快速检测痕量汞的光电型传感方法的建立

为建立一种检测痕量汞的光电型传感方法,利用汞抑制葡萄糖氧化酶体系(即葡萄糖氧化酶—辣根过氧化物酶-葡萄糖-邻联甲苯胺—偶联反应体系)生成蓝色产物的原理,将Glu与OT固定化制成试纸条,插入自制的便携式光电型传感器,绘制出汞离子溶液浓度与对应的反射光强度值的标准曲线。实验结果表明,当汞溶液的浓度范围分别处于0.010～0.050mmoL/L时,光反射强度值与汞浓度皆呈现良好线性关系。经优化检测条件,汞溶液与双酶孵育的最佳时间为1h。该方法测定汞的检出限为1.0×10-4 mmol/L,检测时间分别为5min。由此可知,此方法检测汞快速、简便,有望实现对样品中汞含量的现场检测。     

盐酸克伦特罗检测方法研究进展

综述了盐酸克伦特罗的化学性质、危害、检测方法以及检测技术发展趋势.综合考虑各方法的优缺点,指出现在最常用的两种检测方法是气相色谱-质谱法(GC-MS)和酶联免疫分析技术(EIA);生物传感器技术和生物芯片是盐酸克伦特罗检测技术的发展趋势.     

化学发光酶免疫法检测盐酸克伦特罗残留

优化了化学发光酶免疫法(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)检测盐酸克伦特罗(clenbuterol)的方法.论文对检测方法的反应时间、温度、缓冲体系的pH值、离子强度、Tween-20的浓度等参数进行了优化,该方法的线性检测范围可达到0.04～42.5 μg·L-4,IC50值为1.46 μg·L-1,理论检测限为0.0014 μg·L-1.批内批间变异系数均小于10%,回收率在95%～110%之间,同时有较高的特异性.优化后的检测方法完全符合盐酸克伦特罗残留检测的要求.     

酶联免疫法检测盐酸克伦特罗的试验报告

盐酸克伦特罗酶联免疫反应测试盒适用于尿样、组织和饲料等样品中克伦特罗残留的定量检测。克伦特罗作为一种主要的β-兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中,用以提高肌肉和脂肪的比例并加快生长速度。由于克伦特罗可作为肌肉舒缓剂用于人类疾病治疗,在畜禽中过量残留可能会对消费者造成危害,为此,被禁止在食品生产中应用。根据美国FDA和WHO规定,在肌肉和脂肪中克伦特罗的含量不能超过0.2ng/g,在肝脏和肾脏中其含量不能超过0.6ng/g。与传统的HPLC或GC-MS方法相比,酶联免疫方法具有操作简便、灵敏度高、成本低的优点。盐酸克伦特罗酶朕免疫反应测试盒为养殖者和政府监督管理部门提供了更准确快速检测克伦特罗残留的方法,该试剂盒的特点包括4方面,第一,该试剂盒的提取方法能达到75%～95%以上的回收率,可以不需用有机溶剂并在10～30min之内完成提取过程。第二,高灵敏度(0.05ng/g);低检测下限(肉类/脂肪0.025ng/g,尿液0.05ng/ml,饲料0.2μg/kg)。第三,检测过程只需不到2h。第四,高重复性。     

竞争性抑制酶联反应在量热式农残生物传感器中的试验研究

以量热式农残生物传感器为研究对象,借鉴免疫分析方法,进行竞争性抑制酶联反应在量热式农残生物传感器中的试验研究。结果表明,在甲胺磷浓度为0~0.004 mg.kg-1范围内,甲胺磷含量和放热量之间的线性较好,竞争性抑制酶联反应分析法测农药残留的最低检测限为0.0011 mg.kg-1,每次测定时间为20 min。     

γ辐照降解肉制品中克伦特罗的初步研究

采用酶联免疫法(ELISA)检测肉制品中瘦肉精--克伦特罗γ射线辐照降解效应,结果表明:辐照可以显著降低肉制品中克伦特罗含量,降解率随辐照剂量增大而提高,当辐照剂量为3.4 kGy时,肉制品中克伦特罗的降解率在80%以上.     

克伦特罗多克隆抗体的制备与鉴定

以重氮法合成克伦特罗（CL）免疫抗原,以戊二醛法合成包被抗原。免疫新西兰兔制备克伦特罗抗体,建立了克伦特罗酶联免疫吸附分析法（ELISA）,标准曲线具有良好的线性关系,该抗体与沙丁胺醇、特布他林的交叉反应率分别为83.44%和80.23%。表明该抗体可以用于对β-兴奋剂类药物进行多残留快速检测。     

葡萄糖氧化酶抑制法检测食品中镉、锡、铅的残留

目前检测重金属使用的国标方法灵敏度高、特异性强,但存在仪器费用高等缺陷。为了建立快速、简便、只要比色即可测定镉、锡、铅的酶抑制法,选择葡萄糖氧化酶(GOD)—辣根过氧化物酶(POD)催化体系,优化了试验条件;利用金属离子对酶活的抑制作用,测定了重金属离子镉、锡、铅对葡萄糖氧化酶活力的影响。所测镉、锡、铅检出限分别为1.3,0.4,1.4μg/mL。研究了检测实际样品中镉、锡、铅的方法,加标回收率分别为92.7%~105.7%;标准差≤1.0%。     

动物性食品中4种药物残留的检测

为了解北京地区动物性食品中兽药残留情况,随机抽查北京京郊几家猪场、鸡场和商场,检测4种药物(盐酸克伦特罗、氯霉素、磺胺类、氯羟吡啶)的残留情况。盐酸克伦特罗检测采用酶联免疫法(ELISA),取206份猪肝、240份猪尿测定盐酸克伦特罗残留,阳性数分别为19、23,阳性率分别为9.22％、9.58％;氯霉素检测采用酶联免疫法,取150份鸡肝测定氯霉素残留,阳性数为15,阳性率为10.00％。磺胺类药物和氨羟吡啶检测采用高效液相色谱法(HPLC),取50份猪肝、50份鸡肝测定磺胺类药物残留,结果全为阴性;取100份鸡肝测定氯羟吡啶残留,结果全为阴性。检测结果不容乐观。     

油包水(W/O)型微乳液中m-6菌木质素降解酶的研究

【目的】研究W/O十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)微乳液体系和HAc-NaAc缓冲液体系中,m-6菌株固态发酵后产生的胞外木质素降解酶漆酶(Lac)、木质素过氧化物酶(Lip)、锰过氧化物酶(Mnp)酶促反应的最佳反应条件。【方法】通过分别对Lip(以2,2′-连氮-二(3-乙苯基并噻唑-磺酸)为底物)、Mnp(以MnSO4为底物)和Lac(以藜芦醇为底物)3种木质素降解酶在W/O型CTAB微乳液体系和HAc-NaAc缓冲液体系中的酶活测定,研究不同温度、pH和底物浓度对酶促反应的影响,探讨最佳反应条件,并比较两种反应体系下的酶活。【结果】在W/O型CTAB微乳液体系中,Lip、Mnp和Lac 3种酶酶促反应的最佳条件为:温度37℃、pH分别为4.5,4.5和3.5;在HAc-NaAc缓冲液体系中,3种酶酶促反应的最佳反应条件为:温度37℃,pH分别为5.0,5.0和4.0;在两种反应体系中的最佳反应底物浓度相同,即藜芦醇、MnSO4、2,2′-连氮-二(3-乙苯基并噻唑-磺酸)浓度分别为0.053,0.116,0.492 mmol/L。在W/O型CTAB微乳液中,Lip和Mnp酶活比其在HAc-NaAc缓冲液体系中分别提高了81.45%和36.75%,但Lac酶活却减少了2.914倍。【结论】得到了Lac、Lip和Mnp酶3种木质素降解酶在W/O型CTAB微乳液体系和HAc-NaAc缓冲液体系中的最佳反应条件,为木质纤维素的生物降解奠定了基础。     

紫外分光光度法检测肉制品中盐酸克伦特罗残留量

目的建立一种快速检测肉制品中盐酸克伦特罗残留量的方法。方法 -环糊精与盐酸克伦特罗结合后用紫外分光光度法测定吸光度值并建立标准曲线,检测样品中盐酸克伦特罗含量。结果吸光度值强度与盐酸克伦特罗浓度在358 nm波长处呈线性关系。当包合体系p H 7.0、温度30℃、静置30 min时,检出限为0.015 mg/L,线性范围为0.05~0.15 mg/L,线性相关系数r=0.9995,精密度为2.20%~6.04%,回收率为95.0%~106.0%。结论紫外分光光度法是检测肉制品中盐酸克伦特罗残留量的简单、快速、可靠方法。     

Cladosporium tianshanense SL19来源的新型葡萄糖氧化酶的基因克隆及性质研究

葡萄糖氧化酶(GOX)已广泛应用于各种工业生产中。目前,除了曲霉和青霉属来源的GOX外,鲜有新型GOX被报道。经基因克隆和序列同源性分析,Cladosporium tianshanense SL19来源的葡萄糖氧化酶基因CtgoxB是一个新基因,该基因全长1 707 bp,无内含子,编码568个氨基酸,N-端第1～16个氨基酸为信号肽,与已报道的GOX序列最高一致性为35%。CtgoxB在毕赤酵母中实现异源表达,但重组蛋白CtGOXB未检测到GOX活性。通过序列和结构分析,同源重组构建的突变体CtGOXB-C1最终恢复了GOX活性。经SDS-PAGE鉴定,重组蛋白CtGOXB-C1表观分子量约为120 kDa,大于理论分子量(61.6 kDa)。经酶学性质测定,CtGOXB-C1比活为123.8 U/mg,在pH 8.0和30℃条件下具有最高的酶活,且在10℃时依然维持65%的酶活,具有嗜低温特性。CtGOXB-C1在pH 6.0～9.0条件下保温1 h后,剩余酶活维持在80%以上,可以在中碱性条件下维持较高酶活,并且对表面活性剂SDS具有较强的抗性。这些性质表明CtGOXB-C1在水产饲料和洗涤剂等行业中具有良好的应用潜力。     

YB菌株生化需氧量的测定及对河豚毒素毒性的响应

[目的]了解自有YB菌株在BOD生物传感器及河豚毒素毒性传感器中的作用。[方法]以YB菌株作为响应菌株,采用夹层膜法制作固定化微生物膜,组装成微生物传感器并测试其性能。[结果]YB菌株在33℃,pH为7.2的条件下对BOD响应良好,在此条件下静态法测得传感器标准曲线为y=0.061 2x-0.001 3,线性相关系数为0.995;动态法测得传感器标准曲线为y=0.072 2x-0.031 9,线性相关系数为0.996。同时,YB菌株对河豚毒素基本没有响应。[结论]自有YB菌株可以作为BOD微生物传感器的敏感菌,但不能作为河豚毒素毒性传感器测试菌株。     

黑曲霉A9葡萄糖氧化酶的酶学性质研究

为研究葡萄糖氧化酶的酶学性质,对黑曲霉A9发酵液提取纯化,酶蛋白达到电泳纯,然后对纯酶进行酶学性质研究。结果表明:葡萄糖氧化酶的分子量为138 200 Da,糖基化程度为2.67%,最适pH为6.7,最适温度为30℃,该酶的pH稳定范围较宽,而且热稳定性很好,Ag+、Hg2+、亚硫酸氢钠对酶有强烈的抑制作用,该酶对葡萄糖的Km值为35.74 mmol/L。该研究表明,黑曲霉葡萄糖氧化酶具有潜在的应用价值,最适合应用于食品、医药及生物等领域。     

基于无线传感器网络和虚拟仪器的农残检测系统的建立

果蔬中的农药残留问题一直备受关注.为了实现对果蔬中农药残留的快速检测,基于酶抑制法设计了一种农药残留快速检测系统.采用光频传感器采集农药残留量信息,通过基于nRF24L01的无线传感器网络将其发送到上位机,最后在上位机利用虚拟仪器语言LabVIEW开发一套集数据采集、存储、回放和分析于一体的虚拟检测系统.利用该系统对甲...     

人双埃克病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种能快速、简便、灵敏地检测人双埃克病毒(Human Parechovirus,HPeV)SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank发表的人双埃克病毒8个基因型的参考毒株全序列,针对5′端非编码区保守序列设计1对特异性引物,通过RT-PCR扩增此靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,经过优化反应条件,建立标准曲线和融解曲线,对其灵敏性、特异性和重复性进行评价;检测临床粪便样品共156份,并与常规套式RT-PCR检测结果进行比较。结果显示,建立的标准曲线Ct值与模板浓度呈现良好的线性关系(r2=0.999),融解曲线特异,检测灵敏度可达60拷贝/μL,比常规PCR检测方法高100倍,重复性变异系数小(<1%),能特异地检测HPeV。临床样本检测结果也表明该法(检出30份)灵敏度高于套式RT-PCR(检出21份)。实验结果证明建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,有望成为HPeVs的分子诊断、流行病学调查等相关研究的工具。     

光学表面等离子共振测定盐酸克伦特罗的试验研究

为了实现高灵敏度定量检测盐酸克伦特罗,提出了一种新颖的、无标记、快速的内嵌TSPR1K23生物传感器的光学表面等离子共振(Surface plasmon resonance,SPR)盐酸克伦特罗测定方法,并通过试验验证了光学表面等离子共振生物测定装置的性能.光学表面等离子共振盐酸克伦特罗测定装置由集成光学SPR生物传感器、微流通池、便捷更换芯片的夹具、触电屏,USB接口板及光电转换电路板组成.在光学SPR芯片金膜表面固定盐酸克伦特罗抗原,在标准样品中(盐酸克伦特罗抗体质量浓度33.75 mg·L-1)分别添加0,10,20,40 mg·L-1的盐酸克伦特罗抗原,采用竞争免疫反应方法建立的盐酸克伦特罗测定标准曲线,相关系数0.997,相对标准偏差6.5%.     

无试剂型葡萄糖生物传感器的研制

利用制备的羧基-β-环糊精衍生物包络二茂铁得到了羧基-β-环糊精二茂铁包络物作为新型媒介体.采用廉价易得的蛋清代替价格较高的牛血清白蛋白,用蛋清戊二醛交联媒介体、酶,成功制得了电流型葡萄糖传感器.由于羧基-β-环糊精提供的疏水空腔将二茂铁包络,减少了二茂铁的流失,另外亲水性的外壁为酶提供的良好的外环境保证了酶的活性,故该传感器具有良好的稳定性,对葡萄糖表现出良好的响应,重现性也较好,且响应时间短.检测线性范围为:1×10~(-5)～2.68×10~(-3)mol·L~(-1),相关系数为0.9994,检测限为1.2×10~(-6)mol·L~(-1)(S/N=3).