新一代的磁珠法核酸自动提取仪研究进展

新一代的磁珠法核酸自动提取仪采用先进的磁珠分离技术,结合相关的磁珠分离试剂盒,可以从多种样品如全血、血清、组织、细胞中分离出高纯度的核酸。文中详细介绍了核酸自动提取仪的原理及应用,并通过检测证明该仪器运动控制稳定,可靠性好,提取效果优,自动化程度高。     

磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究

为确定一种稳定高效的鸡血液DNA提取方法,满足基因组检测对DNA的要求,研究应用磁珠法、酚-氯仿法和试剂盒法。分别对抗凝血和凝血状态的鸡血液样品进行基因组DNA提取,通过超分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳评价所获得的DNA质量,并对三种提取方法所需成本进行估算和比较。结果显示：三种方法均能从两种不同状态血液样本中提取出基因组DNA,酚-氯仿法最为经济,但耗时长且需要使用危险化学品,磁珠法与试剂盒法具有耗时短和环保的优点,且磁珠法较试剂盒法更经济。研究表明磁珠法使用的试剂量少、操作简单、耗时短、日提取样本数目远大于其他两种方法,是三种方法中最为快捷的方法,可以满足实际生产中大批量鸡血液基因组DNA提取的要求。     

基于磁珠核酸提取法的动物源性分测研究

实验采用磁珠提取肉制品及饲料中的核酸,并利用常规PCR和实时荧光PCR技术建立鉴定动物源性成分的方法.通过对磁珠核酸提取法与商品化核酸提取试剂盒进行比较,证明磁珠核酸提取法具有方便、快速、灵敏、安全及可实现自动化等优点.将磁珠核酸提取法与实时荧光PCR技术相结合,对猪、牛、羊、鸭、鸡等动物源性成分进行鉴别研究,结果表明:该方法完全适用于动物源性饲料及肉制品中动物源性成分的鉴定工作,为确证肉及肉产品的成分和来源,预防疯牛病的传播及物种的鉴别提供了有效的分子生物学检测方法.     

6种核酸提取试剂盒的布鲁氏菌核酸提取效率比较

为比较不同类型核酸提取试剂盒的布鲁氏菌核酸提取效率,选取6种核酸提取试剂盒(磁珠法、柱式法各3种),分别对布鲁氏菌灭活菌液和16份临床组织样品进行核酸提取,使用荧光定量PCR方法评估提取效率。结果显示:6种试剂盒在提取10~2和10~4稀释度的布鲁氏菌灭活菌液核酸时,磁珠法的提取产物荧光定量PCR的Ct值整体低于柱式法,批内变异系数小于5%;提取临床组织样品时,2种柱式法细菌提取试剂盒能够提取全部样品的核酸,2种磁珠法细菌提取试剂盒提取了14份核酸,剩下的1种磁珠法和1种柱式法病毒提取试剂盒分别提取了12份和3份核酸。结果表明:6种试剂盒均能有效提取布鲁氏菌灭活菌液,其中磁珠法提取效率略高于柱式法;柱式法细菌DNA对临床组织样品的提取效率略高于磁珠法细菌DNA,但磁珠法和柱式法的病毒DNA提取试剂盒均不适用于临床组织样品的布鲁氏菌核酸提取。在实际操作中,应根据实验室条件、样品数量和任务紧迫性等因素,选取应用合适的试剂盒。本研究为布鲁氏菌核酸提取方法的选择提供了参考。     

磁珠法和柱式法提取核酸在新城疫荧光定量检测中的比较

本试验旨在分析比较磁珠法和柱式法提取病毒核酸的灵敏度及重复性.试验选用实验室常用的磁珠法和柱式法试剂同时提取核酸检测新城疫阳性样品,荧光相对定量比较两种方法的灵敏度及重复性.结果表明,磁珠法提取核酸的检测灵敏度较高,重复性较好,检测成功率较高.表明磁珠法提取核酸在新城疫的荧光定量检测中优于柱式法.     

猪细小病毒分子生物学、诊断及核酸探针的研究进展

自1966年M ayr和M ahnel发现和证实猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)存在及其致病性以来,国内外学者对其进行了广泛深入的研究,其主要症状是引起怀孕母猪流产、死胎、胎儿木乃伊化等,该病在世界范围内广泛分布,给养猪业造成了全球性的巨大的经济损失。在我国经产母猪及种公猪感染阳性率高达90%以上[1]。PPV的早期研究主要集中于病原学、理化性质和防制等方面,20世纪80年代以来,各国的研究者逐渐加强了关于PPV分子结构和基因组成等方面研究。迄今为止,基本研究清楚了PPV基因组的一级结构、转录图谱和翻译图谱。目前,国内外已经分离…     

五种核酸提取法对猪繁殖与呼吸综合征病毒提取效率的比较

目的：研究Trizol RNA提取法、杭州博日吸附柱RNA提取法、Promega核酸提取仪磁珠RNA提取法、西安天隆核酸提取仪磁珠RNA提取法、Thermo核酸提取仪磁珠RNA提取法等五种不同核酸提取方法对不同含量猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）阳性样品的相对提取效率,为动物疫病监测诊断实验室核酸提取方式的选择提供技术参考。方法用五种不同核酸提取方法对4份10倍梯度稀释的PRRSV阳性血清、2份PRRSV阳性组织悬液及其离心后的上清液共8份样品同时进行核酸提取,用荧光RT-PCR方法进行检测,获取各样品PRRSV荧光RT-PCR结果的CP值,分析五种提取方式的相对提取效率。结果对合适的提取样品,磁珠提取法相对提取效率最高,吸附柱法其次,Trizol提取法相对效率较差;在三种磁珠提取法中,提取效率相差在2个CP值内,差异不明显,但以天隆磁珠提取法提取效率更高。结论预装试剂结合仪器自动化操作的磁珠法提取效果稳定,效率最高;国产仪器国产试剂提取效率不亚于进口仪器和试剂。     

鸡传染性贫血病毒的分子生物学及其核酸检测技术

鸡传染性贫血 (CIA)是鸡的重要的免疫抑制性疾病之一 ,以引起雏鸡再生障碍性贫血和全身淋巴组织萎缩为主要特征。鸡传染性贫血病毒 (CIAV)主要引起鸡骨髓成红细胞和胸腺皮质的成淋巴细胞溶细胞感染 ,继而导致贫血和免疫抑制。该病毒在世界范围内广泛存在 ,是养鸡业潜藏的巨大威胁。文章从 CIA的危害、基本控制方法、病原的基因组及其所编码的蛋白质的功能、疾病的诊断等方面的最新进展进行了综述 ,重点介绍了病原的分子生物学研究进展及其核酸检测技术 ,并对 CIAV的研究前景进行了展望     

核酸标准物质研究现状

以核酸扩增为基础的分子诊断技术越来越广泛的应用于医学研究、出入境检验检疫、疫病诊断等领域,核酸标准物质是保证体外诊断检测数据和结果准确一致的重要材料。作者介绍了国内外核酸标准物质的发展历史、研究现状及面临的挑战,展望了核酸标准物质未来发展方向。     

三种核酸提取方法检测禽流感病毒的比较

为比较不同核酸提取方法检测禽流感病毒敏感性的差异,将 H5N1禽流感抗原做10－2～10－10稀释,分别用 Trizol 法、磁珠法和膜吸附法提取上述抗原稀释度核酸模板,采用荧光 RT-PCR 对其进行评价。结果表明,在不同稀释度的抗原的检测中,3种核酸提取方法以膜吸附法提取效率最高,其依次为磁珠法、Trizol 法,经方差分析,3种核酸提取方法之间存在显著性差异（P＜0．05）。说明 3种核酸提取方法提取效率存在显著差异,核酸提取效率的高低影响禽流感病毒荧光 RT-PCR 检测的敏感性,建议实验室根据实际情况选择核酸提取的方法。     

核酸疫苗的应用研究进展

核酸疫苗不仅引起体液免疫反应,而且诱导高水平的细胞免疫应答,尤其是细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,被认为在病毒、胞内菌、寄生虫等病原体感染的防治中具有更大的优势。核酸疫苗作为近年来发展起来的一项新的生物技术,已经成为疫苗研究领域的热点之一,并获得了迅速的发展。实验结果表明,核酸疫苗既可作为病毒、细菌或寄生虫的预防疫苗,也可作为非感染性疾病如肿瘤病的治疗用疫苗。通过介绍近年来核酸疫苗在病毒、细菌、寄生虫等感染性疾病的预防和治疗等领域的研究进展情况,表明随着分子生物技术的不断发展,核酸疫苗的进一步研究和实践为改善人类和动物健康显示出新的希望。     

禽流感病毒分子生物学检测技术研究进展

禽流感(avian influenza,AI)是A型流感病毒引起的一种禽类传染病,同时也是一种人和动物之间的高度传染性疾病。近年来,禽流感病毒的分子生物学检测技术发展迅速,文章就此进行了综述。     

鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)主要侵害鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,可以引起鸡的呼吸道症状、肾脏损害、产蛋量和蛋的品质下降。该病毒血清型较多,容易产生变异,给疫病防控带来很大困难。主要对近年来在IBV的基因组结构、IBV的复制过程、IBV的结构蛋白及生物学功能、IBV的变异机制、IBV的进化以及IBV的鉴定和检测等方面的研究进展进行综述,以期为更加深入地认识和研究该病毒提供参考。     

蓝舌病病原分子生物学及免疫学研究进展

蓝舌病病毒通过吸血昆虫(库蠓)在易感反刍动物之间叮咬进行传播。在家畜中,蓝舌病易发于某些品种的羊,具有典型症状,呈地方性流行;牛感染蓝舌病通常不表现出临床症状。作者分析和总结了近年蓝舌病疫情发生和传播可能的潜在路线,病毒分子生物学研究概况,致病机理及宿主对蓝舌病病毒的免疫反应,并对蓝舌病疫苗的研究进展作了介绍,建议要加强对该病的深入研究,防患于未然。     

猪圆环病毒分子生物学研究进展

猪圆环病毒是迄今发现的一种最小的动物病毒,是严重影响养猪业发展的重要病毒之一,引起猪出现新的传染病。随着近年来对其研究的不断深入,在病毒分子生物学方面取得了重要进展。文章对该病毒的分子生物学研究进行了简要综述。     

核酸适体及其在疫病诊断中的应用

核酸适体是采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体.因其具有亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等优点,逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已成功应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种疫病诊断技术平台,显示出了良好的应用前景,在未来的疫病诊断中将发挥越来...     

机体识别病毒核酸的几种分子模式及途径

近些年机体病原相关模式受体及其识别分子机制的研究,极大地促进了先天性分子免疫学的发展,并成为现代免疫学研究的重点和热点领域。作者通过机体识别病毒核酸的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)、NOD样受体(NOD-like receptors,NLRs)和DAI(DNA-dependent activatorof interferon-regulatory factors,DAI)等模式识别分子的细胞定位、分子结构及其识别病毒核酸途径的介绍,系统、全面地探讨了宿主机体如何全方位识别和消除入侵病毒的分子免疫防御途径,为抗病毒药物和疫苗的设计以及抗病育种提供了理论依据。     

鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

鸡传染性(IBV)支气管炎是由冠状病毒属传染性支气管炎病毒引起的高度接触性传染病。此病在世界各地均有发生,危害严重,给全球养禽业造成巨大的经济损失。IBV血清型较多且抗原易发生变异,肾型和肠型变异株的出现,给该病的诊断和防治造成了困难。近年来国内外学者对其研究不断深入,特别在病毒基因组的组成、病毒结构蛋白的功能、病毒的转录合成机制、病毒粒子的组装等方面取得了重要进展,所有这些成果为IBV预防与控制提供了科学依据。