三种免疫血清学方法检测弓形虫抗体的比较

用班点酶联免疫吸附试验、金葡菌A蛋白酶联免疫吸附试验及间接血球凝集试验三种方法检测弓形虫感染鼠血清及健康鼠血清各100份,平均阳性率分别为96.0％、94.0％及88.0％,平均假阳性率分别为     

间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验诊断血吸虫病的研究

本文进一步研究了日本血吸虫感染鼠肝组织内虫卵冰冻切片作为血吸虫病诊断抗原的实用价值。用该抗原作间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验,采用单盲法检测140例日本血吸虫病人特异性抗体,阳性率分别为96.4％及97.1％;检测100份健康人血清,假阳性率分别为3.0％及2.0％;检测21例丝虫病人及11例华枝睾吸虫病人,交叉反应率为0～9.5％。间接荧光抗体试验和免疫酶染色试验的敏感性均显著地高于环卵沉淀试验.结果表明该抗原是一种较为理想的血吸虫病血清学诊断抗原。     

酶联免疫吸附试验检测姜片虫感染者血清抗体

超声粉碎制备姜片吸虫成虫冷浸抗原,以1:3500工作浓度包被酶标板;采用Kato—Katz氏定透法普查姜片吸虫病,对虫卵阳性者用ELISA法测定血清抗体,同时测定健康居民的血清和其他吸虫病患者血清,以评价ELISA法检测姜片虫病血清抗体的敏感性、特异性和交叉反应性。按常规ELISA方法操作,目视与酶标仪判断结果。普查2 189人中姜片吸虫卵阳性者168例;168例中165例ELISA阳性,ELISA与Kato—Katz氏定透法的阳性符合率98.21％;健康居民血清147份,阳性6份,阳性率4.08％;与血吸虫病交叉阳性为9.38％,肺吸虫病交叉阳性为5.36％。应用此法检测姜片虫感染者血清抗体具有敏感性高、特异性强和交叉反应率低等特点,可代替粪检法广泛用于姜片吸虫感染的检测。     

牛巴泰病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

本研究以牛巴泰病毒(BATV)NM/12株作为诊断抗原,初步建立了BATV间接酶联免疫吸附试验(ELISA)的检测方法,并对反应条件进行初步优化。结果表明,该方法对赤羽病毒阳性血清、牛布鲁氏杆菌阳性血清、牛病毒性腹泻阳性血清无交叉反应,仅与BATV阳性血清发生特异性反应,表明其特异性较强;经敏感性试验测定,阳性血清1∶640倍稀释时检测仍为阳性,显示其敏感性高。应用该方法对内蒙古自治区、黑龙江省和吉林省的523份牛血清进行牛巴泰病毒血清流行病学调查,总阳性率为10.7(56/523),阳性检出率与临床普遍使用的中和试验符合率为100%。本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,为牛群抗体检测和BATV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。     

间接Dot—ELISA检查猪细小病毒抗原的研究

本研究首次成功地建立了检测PPV抗原的间接斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)标准化程序,在所确定的最适条件下,对纯化PPV抗原的最低检出量为2.5ng/dot,其敏感性为血凝试验(HA)的125倍,但稍低于银加强胶体金检测法(SECGA)。PPV阳性猪血清的特异性阻断试验及与猪瘟病毒,猪伪狂犬病病毒,猪巴氏杆菌的交叉反应试验证明,该方法对PPV抗原的检测具有特异性。以该方法检测PPV人工感染兔样本和自然感染猪样本,PPV抗原的阳性检出率分别为肾样本100％(17/17)、81.82％(9/11),肝样本100％(16/16)、56.52％(13/23)。20份随机样本的间接Dot—ELISA检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。 试验证明间接Dot—ELISA对PPV感染的检测具有简单、快速、经济、敏感性高、特异性强、重复性好和便于推广应用等优点,适用于大批量抗原样本的检测,是PPV感染快速诊断和流行病学调查的有效方法。     

ABC─Dot─ELISA快速检测食品中沙门氏菌

本试验采用生物素—亲和素酶复合物—斑点酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ—Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ）检测食品中沙门氏菌。该法可检出ＩＳＣ液中接种的沙门氏菌。其敏感性可达１０４—１０５千个／Ｌ，比常规免疫酶法和免疫荧光法提高１０—１００倍。特异性检测表明，其与大肠杆菌、变形杆菌、产气杆菌未发生交叉反应。该法在２４ｈ内可报告结果，比常规法至少快３—４ｄ。对２００份食品检样进行检测，检出１９份，检出率９．５％，与常规法检测结果平行比较，漏检率仅为０．５％，结果相差不显著（Ｐ＞０．０５）。进行３次重复性试验，结果完全相同。试验结果表明，该法操作简便、敏感、快速，具有较高的特异性，适于对大批样品进行快速检测。     

伊宁市犬猫弓形虫病流行病学调查

[目的]探明刚地弓形虫在伊宁市宠物犬猫、流浪犬、散养猫中的感染情况及流行特点。[方法]分别采用动物弓形虫Ig G抗体检测试剂盒(酶联免疫吸附试验)及弓形虫抗体快速诊断试纸(免疫色谱分析法)对不同生活状态、不同年龄、不同季节的440份犬猫血清样品进行抗体检测。[结果]酶联免疫吸附试验检测阳性率为20.23%(89/440),宠物犬阳性率为15.50%(31/200),宠物猫阳性率为10.00%(2/20),流浪犬阳性率为24.00%(48/200),流浪猫阳性率为40.00%(8/20),流浪犬阳性率显著高于宠物犬(P0.05),散养猫阳性率显著高于宠物猫(P0.05);第二季度犬的感染率最高,为27.00%(27/100),与第一季度差异显著(P0.05);1岁以内犬组与6岁以上犬组差异极显著(P0.01),1~3岁与6岁以上犬组差异显著(P0.05);弓形虫抗体快速诊断试纸(免疫色谱分析法)检测阳性率为21.14%,与酶联免疫吸附试验检测方法差异不显著(P0.05)。[结论]伊宁市犬猫弓形虫抗体阳性率处于较高水平,阳性率高低与犬猫年龄、生活状态以及季节性等因素有关。     

猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体间接酶联免疫吸附测定方法的建立与应用

[目的]建立一种检测猪圆环病毒3型抗体的血清学方法.[方法]以猪圆环病毒3型衣壳蛋白为包被抗原,通过筛选和优化反应条件建立一种检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,并进行特异性试验与重复性试验以及初步临床应用.[结果]确定检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法的各项最佳反应条件;仅有猪圆环病毒3型阳性血清的检测结果为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数和批间变异系数都小于5％,显示出良好的可重复性.在来源于北京地区与河北地区的318份猪的血清中检出猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体阳性率为32.70％,表明这两个地区存在较多的猪圆环病毒3型感染.[结论]建立了一种具有良好特异性和可重复性的检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,可用于猪圆环病毒3型抗体的检测.     

Dot-ELISA间接法检测鸡产蛋下降综合症的研究

常规方法分离纯化鸡ＩｇＧ,免疫山羊制备羊抗鸡ＩｇＧ二抗,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记制备酶标记物的工作浓度为１∶１０００,选用硝酸纤维素膜（ＮＣ）作固相载体,建立检测ＥＤＳＶ抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。检测ＥＤＳＶ鸭胚毒４０份,阳性检出率１００％;人工感染发病鸡的卵巢、输卵管、泄殖腔拭子各５０份,阳性检出率分别为１００％、１００％、９４％。与传染性支气管炎、新城疫、传染性法氏囊病无交叉反应,试验显示该方法简便、特异、快速、结果直观、便于生产应用。     

酶联免疫吸附试验检测鸭瘟抗体的研究和应用

应用提纯的鸭瘟病毒作为包被抗原，建立了用于检测鸭瘟抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）间接法。试验结果表明，该法特异性高（与鸭病毒性肝炎等１３种病的阳性血清不发生交叉反应），与血清中和试验的符合率为１００％但其敏感性比血清中和试验至少要高１０００倍，且重复性好，结果可靠，用于大批量样品的检测大约经６小时即可获得结果，是一种适合于血清流行病学调查、进出口鸭对鸭瘟的检疫和对鸭群进行免疫抗体水平检测的敏感、快速、准确性高、特异性强、重复性好且简便实用的方法。     

血清法监测人工感染弓形虫病猪特异抗体的比较

应用ELISA、LAT、IHA血清试验对8头人工感染弓形虫猪的血清抗体滴度变化规律进行了监测,并对不同检测方法的结果进行了比较.结果发现,试验猪在皮下感染弓形虫RH株速殖子后,血清中的特异性抗体首次检出的时间方面,LAT(第4 d)早于ELISA(第14 d)和IHA(第20 d);检出持续时间方面,LAT(54 d)长于ELISA(44 d)和IHA(19 d);平均检出率方面,LAT(7/8)高于ELISA(6.7/8)和IHA(5/8).试验结果表明,ELISA和LAT适合于猪弓形虫病的诊断和血清学调查,LAT更适合于猪弓形虫病的早期检测.     

刚地弓形虫RH株SAG3蛋白抗体检测的ELISA方法建立

[目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、鼠抗蓝氏贾第虫阳性血清以及鼠抗微小隐孢子虫阳性血清和健康小鼠阴性血清作对照,检测血清之间是否有交叉反应。[结果]最佳包被条件为:抗原包被浓度0.25μg/孔,被检血清稀释度1∶400,酶标二抗稀释度1∶3 000,封闭剂5%脱脂奶粉的PBST溶液;血清之间没有交叉反应。该方法的灵敏度为1∶1 600。[结论]该方法灵敏度高,特异性较强,可重复性较好,可用于对弓形虫感染的检测及流行病学调查。     

PCR检测急·慢性弓形虫感染小鼠的研究

[目的]建立灵敏、特异、稳定的检测弓形虫感染的PCR法。[方法]检测弓形虫急、慢性感染鼠血清及组织中弓形虫速殖子DNA,并对检测感染鼠血清中弓形虫速殖子的灵敏度进行评估。[结果]急性感染鼠接种后18 h,40%的感染鼠被检测为阳性;接种后21 h,80%的感染鼠被检测为阳性;24 h以后100%的感染鼠被检测为阳性。慢性感染鼠接种后18 d可从肝、肺、脾、肾、脑组织中检测到弓形虫DNA。试验中检测到1个弓形虫,相当于0.2 pg的弓形虫DNA含量。[结论]结果为运用PCR法检测弓形虫感染提供了参考。     

重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究

［目的］探讨检测猪弓形虫病的新方法。［方法］应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3（rMIC3）作为包被抗原建立间接ELISA方法,用于猪弓形虫抗体的检测。［结果］该法所用最佳抗原浓度为3.40μg/ml,最适宜的血清稀释倍数为1〖DK〗∶160,与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应,与LAT的符合率为92.56%。［结论］该方法快速、特异、重复性好,可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。     

猪弓形虫病兽医卫生检验的试验研究

屠宰猪弓形虫病多呈隐性或慢性感染,宰前检疫的重点应放在血清学检查上。用ELISA或IHAT试验能有效地检出本病,且前者比后者具有抗体检出早、持续时间长、阳性检出率高的优点。宰后检验应着重检查肺、肝、淋巴结的病变。支气管肺炎、灶性坏死性肝炎、出血性坏死性淋巴结炎、非化脓性脑炎是急性感染期的特征性病变。转为慢性感染的病猪,由于急性病损的修复,而代之以淋巴网状内皮系统细胞的明显增生。其淋巴结的肿大和“髓样变”是比较特征的。病猪肉的无害化处理,采用高温煮沸2.5小时或-25℃冷冻10天,均可取得良好的效果。     

Development of a sandwich Dot-ELISA for detecting bovine viral diarrhea virus antigen with E2 recombinant protein

The IgG antibodies of rabbit anti-E2 protein of the bovine viral diarrhea virus were prepared by a general method from high efficiency serum immunized by E2 recombinant protein antigen expressed in E. coli prokaryotic expression system and were labeled to make enzyme-labeled antibody with the method of NaIO₄. A sandwich Dot enzyme-linked immunosorbent assay (Dot-ELISA) for the detection of BVDV was developed. The optimal reaction conditions of Dot-ELISA were determined. The results show that optimal coating antibody was 300 μg·mL⁻¹, the working concentration of HRP-labeled antibody was 1:50. The optimal blocking reagent and time were 5% bovine serum and 45 min. The minimum detection of the content of antigen reached 1.35 μg·mL⁻¹. Compared with the routine IDEXX ELISA test kit with the whole virus, its specificity, sensitivity and coincidence rate were 90.48%, 96.55% and 95.24%, respectively. Compared with the sandwich Dot-ELISA with the negative staining electron microscope and RT-PCR, the coincidence rates were 90.9% and 93.1%, respectively. In addition, Bovine viral diarrhea virus (BVDV) antigen of 178 samples collected from cow farms in the Hebei Province, China, were detected by the developed Dot-ELISA and the IDEXX BVDV antigen Test Kit simultaneously, BVDV antigen positive rate was 39.89%–41.01%. The result of detecting clinical samples demonstrated that the established method showed its specificity, sensitivity and repeatability, whereas the results were easily interpreted without an ELISA reader.     

利用环媒恒温基因扩增法检测生猪刚地弓形虫

基于已公布的刚地弓形虫Sag2基因序列设计了1套特异引物,经过条件优化,成功建立了针对刚地弓形虫(简称弓形虫)的环媒恒温基因扩增检测法.根据扩增弓形虫和其他几种病原生物的效果对该方法进行评估.结果表明,该方法只检出致病性弓形虫,特异性良好;检测最低速殖子浓度为4个/μL.对长沙、株洲、湘潭三地生猪血样检测的结果是仔猪、成猪和种母猪弓形虫感染率分别为6.45%、7.69%和15.38%.     

Investigation on the co-infections of Toxoplasma gondii with PRRSV,CSFV or PCV-2 in swine in part of China

The objective of the present investigation was to estimate the prevalence of Toxoplasma gondii infection and co-infection with porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV), classical swine fever virus(CSFV) and porcine circovirus type 2(PCV-2) in pigs in China. A total of 372 tissues or serum samples collected from pigs distributed in 9 provinces/municipalities of China during the period from February 2011 to November 2012 were assayed for T. gondii antigens and antibodies using enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) technique, while the PCR was designed for the detection of the PRRSV, CSFV and PCV-2, respectively. The total positive rate of T. gondii, PRSSV, CSFV and PCV-2 was 9.14%(34/372), 50.00%(186/372), 37.10%(138/372) and 3.23%(12/372), respectively. Among the 34 T. gondii positive samples, 26 samples were simultaneously infected with T. gondii and viruses, while the remaining eight samples were infected with T. gondii alone. In addition, the co-infection rate of T. gondii with PRSSV, T. gondii with PRSSV and CSFV, T. gondii with PRSSV and PCV-2, T. gondii with CSFV and PCV-2, T. gondii with PRSSV, CSFV and PCV-2 was 1.61%(6/372), 4.03%(15/372), 0.27%(1/372), 0.27%(1/372) and 0.81%(3/372), respectively. The results of the present survey revealed that PRRSV and CSFV were the common pathogens co-existing with porcine toxoplasmosis in China, and both of them could increase the chances of T. gondii infection in pig. This is the first report of T. gondii co-infections with viruses in pigs. It is very important to understand the interactions of parasite and virus, and can be used as reference data for the control and prevention of co-infections of T. gondii and viruses in pigs.     

猪丹毒丝菌CbpB基因的克隆表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

利用表达纯化的猪丹毒丝菌(ER)胆碱结合蛋白B(CbpB)建立一种检测ER抗体的间接ELISA方法.克隆扩增ER的CbpB基因并与原核表达载体pGEx-6P-1连接,经PCR、双酶切及测序鉴定,将阳性重组质粒转入E.coil BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot鉴定产物.以纯化重组Cb...