胞质内精子注射及其影响因素的研究

作者综述了胞质内精子注射(ICSI)技术的原理及其在人及其他动物上的研究应用，阐述卵子、精子操作技术等对ICSI结局的影响，指出目前存在的问题和应用前景。     

影响ICSI受精率的相关因素

本文简要地综述了ICSI技术的影响因素,包括精子状态．卵子状态、受精激活及操作技术等方面的研究,为进一步提高ICSI的技术水平奠定基础。     

绵羊精子胞质内显微受精的影响因素分析

本文对影响绵羊精子胞质内显微受精的因素进行分析。结果如下:1、操作液中PVP浓度分别为8%和5%时,卵裂率为(83.6±2.98)%和(72.0±2.53)%,囊胚发育率为(30.5±1.95)%和(16.0±1.33)%,均差异显著(P0.05)。2、操作液中添加CB和不添加CB,卵裂率为(77.5±3.17)%和(74.7±2.09)%,没有显著影响(P0.05),但添加CB的囊胚发育率(29.2±2.81)%却显著高于对照组(14.3±1.99)%(P0.05)。3、在培养液(IVC)中添加VEGF和不添加VEGF,卵裂率为(78.7±3.34)%和(83.9±1.95)%;囊胚发育率为(27.7±2.76)%和(23.6±1.29)%,差异不显著(P0.05)。4、在ICSI过程中恒温和室温条件下,卵裂率为(80.1±3.18)%和(90.6±3.02)%,差异显著(P0.05),囊胚发育率为(31.3±3.87)%和(28.2±3.34)%,没有显著影响(P0.05)。5、在4 h以前注射卵裂率分别为(84.7±3.62)%、(86.0±2.89)%、(80.6±3.04)%,没有显著差异(P0.05)。0～1 h注射的囊胚发育率(33.6±3.37)%,要显著高于1～2 h注射的(P0.05),并极显著高于3～4 h的(P0.01)。1～2 h与3～4 h注射的囊胚发育率分别为(18.3±2.52)%和(13.0±2.04)%,没有明显差异(P0.05)。     

影响精子胞质内显微受精的关键因素

精子胞质内显微受精(ICSI)在人方面已很成熟，但在啮齿类试验动物方面还有待进一步研究，作者就ICSI操作过程中的关键因素作一简要综述。     

影响猪卵母细胞胞质内单精子注射效果的因素

本试验探讨了成熟培养液中不同添加物、精子的处理方法及胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)胚胎激活方法3个方面,研究了影响猪卵母细胞胞质内单精子注射效果的因素。结果表明,在体外成熟液中添加30 ng/mL上表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)可以明显促进ICSI胚胎的后续发育(P＜0.05);精子的超声波处理和显微操作处理两种方法对ICSI受精卵发育的影响不明显(P＞0.05);电激活比较适合于ICSI胚胎的激活。     

影响山羊胞质内单精子注射(ICSI)效果的因素研究

从鲜精与冻精、激活方法以及气相条件3个方面,开展影响山羊卵母细胞质内单精子注射（ICSI）效果的因素研究。结果发现：冻精受精率显著高于鲜精（52.21%VS 26.44%,P〈0.05）;与离子霉素5 min＋6-DMAP 3 h联合激活相比,离子霉素单独处理15 min能相对安全、简捷地激活ICSI后的山羊卵母细胞;低氧（5%O2）气相条件下的囊胚率（19.59%）显著高于高氧（20%O2）气相条件下（7.81%）的囊胚率（P〈0.05）。     

精卵因素对母牛卵胞质内精子显微注射效果的影响

实验探讨了精卵因素对母牛卵母细胞质内精子显微注射效果的影响.结果表明:新鲜精液组和性控冻精组ICSI对卵母细胞存活率、卵裂率和囊胚率均无显著差异(P>0.05);采用A、B、C级精子穿刺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级卵母细胞时,穿刺卵受精率、卵裂率和囊胚率在三者之间无显著差异(P>0.05),总体效果A>B>C、Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ;D级精子穿刺Ⅱ级卵母细胞后的穿刺卵受精率显著低于Ⅰ级卵母细胞(P<0.05),卵裂率和囊胚率与Ⅰ级卵母细胞相比无显著差异(P>0.05),穿刺Ⅲ级卵母细胞后的穿刺受精率和囊胚率均显著低于Ⅰ级卵母细胞(P<0.05),受精卵的卵裂率与Ⅰ级卵母细胞相比则无显著差异(P>0.05).由此可见:采用流式细胞仪分离的性控冻精与新鲜精液相比,对ICSI后的受精率和囊胚率无显著影响;精子活动力和卵子质量对ICSI的效果均有一定程度影响,且随精子活动力的降低和卵母细胞质量的下降而逐渐显著.     

单精注射法生产转GFP基因猪胚胎的研究

卵胞质内单精子注射(ICSI)的出现为治疗人类男性不育提供了新的途径。作为一种家畜胚胎工程新技术，ICSI可以解决猪的多精子受精问题。本研究用冷冻/解冻的猪精子与GFP基因孵育后对猪IVM卵母细胞进行ICSI，通过对猪ICSI卵母细胞发育能力和基因表达效率的分析，初步研究以精子为载体的转基因与卵细胞质内单精注射相结合的技术(SMGT-ICSI)生产转基因猪胚胎的技术路线的可行性。用GFP基因转染的精子注射后化学激活的ICSI卵母细胞基因表达率显著高于电激活处理的ICSI卵母细胞的基因表达率。用精子头部注射的猪卵母细胞和用完整精子注射的猪卵母细胞总基因表达效率无显著差异(P>0.05)。结果表明，用冷冻/解冻后的猪精子或精子头部与外源DNA孵育后通过ICSI方法生产转基因胚胎是可行的。     

影响胞质内显微受精的因素

胞质内显微受精(ICSI)技术是20世纪80年代兴起的一项辅助受精技术,对育种和治疗男性不育有着重要的意义,文章对影响ICSI的因素和目前存在的问题及争议进行了系统的阐述。     

影响卵母细胞胞浆内单精子注射效率的精子相关因素

卵母细胞胞浆内单精子注射(ICSI)技术作为辅助受精的一种手段,自从出现以来,就显示出广泛的应用前景.ICSI将体外受精和胚胎的显微操作技术相结合,大大降低对精子质量的要求,在畜牧业生产实践和哺乳动物生殖生理的基础研究中都有着十分重要的意义.然而,ICSI过程中的每一个环节都可能影响到其效果,最主要和最根本的影响因素是精子和卵子本身的状态.论文就精子有关方面的因素,简要综述了精子顶体与核周鞘、细胞骨架与中心粒、DTT处理和卵母细胞激活因子(SOAF)等对ICSI的影响.     

间情期犬间母细胞体外受精的影响因素

试验对间情期犬卵母细胞体外受精的影响因素进行了系统研究。结果表明①以TALP液作为犬精子获能液，精子回收率(64±10.5)%、顶体反应率(41.5±4.1)%高于TCM199+20%FCS液。②用TCM199+20%FCS作为受精液，卵母细胞单精受精率(18.6%)、原核形成率(10.4%)，高于TALP受精液，而退化率低于TALP受精液(4.9%比19.7%，P＜0.01)。③犬精子与卵母细胞在受精液中共同孵育12h，单精受精率(23.5%)、原核形成率(12.7%)高于共同孵育8、16、20h，而多精受精率(15.7%)、退化率(3.9%)低于共同孵育16、20h。④犬精子为2×106个/mL时，单精受精率(26.0%)、原核形成率(14.6%)，高于0.5×106、1×106、3×106、5×106个/mL组。卵母细胞多精受精率和退化率随精子含量增加而增加。⑤肝素为29mg/L时,卵母细胞单精受精率(24.4%)、原核形成率(12.2%)高于0、10、20、40、50mg/L组。而犬精子获能2h后，顶体反应率和卵母细胞多精受精率随肝素质量浓度增加而增加。     

钙振荡在哺乳动物卵母细胞受精过程中的作用

哺乳动物的精子和卵母细胞由减数分裂产生,其遗传物质减半,功能高度特化。精卵结合后,染色体数恢复,获得发育的全能性,重启有丝分裂,开始个体的生长。受精时,精子引起卵母细胞内的钙离子（Ca²⁺）以一定的频率波动,称为钙振荡。Ca²⁺周期性的变化,驱动下游蛋白的活动,完成卵母细胞的激活。作者主要介绍了受精时钙振荡启动的机制,以及其持续时间、振幅、频率对哺乳动物卵母细胞正常受精的影响;同时,讨论了Ca²⁺在卵母细胞内外运输的通道和钙振荡发生和维持的机制;分析了钙振荡对卵母细胞的细胞周期恢复和母源mRNA翻译的调控作用和机制。目前,关于卵母细胞激活事件信号通路的研究已经取得了很大的进展,但每个单独事件所涉及的分子机制尚未完全确定。本综述探讨了哺乳动物受精时卵母细胞内钙信号研究的现状和未来研究的方向,为保障人类生殖健康和提高畜牧繁殖效率提供参考。     

多种因素对小鼠卵母细胞体外受精效果影响的分析

为了探讨不同精子获能时间,精卵孵育时间,精子密度以及颗粒细胞对小鼠卵母细胞体外受精的影响,从而达到对卵母细胞体外受精体系优化的目的。比较了精子获能时间分别为40 min、60 min、80 min试验组的受精卵卵裂率。结果表明,带颗粒细胞卵母细胞(COCs)在三个试验组中卵裂率无显著差异,不带颗粒细胞卵母细胞(NO)在精子获能时间为60 min时卵裂率最高;比较了精卵孵育时间分别为2 h、4 h、6 h、8 h试验组的受精卵卵裂率,结果显示COCs精卵孵育时间2 h试验组的效果最好,NO孵育时间为6 h试验组的效果最好;比较了精子密度分别为3×10⁵/mL,3×10⁶/mL,3×10⁷/mL试验组受精卵卵裂率,结果显示COCs和NO均为3×10⁶/mL试验组卵裂效果最好;比较COCs和NO的受精卵卵裂率,结果显示COCs与NO之间存在显著差异(P<0.05),裸卵卵裂效果显著优于颗粒细胞卵裂效果。试验结果表明,在卵母细胞体外受精过程中,精子获能时间60 min,精子密度为3×10⁶/mL,精卵孵育6 h,培养24 h后卵裂率最高。     

家兔卵母细胞体外受精研究

以家兔为试验动物,人工采集公兔精液,经体外获能后,与从母兔输卵管获取的成熟卵母细胞进行体外受精和培养。结果表明:①卵龄14～15h卵母细胞体外受精后卵裂率和8～16细胞百分率均显著(P<0.05)高于卵龄16～17h卵母细胞;②L-谷氨酰胺对卵母细胞体外受精及受精卵体外发育具有促进作用,但随着添加量的增加其作用减弱;③培养液DMEM+10%FBS组卵裂率、桑椹胚及囊胚百分率均显著(P<0.05)高于TCM-199+10%FBS组及RM-199组。     

猪ICSI胚胎制备条件的优化

为了进一步优化猪胞浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）胚胎制备条件,本试验将Piezo操作系统应用于猪ICSI胚胎制备过程中,并以胚胎各阶段存活率、分裂率和囊胚率作为衡量指标,对比Piezo操作系统与传统斜口针操作、Piezo操作条件时操作液中添加CB浓度、操作台温度及精子的不同处理方法对猪ICSI胚胎发育的影响。结果表明,Piezo操作系统可以显著提高注射卵的存活率和卵裂率（P<0.05）,但对囊胚率没有显著影响（P>0.05）;利用Piezo进行猪ICSI时,操作液中添加CB,可以减少显微操作时注射针卵母细胞的损伤,其中以7.5 μg/mL CB效果最佳;操作台温度30℃最适合制备猪ICSI胚胎;精子预先进行超声波断尾处理对猪ICSI胚胎的早期发育无显著影响。研究结果表明,精子预先进行超声波断尾处理后,操作液中添加7.5 μg/mL CB、操作台温度30℃,应用Piezo操作系统比较适合猪ICSI胚胎制备。     

The Optimization of Preparating Conditions on Pig ICSI Embryos

In order to optimize the preparating conditions on pig intracytoplasmic sperm injection (ICSI) embryos,the Piezo operating system was used in this experiment and the embryonic survival rate,cleavage rate and cell numbers of blastocysts developed in various stages were measured as traditional and Piezo operating system,the concentration of CB,the operating temperature with Piezo operating system and different sperm processing method in preparating pig ICSI embryos.The results showed that Piezo operating system could significantly improve the survival rate and cleavage rate of injected oocytes (P<0.05),but there was no significant effect on blastocyst rate.There was a slight damage to oocyte added CB in the operating fluid,and adding 7.5 μg/mL CB was most concentration,30℃ was most appropriate operating temperature,but there was no significant effect of early development on pig ICSI embryos with breaking sperm tail with ultrasonic wave.The results suggested that Piezo operating system could significantly improve the survival rate.The results suggested that breaking sperm tail with ultrasonic wave,adding 7.5 μg/mL CB in operating fluid and 30℃ of operating temperature and using Piezo operating system was more suitable for preparating pig ICSI embryos.     

AA~ 种鸡产蛋率、受精率、孵化率的相关分析

对AA 肉用种鸡产蛋周(1～35周)的产蛋率、受精率、孵化率进行跟踪观测并对3个指标进行相关性分析。结果表明:产蛋率与受精率相关系数为0.864(P<0.01);产蛋率与孵化率相关系数为0.900(P<0.01);受精率与孵化率相关系数为0.992(P<0.01),产蛋率与受精率,产蛋率与孵化率,受精率与孵化率三者都呈较强正相关。其中受精率与孵化率相关性最强,产蛋率与孵化率相关性次之,产蛋率与受精率相关性较弱。     

MALDI-TOF-MS用于微生物鉴定的影响因素分析

影响MALDI-TOF-MS微生物鉴定的因素有很多。本研究主要从微生物培养基、培养状态、菌体前处理、上样量等方面进行MALDI-TOF-MS操作技术和方法的探讨。研究结果显示:进行MALDI-TOF-MS细菌鉴定,培养时间在4～24 h之间为佳;尽量选择无色、不含盐的液体培养基;0.1μL菌液是最低鉴定菌量;上样量对结果无影响;对于菌体前处理,除按照标准化前处理程序操作外,也可将菌体加dd H2O制成混悬液进行点靶鉴定,这样更加简便。本研究有助于减少MALDI-TOF-MS操作盲目性,提高鉴定质量,利于操作的规范化和简便化。