果;环境温度在25℃左右时,冻精解冻后宜于6h以内进行输精.     

杜洛克猪精子体外4℃保存过程中活力参数及蛋白修饰变化

为探究体外4℃保存对猪精子活力参数及蛋白修饰的影响,使用猪精液保存稀释液体外4℃保存猪精子7d,利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)分析测定新鲜精液和保存7d后精液的精子活力指标;使用相应试剂盒检测精子中ATP水平及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性;应用蛋白免疫印迹(WB)技术,比较新鲜精液在4℃保存7d后蛋白翻译后修饰水平的变化。结果表明,猪精液体外4℃保存7d后,精子活力参数呈现下降趋势。其中,运动力(MOT)、快速前进性运动速率(PRO)、平均路径速度(VAP)、平均直线运动速率(VSL)与新鲜精液相比分别降低59.99%、37.03%、12.34%、18.97%,且差异显著(P0.05);发现精子中ATP水平和GAPDH酶活性在4℃保存7d后显著降低(P0.05),即随着体外保存时间的延长,精子细胞内的能量供应不足,代谢水平降低;猪精液4℃保存7d后精子蛋白的磷酸化和酰化修饰明显减弱,这一结果与精子活力、代谢酶活性结果的变化趋势一致。研究结果证实,在体外4℃保存条件下,可能因精子细胞内能量代谢受阻而影响了精子活力及蛋白修饰水平。因此,本研究无论对于丰富精子的能量代谢基础理论,还是对于延长猪精液低温保存时间,提高人工授精效率,均具有重要的理论和实践意义。     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

褪黑素在猪精液保存中的抗氧化作用

为探讨褪黑素(MLT)在猪精液保存中的抗精子氧化损伤效应,采用分步筛选的方法,首先在15 ℃保存稀释精液中分别添加1×10-6 mol/L(M1)、1×10-5 mol/L(M2)、1×10-4 mol/L(M3)、1×10-3 mol/L(M4)和1×10-2 mol/L (M5) MLT,以不添加MLT为对照组(M0),检验并选择MLT有效浓度用于15 ℃保存的离心精液,检验并选择MLT最佳浓度用于冷冻精液.结果表明:在保存6 d的稀释精液中,M1、M2和M3组精子活率(TMS)、质膜完整性(PMI)和顶体完整性(NAR)均高于M0,M2最高,M4、M5则显著低于M0(P＜0.05);丙二醛(MDA)浓度均低于M0,并以M2为拐点先降后升;选择M1、M2和M3用于离心精液保存,6 d后TMS和NAR均高于对照组,且M2与对照差异显著(P＜0.05),MDA浓度则逐渐降低且与对照差异显著(P＜0.05);选择M2用于精液冷冻保存,解冻精液TMS、PMI、NAR和线粒体膜电位(Mt-MP)显著提高(P＜0.05),MDA浓度显著降低(P＜0.05).可见,添加适宜浓度MLT能够抑制稀释、离心及冷冻保存猪精液中的精子氧化损伤,显著提高精液保存质量.     

羊奶低温保存山羊精液技术研究

为探明羊奶用于精液保存的可行性,寻找一种简便的山羊精液保存方法,试验研究并优化了羊奶低温保存山羊精液技术。结果表明:产后1个月的山羊奶离心前后p H和渗透压无显著变化(P0.05),精子在离心后羊奶中保存96 h活率和活力显著高于保存在未离心羊奶中(P0.05);200 m L水浴降温中保存精子活率与50 m L、100 m L、150 m L无显著差异(P0.05),200 m L水浴降温精子活力在72 h、84 h、96 h显著高于50 m L水浴降温组(P0.05);精子在产后1个月的羊奶中保存12~96 h活率显著高于保存在产后2个月的羊奶中(P0.05),保存48~96 h的精子存活率显著高于保存于初乳中(P0.05)。用产后1个月的羊奶保存精子12~96 h,其活力显著高于用初乳和产后2个月的羊奶保存(P0.05);产后1个月羊奶与常规稀释液保存84 h内精子活率无显著差异(P0.05),96 h显著高于常规稀释液(P0.05),产后1个月羊奶与常规稀释液保存60 h内精子活力上无显著差异(P0.05),72 h、84 h、96 h均高于常规稀释液(P0.05)。因此产后1个月羊奶可以作为一种简便的山羊精液稀释液。     

不同糖类对蓝狐精子常温及冷冻保存特性的影响

人工采取6只优质芬兰雄性蓝狐精液,利用含有不同性质糖成分的Tris-卵黄-柠檬酸钠-甘油稀释液稀释后,常温保存及制成细管冻精,荧光免疫方法检测蓝狐鲜精液常温保存及冷冻复苏后冻融精子的质量,目的在于比较不同性质糖在蓝狐精子常温及低温冷冻保存中的作用。结果表明,常温保存时,果糖、木糖及海藻糖试验组精子活力、质膜完整率及顶体完整率较高,与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);超低温冷冻保存时,果糖、海藻糖稀释液有利于提高冻融精子质量,活力(44.6%、43.7%)与对照组(35.6%)差异显著(P<0.05),质膜完整率(50.6%、51.2%)、顶体完整率(53.2%、54.1%)与对照组间(39.6%、43.5%)差异极显著(P<0.01),而其他糖分试验组与无糖对照组差别不显著(P>0.05)。结果提示:果糖、木糖、海藻糖亦可作为蓝狐精液常温保存的稀释液成分,而果糖、海藻糖为蓝狐精液超低温冷冻保存较理想的保护剂     

牛精液低温（0℃）保存的效果研究

为研究一种Tris-卵黄稀释液0℃（冰水混合物中）保存牛精液的效果,该试验选用5头西门塔尔牛,将每头牛采集的精液等量分装,按1∶3的比例分别与试验组稀释液（Tris-卵黄专利稀释液）、对照组稀释液（基础稀释液）等温稀释处理,在0℃（冰水混合物中）状态下保存。检测保存0、 1、 2、 4、 6、 8、 10、 12 d的精子活率、顶体完整率及质膜完整性,并用保存5 d的精液进行人工授精,统计受胎率。结果表明：保存4～10 d, A组稀释液保存的精子活率显著高于B组（P<0.05）;保存10 d时,A组精子活率大于50%; 0℃保存牛精子顶体完整率、质膜完整性随保存时间的延长而逐渐降低,但不同处理间无显著差异（P>0.05）。A组稀释液保存牛精子的受胎率显著高于B组。可见,用Tris-卵黄稀释液0℃保存牛精液,保存效果较好,受胎率较高。