甘草野生种群遗传多样性的AFLP分析

 【目的】甘草具有重要的药用、工业和生态价值,目前处于濒危状态,进行遗传多样性研究可以为甘草资源的保护和利用奠定基础。【方法】利用AFLP分子标记对来自中国甘草主产区的16个野生种群共320个单株进行遗传多样性研究。【结果】（1）利用15对AFLP引物共扩增出759条谱带,其中多态性谱带527条,多态性条带百分率为69.43％;（2）Nei’基因多样性指数为0.13～0.19,种群总体多样性指数为0.25;Shannon多态性信息指数的变异范围在0.19～0.28,总体为0.39;宁夏地区甘草种群遗传多样性水平最高,甘肃酒泉种群的遗传多样性水平最低。（3）AMOVA分析表明甘草种群间的遗传变异占总变异的18.64％,种群内变异占67.16％。利用UPGMA聚类可将供试16个群体划分为3类,聚类结果表现出明显的地域性。【结论】该研究明确了中国野生甘草遗传多样性处于中等偏下水平,种群内广泛的变异能够为野生资源保护和良种选育提供理论依据。     

泥东风螺4个群体遗传多样性的AFLP分析

利用AFLP分子标记方法对4个群体(福建连江野生、连江养殖、长乐养殖、广西野生)的泥东风螺进行遗传多样性分析。结果:用11对引物共扩增出908条有效片段,其中684条(75.33%)为多态性片段,224条片段(24.67%)为4个群体所共有;遗传多样性指数分析显示,4个群体的有效等位基因数、平均等位基因数、Shannon’s多样性指数和平均杂合度依次为1.500 6、1.974 0、0.464 7、0.303 4,Nei’s遗传距离为0.128 4~0.180 6,遗传相似系数为0.834 8~0.879 5,表明4个泥东风螺群体具有较为丰富的遗传多样性,且群体间具有较高的遗传相似性;分子方差分析(AMOVA)结果显示,4个群体中83.49%的变异来源于群体内,14.65%的变异来源于地区间,而群体间的遗传变异仅为1.86%,且4个群体间的遗传分化(GST)为0.195 4,基因流(NM)为2.058 6,说明群体间的基因交流水平较低;UPGMA聚类分析和主坐标(PCA)分析结果表明,长乐养殖群体和广西野生群体遗传距离最近,而连江野生群体与其他3个群体的遗传距离最远。     

辣椒细胞质雄性不育恢复基因的AFLP标记

采用AFLP技术对辣椒细胞质雄性不育系21A及其相应的恢复系湘紫基因组DNA进行多态性比较,筛选了64对AFLP选择性引物PstⅠ-NNN+MseⅠ-NNN组合,有58对引物组合在两系间扩增出5156条带,多态性位点为4个,主要表现为条带数目、条带位置和条带强弱的差异。其中在恢复系材料中仅有3个多态性片断,找到了辣椒细胞质雄性不育恢复系湘紫基因组DNA特异的AFLP片段ACA/CGC300、AGT/GGT375和AGC/CGC380,并对这些特异片段的来源及其在细胞质雄性不育恢复系中的作用进行了讨论。     

山核桃AFLP实验技术体系的建立

以充分展开的山核桃Carya cathayensis嫩叶为材料、利用改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法与CTAB裂解一硅珠吸附法提取山核桃总DNA,对适合于山核桃叶片的AFLP（扩增片段长度多态性）分析体系进行了摸索。结果表明：①改良CTAB法适用于从山核桃叶中提取高质量的DNA,提取的DNA可用于AFLP的分析;②采用EcoR I/Mse I 酶切组合,酶切连接一步法与两步法的效果没有明显的差异,但一步法操作更为简便;③适合于山核桃叶AFLP分析的引物组合为E-ACT＋M-CAT,E-ACT＋M-CTG,E-ACG＋M-CAT,E-ACG＋M-CTG。扩增产物经60g·L^-1变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行银染,条带信号强度一致性好,条带分布均匀、清晰,分辨率较高。     

马蔺种质资源AFLP标记遗传多样性分析

利用AFLP技术,选择EcoRⅠ/MesⅠ这一酶切组合,应用18对EcoRⅠ 3/MesⅠ 3引物组合进行选择性扩增,检测10个马蔺种群的基因组DNA多态性.共扩增出1 164个遗传位点,其中752个多态位点,多态率为65.11%.并通过Jaccard的方法将电泳带矩阵转化为遗传相似性系数矩阵,进行UPGMA聚类分析.结果表明,当取阈值为0.74时,可以将10个种群分为4大类群.长春马蔺与其他种源的亲缘关系较远,单独聚为一类;宁夏固原、甘肃民勤、武威、北京、山东泰山5个种群亲缘关系较近,聚为一类;内蒙古太仆寺和西乌旗、新疆乌鲁木齐聚为一类;河北涿洲马蔺种群单独聚为一类.马蔺群体间的亲缘关系远近与其所处的地理位置有很大的关系,尤其与纬度因子的关系十分密切.     

药食昆虫九香虫AFLP遗传多样性研究

[目的]对广州鼎湖山和罗浮山药食昆虫九香虫（Aspongopus chinensis Dallas）种群进行遗传多样性分析。[方法]利用扩增片段长度多态性（AFLP）标记,建立九香虫AFLP指纹图谱,分析其种群遗传多样性参数。[结果]4个引物组合共揭示了362个位点,其中293个位点具有多态性,多态性位点所占比例为80.94%。种群Nei＇s基因多样性指数平均为0.2467,Shannon多态性信息指数为0.3687,种群间基因分化系数GST为0.1701,种群每代迁移数Nm为3.157。[结论]AFLP标记具有很高的多态性检测效率,适合用于分析九香虫种群遗传多样性;九香虫种群内的遗传变异程度较高,种群具有丰富的DNA遗传多样性水平。     

68份国外甘蔗种质资源遗传多样性的AFLP分析

采用10对扩增片段长度多态性标记(AFLP)引物,对近年来从澳大利亚、法国、美国和菲律宾引进,并保存于国家甘蔗种质资源圃的68份甘蔗种质资源进行遗传多样性研究。结果表明：68份种质间的遗传相似性系数较高, 为0.497 5～0.887 9,平均为0.761 2,表明大部分种质之间亲缘关系相近,遗传基础相似,遗传多样性并不丰富;各类种质间的平均遗传相似性系数以VMC型(菲律宾)最大,为0.825,Q型(澳大利亚)和CP型(美国)次之,分别为0.802和0.752,FR型(法国)最小,为0.685;在相似性系数0.676处可将68份种质分为5组,A组含CP67–412,B组含FR94–515,C组含FR96–626,D组含FR94–126,其余64份种质构成E组,占全部种质数的94.1%,A、B、C、D组4份种质与E组种质相比,亲缘关系较远,显示了独特的遗传组成;来自法国的种质资源具有较高的分散度,包含了较多的遗传信息。     

白菜Ogura细胞质雄性不育基因组的AFLP分析

采用AFLP( Amplified fragment length polymorphism)技术对白菜(Brassica rapa ssp.chinensis)细胞质雄性不育系Y3611A及其相应的保持系Y3611B基因组DNA进行多态性比较,64对引物中有61对引物组合在两系间扩增出5 185条带,其中有3对引物在不育系Y3611A中扩增到3个特异片段,对特异片段进行克隆、测序,其序列全长分别为187 bp、205 bp和237 bp,将其分别命名为CMS187、CMS205和CMS237.用BLAST进行同源性分析,发现它们分别与大白菜核基因组部分序列、拟南芥衰老相关蛋白mRNA序列及拟南芥线粒体部分序列有较高的同源性.     

基于SRAP分子标记的刨花润楠遗传多样性分析

采用相关序列扩增多态性分子标记方法,对7个省份23个种源的刨花润楠进行遗传多样性分析。结果表明:1)12对引物组合共扩增出157条带,其中115条为多态性条带,占总条带数的73.24%;2)12对引物的多态性指数介于0.406～0.502,平均值为0.476;3)通过分子方差分析发现,刨花润楠种源内差异占总差异的72.19%,种源间差异占总差异的27.81%,种源内差异为刨花润楠差异的主要来源;4)基于遗传距离的聚类分析显示,23个种源的刨花润楠可分为4类:第1类为湖南、广东、广西的所有参试种源和江西多数种源,第2类为浙江参试的3个种源,第3类为江西婺源和安徽黄山2个种源,第4类为福建参试的4个种源,分类结果表现出明显的地理趋势。本研究结果为刨花润楠种质资源的保存及良种选育提供了一定理论基础。      

利用AFLP技术评价荔枝种质资源的遗传多样性

荔枝是中国、印度和东南亚地区重要的商业栽培果树。由于荔枝的广东本地品种名和汉语品种名译成的英译名各不相同,导致荔枝品种命名混乱,1个品种经常有许多品种名。为了更准确地评价荔枝品种间的亲缘关系,人们现已不从荔枝品种的表型性状进行分类,而是从其分子特征进行分类。美     

咸宁部分桂花品种亲缘关系的SRAP分析

利用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记,对咸宁地区的32个桂花(Osmanthus fragrans)品种进行了亲缘关系研究.15对引物共扩增出210个谱带,其中182个为多态性谱带,多态性比率达86.67％;其中银桂品种群的Shannon's信息指数(0.339 3)和遗传多样性指数(0.2164)最高.遗传多样性分析表明供试桂花品种群间的遗传分化系数为57.89％,说明品种群间遗传分化高.根据扩增结果进行聚类分析,在遗传相似系数0.644水平上可将32个桂花品种分为5个类群.供试品种的地理分布与其分类学地位具一定的相关性.     

桂花花冠裂片表面的超微结构观察

应用扫描电镜比较观察了早银桂Osmanthus fragrans‘Zaoyingui’,晚银桂Osmanthusfragrans‘Wanyingui’,早黄Osmanthus fragrans‘Zaohuang’,金桂Osmanthus fragrans‘Jingui’,硬叶丹桂Osmanthus fragrans‘Yingyedangui’,败育丹桂Osmanthus fragrans‘Baiyudangui’,四季桂Osmanthus fragrans‘Sijigui’,大叶佛顶珠Osmanthus fragrans‘Dayefodingzhu’等8个桂花品种花冠裂片的超微结构。结果表明:桂花花冠裂片上表皮细胞表面布满规则的突起条棱,气孔散乱地分布在花冠裂片基部。不同品种花冠裂片上表皮细胞的形态结构差异明显,主要表现在细胞形态大小和表面突起条棱疏密程度的差异。这些差异与不同桂花品种散发香气的浓淡有一定的相关性。图3参11     

杭州市桂花品种的分类整理

桂花Osmanthus fragrans为杭州市市花,栽培历史悠久。杭州桂花数量之多,栽培面积之大,品种之优,也已在全国闻名。对杭州传统栽培的桂花品种进行了系统的研究,并对四季桂的分类地位问题进行了讨论,在此基础上对杭州的桂花品种进行了分类和整理。杭州市传统栽培的桂花可分成6个种系,常见栽培的主要有宁波木犀Osmanthus cooperi,树Osmanthus heterophyllus和桂花等3大种系,其中树种系有3个品种,桂花种系可分为4个品种群,有59个品种(另有9个品种引入栽培),其中在杭州市各种传统资料中已有记载的桂花品种仅15个,新记录品种38个,新确定(新命名)品种6个。图1参14     

桂花单性结实现象的初步探讨

对桂花单性结实现象进行了研究。结果表明：桂花某丹桂品种无籽果实的形成是他动型单性结实的结果;具单性结实性丹桂的花粉生活力较低,且不能形成功能性花粉管,但雌性器官具有育性;在果实发育早期子房内的4个胚珠同时膨大,可能是引起单性结实的胚胎学因子之一。     

桂花种子休眠和萌发的初步研究

为了解桂花Osmanthus fragrans种子的休眠原因以及掌握解除休眠的最佳方法,对紫梗籽银桂‘Zigeng Ziyin’种子种皮和种实的甲醇浸提液的生物测定和不同质量浓度赤霉素（GA₃）处理后种子发芽率进行测定。结果表明：紫梗籽银桂种子的种皮和胚乳中均含有抑制白菜Brassica campestris籽萌发的物质,抑制作用随质量浓度增大而增加。综合前期研究结果,认为桂花种子的休眠不是外源休眠和综合休眠,而是由于由抑制物质引起的内源休眠。赤霉素处理结合低温层积可有效解除种子的休眠,其中以1 000 mg·L^－1赤霉素浸种,低温层积75 d的发芽率最高。图4参15     

桂花在园林中的应用

桂花是优良的园林绿化树种。通过介绍桂花的生物学特性、生态习性及观赏特征,总结了其丰富的文化内涵,探讨了桂花的应用形式、配植方式及桂花与造园要素的配置,为城市园林中桂花的应用提供参考。     

4个桂花品种叶片挥发物成分及其对空气微生物的影响

 采用动态顶空气体循环吸附法和热脱附-气相色谱-质谱（TDS-GC-MS）联用技术,分析了近自然状态下金桂Osmanthus fragrans ‘Thunbergii’,银桂O. fragrans ‘Odoratus’,丹桂O. fragrans ‘Aurantiacus’和四季桂O. fragrans ‘Semperflorens’叶片挥发物（VOCs）的组分和含量;同时采用自然沉降法,调查了4个桂花品种林地空气中微生物（细菌、真菌和放线菌）的数量。结果表明：金桂叶片VOCs中主要成分为（Z）-乙酸-3-己烯酯、己醛、辛醛、壬醛、癸醛、6-甲基-5-庚烯-2-酮和3-己烯醇;四季桂主要成分为（Z）-乙酸-3-己烯酯、己醛、苯甲醛、壬醛、癸醛、6-甲基-5-庚烯-2-酮和壬烷;银桂和丹桂主要成分为（Z）-乙酸-3-己烯酯、己醛、辛醛、壬醛、癸醛、壬烯、6-甲基-5-庚烯-2-酮和3-己烯醇。金桂林地中细菌数量在3,5,7,9和11月比对照分别降低46.6%,48.3%,67.6%,34.6%和26.0%（P＜0.01）,其他3个桂花品种林地中细菌数量在不同月份与对照相比均有不同程度的降低;金桂林在3,7和9月对真菌抑制作用极显著（P＜0.01）,比对照分别降低33.5%,38.8%和34.1%;4个桂花品种林对放线菌也具有明显的抑制作用。上述结果说明：4个桂花品种树木可以降低林地空气中微生物的数量,对改善空气质量具有显著的作用。图3表1参18     

桂花抗寒性的研究

分别将3个桂花品种的叶片放在-10、-12、-14℃的温度条件下,持续处理时间分别为2、4和6 h。测定其相对电导率的大小和丙二醛的含量变化。结果表明:温度-10℃延续4 h和温度-14℃延续2 h,电导率增大到最大值,叶肉细胞膜选择透性完全被破坏,叶片明显受害;从而可知温度-10℃为受害临界温度。丙二醛含量变化不明显,说明低温下氧化还原反应较微弱。     

不同起源与方位下桂花的构型差异

通过对天然和人工种植桂花的构型进行比较统计分析,结果表明:不同起源、不同环境下的桂花具有较大差异。人工种植桂花不仅在总体分枝率、逐步分枝率(SBR1∶2、SBR2∶3)、一级枝长度、枝径比2∶1、枝倾角、叶片长度宽度、叶片面积等与天然次生桂花个体上存在显著差异,而且在东、西、南、北4个方位的绝大部分也显著差异于天然次生桂花,即人工种植桂花与天然次生桂花之间的构型差异在个体水平和局部水平存在着相同的趋势。     

中国野生桂花群落研究现状

通过对野生桂花(Osmanthus fragrans Lour.)群落文献的分析,从分布、生境、结构、动态几个方面综述了野生桂花的一些特征。