酶联免疫吸附试验夹心法检测梅花鹿狂犬病病毒抗原的研究

以马抗狂犬病固定毒抗体建立的酶联免疫吸附试验夹心法,检测了动物脑组织中的梅花鹿狂犬病病毒抗原。对已知阳性和阴性鼠脑抗原的检测表明,本法具有敏感、特异、快速,简便等特点。实验室检测了50份阳性鼠脑抗原及40份阴性鼠脑抗原,其消光值(OD值)均数(X)分别为0.928和0.209。对5只鹿、3头牛和4只羊脑组织的检测结果皆与其它诊断结果相符;对15只犬的检测发现,其敏感性远远高于补体结合试验的敏感性。     

湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的调查研究

为了解湖南湘西地区外观健康犬携带狂犬病病毒的情况,我们于2005年9月从湘西狂犬病疫点采集38份扑杀的外观健康的犬脑组织,并于2006年1月在湘西农贸市场采集了168份外观健康的犬脑组织。RT-PCR和直接荧光抗体试验(FAT)检测表明共有5份犬脑标本为阳性,并用乳鼠脑内接种的方法分离得到了5株狂犬病病毒毒株,分子流行病学分析表明这5株病毒均为野毒。在这5份阳性标本,疫点有4份,检出率为10.5%,市场1份,检出率为0.59%。我们的调查结果表明疫点的外观健康犬携带狂犬病病毒的检出率与国内的其它报道接近,而从市场采集的标本的检出率却要低很多。     

TaqMan探针荧光RT-PCR检测狂犬病病毒

根据GenBank已公布的狂犬病病毒(rabies virus,RV)核蛋白(N)基因序列设计并合成一对特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的荧光RT-PCR检测狂犬病病毒方法。对狂犬病疫苗提取核酸后进行RT-PCR扩增,将目的条带切胶回收,克隆测序,重组质粒作为标准阳性对照。对建立的TaqMan探针荧光RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验。结果显示,该方法可以达到10拷贝/μL的灵敏度,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒和犬副流感病毒分开,方法重复性好,稳定可靠。     

狂犬病病毒G蛋白的克隆表达及其抗体胶体金检测试纸条的研制

狂犬病(Rabies)是一种由狂犬病病毒(RV)引起的急性人兽共患传染病,一旦发病,死亡率几乎为100％.为快速检测狂犬病病毒IgG抗体,本研究首先克隆表达并纯化狂犬病病毒G蛋白,应用G蛋白作为抗原,G蛋白单克隆抗体制备C线,鼠抗犬IgG和鼠抗猫IgG标记T线,经条件优化后,建立了一种能够用于快速检测动物狂犬病病毒血清...     

湖南省家犬感染狂犬病病毒状况调查研究

为了解湖南省家犬狂犬病病毒(RV)的感染状况,为防制狂犬病提供科学依据.本研究于2005年11月～2008年3月选择在全省18个县(市)收集市售家犬的脑组织标本,采用直接免疫荧光法(DFA)初筛检测RV抗原和套式RT-PCR方法检测RV特异性核酸进行确证.共检测家犬脑1 613份,结果表明家犬RV感染率为4.15%.其中,雄性、雌性家犬RV感染率为4.68%和2.85%(p>0.05);大型、中型家犬RV感染率为4.57%和3.02%(p>0.05);成年犬、幼犬RV感染率为4.95%和1.57%(p<0.01);有、无狂犬疫苗免疫史的家犬RV感染率分别为1.29%、4.63%(p<0.05);春、夏、秋、冬季家犬RV感染率为9.56%、7.53%、2.31%、3.23%(p<0.01).2005年～2006年、2007年～2008年各监测点家犬RV感染率分别与2006年、2007年人狂犬病发病率呈正相关(p<0.05).检测结果表明湖南省家犬RV感染率较高(4.15%),存在地区、季节差异,而且家犬RV感染率与人狂犬病发病率呈正相关.     

2010—2011年广西狂犬病监测及免疫效果分析

为了解当前广西家犬狂犬病流行情况,评价防控效果,采集免疫过狂犬病疫苗的犬血清2 972份进行抗体检测。结果:抗体阳性的有2 620份,阳性率为88.16%。另外,采集交易市场或屠宰场表观健康犬的脑组织样品800份,疑似发病犬脑组织样品25份,分别通过RT-PCR方法和小鼠接种试验检测狂犬病病原,结果表观健康犬有11份样品呈阳性,阳性率1.38%,疑似狂犬病犬有5份样品呈阳性,阳性率20%。实施狂犬病疫苗免疫后,广西家犬总体免疫抗体水平良好,表观健康犬携带狂犬病病毒比率显著降低。提示应继续加强农村犬的免疫和管理,有效降低狂犬病的发生。     

狂犬病快速诊断方法的建立和应用

根据狂犬病病毒核蛋白基因保守区序列设计1对引物，建立了用于狂犬病病毒特异性核酸检测的RT-PCR技术。该技术可从狂犬病病毒CVS株、8202株和SRV9株的含毒细胞培养物及鼠脑组织中，扩增出443bp的核酸片段，检出核酸的敏感性约为3pg。对30份不同种动物脑组织的检测结果与小鼠脑内接种试验(MIT)的测定结果完全吻合，但前者可在3h内直接对组织匀浆进行诊断，具有快速、简便和敏感的优点。     

兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的临床应用效果评价

为进一步评价兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的安全性和免疫效力,本研究通过受试犬免疫后的临床观察、荧光抗体病毒中和试验(FAVN)检测血清中和抗体(NA)及攻毒保护性试验等方法进行检测。结果表明:试验犬接种该疫苗中试产品后无严重不良反应;5个批次的中试疫苗产品免疫效果稳定;免后第7 d,抗体阳转率97.5%,90%的免疫犬抗体达到有效保护水平;免后第360 d试验组的群体有效保护率开始下降,为90.5%;免后第390 d仍有83%的试验犬达到有效保护水平;采用狂犬病病毒(RV)街毒CNX8511株攻击免后第390 d随机抽样的30条免疫犬,其保护率达100%。结果证明,唐山怡安生物工程有限公司生产的兽用狂犬病灭活疫苗(CTN-1株)的临床免疫效力不低于同类进口疫苗,可以用于我国动物狂犬病的预防和控制。     

重庆市2009-2010年动物狂犬病检测及流行病学调查

用RT-PCR方法检测重庆地区2009—2010年发生的36份临床疑似狂犬病脑组织样品和969份临床健康犬唾液拭子样品,并利用流行病学调查方法对阳性样品进行疫情溯源。结果从20份临床疑似狂犬病样品中检测出狂犬病毒,流行病学调查显示未免疫的流浪犬是主要的传染源,而农民(55.95%)和儿童(30.95%)是最容易受到狂犬攻击的人群。从969份临床健康犬唾液拭子和犬脑组织样品中未检出阳性样品。因此重庆地区狂犬病防控应加强对犬的免疫及流浪犬的管理,实行强制性疫苗免疫,加强对儿童和农民的狂犬病知识宣传和安全防护工作。     

梅花鹿狂犬病的病原学研究

应用鼠脑传代,从具有神经症状和后躯麻痹的鹿尸脑组织分离获得5株弹状病毒。对其中一株——8202株,从形态学、生物学和理化学等方面进行了鉴定。应用弹状病毒料中狂犬病海和狂犬相关病毒等的抗血清或免疫腹水,在小鼠体内进行交叉中和试验,证明鹿毒8202株同狂犬病毒固定毒(北京株)有密切的抗原联系。经WHO狂犬病咨询和研究协作中心应用42个单克隆抗体,以间接荧光抗体试验检测鼠脑压印片,证明该株病毒的核衣壳抗原结构与大多数陆栖哺乳动物狂犬病毒相同,但有别于欧洲狐狸的狂犬病毒;用40个抗糖蛋白单克隆抗体,通过血清中和试验,证明8202株同欧洲狐狸毒株很相似。将该毒复旧鹿体,并接种犬及其他动物,发现其对鹿的毒力很强,而对犬及其他家畜毒力较弱,甚至没有毒力。结论认为,鹿毒8202株是狂犬病毒适应于鹿体的变异株。