动物组织中氯霉素残留快速检测方法研究

采用酶联免疫分析法(ELISA法)对动物组织中氯霉素的残留检测进行了研究。氯霉素浓度在0.05-4ng/mL范围内呈线性关系,线性方程为y=-0.321x 0.8193,R2=0.9985。IC50为1.0ng/mL,样品添加回收率为67%-98%,变异系数小于5.5%,最低检测限为0.05 ng/mL。乙酸乙酯提取法回收率为73%-98%,乙腈水提取法回收率为67%-94%。     

ELISA在检测动物组织氯霉素残留中的应用

采用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linkedImmunosorbentAssayELISA)方法,筛查和定量检测氯霉素(Chloramphenicol)。试样经过乙酸乙酯的萃取和正己烷的净化,在温育过程中,将特异性抗体(兔抗CAP)、酶标记CAP(酶结合物)和CAP标准品或样品,加入预先包被了绵羊抗兔IgG抗体的孔内。特异性的抗体便被固定抗体所结合。与此同时,游离的CAP(存在于标准品或样品)和酶结合CAP便互相竟争CAP抗体结合部位(竞争性酶免检测)。然后温育1h洗涤除去非结合(酶标记)试剂。加入底物,结合的酶结合物可将无色的底物转化为有色产物。加入硫酸,终止底物反应。用装有450nm滤光片的酶标仪进行检测,吸光度值与样品中的CAP浓度成反比。试验结果表明,该方法在0.025～2ng/ml范围内相关系数(R2)大于0.995,检测下限0.02μg/kg,回收率为78.2%。     

ELISA检测蜂王浆氯霉素残留的快速前处理方法

为获得一种能快速检测蜂王浆中氯霉素残留的前处理方法,采用改良的0.1mol/L Tris-TBE(pH=8.0)溶液处理蜂王浆,结合乙酸乙酯提取氯霉素(CAP),处理时间约25min。ELISA检测样品的OD450值明显低于试剂盒法,通过添加标准CAP溶液对改良法进行验证。结果表明,改良法提取的样品对不同CAP质量浓度表现出明显的OD450值变化,与添加前比较差异显著(P<0.05),排除处理过程存在干扰显色的因素。改良法检测相同样品的平均相对标准偏差为1.29%,完全符合目前国际上氯霉素残留检测的要求。     

氯霉素残留检测竞争ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株建立竞争ELISA(ciELISA)分析方法,研制出CAP残留快速检测试剂盒(CAP-Kit),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP-Kit标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.9955,检测范围为0.1~128.0μg.L-1,半数抑制浓度(IC50)为2.4μg.L-1,灵敏度为0.053μg.L-1,检测限为0.1μg.L-1;奶样、肉样的平均添加回收率为88.5%、82.7%,平均批内和批间变异系数均<15%;CAP-Kit与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无CR;基质对CAP-Kit的检测结果影响不大;CAP-Kit在4℃可保存6个月以上。     

水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析

初步比较了酶联免疫法(ELISA)中2种氯霉素试剂盒(荷兰EURO-DIAGNOSTICA试剂盒和德国r-Biopharm试剂盒)检测水产品氯霉素残留量的效果,并对测定水产品氯霉素残留量的气相色谱法(GC-ECD)和液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)的技术参数进行了比较分析。结果表明,荷兰EURO-DIAGNOSTICA试剂盒和德国r-Biopharm试剂盒的检测范围分别为0.025~2.0μg.L-1和0.05~4.05μg.L-1,其板内相对标准偏差均小于10%,2种试剂盒检测25个鱼或虾样品的假阳性率分别为12%和20%。LC-MS/MS和GC-ECD的最低检测浓度分别为0.1μg.kg-1和0.27μg.kg-1,当氯霉素添加量为2μg.kg-1时其平均回收率分别为95.2%和70.4%;LC-MS/MS样品前处理较简单,GC-ECD较繁琐。     

水产品中氯霉素药物残留检测方法

作为一种高效广谱的抗生素,氯霉素(CAP)已经广泛运用于生物疾病治疗。但最近的研究表明:氯霉素具有较强的毒理副作用,将氯霉素用于水产品中,对人的健康构成了巨大威胁,因此需要通过各种检测技术,严格控制水产品中氯霉素残留量。基于此简单综述了水产品中氯霉素的几种检测技术,并以液质联用法为例,较为详细的介绍了氯霉素残留量检测技术。     

用酶联免疫法测定虾蟹中残留的氯霉素

采用酶联免疫法测定了南美白对虾Penaeus vannam ei和中华绒螯蟹Eriocheir sinensis中残留的氯霉素。比较了用不同方法处理样品对检测结果的影响,通过对检测范围、精密度、回收率等项目的测定,验证了该方法的可靠性。结果表明:氯霉素标准液为50⁴050 ng/L时,具有良好的线性关系;板间变异系数小于16.4%,样品测定的变异系数为9.4%4050 ng/L时,具有良好的线性关系;板间变异系数小于16.4%,样品测定的变异系数为9.4%¹3.8%;用乙腈水溶液方法提取的回收率(84%13.8%;用乙腈水溶液方法提取的回收率(84%¹16%)比用乙酸乙酯提取的回收率(62%116%)比用乙酸乙酯提取的回收率(62%⁹2%)高。     

ELISA和GICA快速检测水产品中氯霉素残留的比较

比较了水产品中氯霉素残留的ELISA和GICA检测方法.经测定,GICA检测限为1.000μg/kg.GICA 对ELISA的阴性符合率为94.7%,阳性符合率为92.3%,总符合率为92.5%.结果表明:GICA方法操作简单、快速、特异性强、重复性好,适合水产品中氯霉素残留的现场筛选.     

用酶联免疫法测定虾蟹中残留的氯霉素

采用酶联免疫法测定了南美白对虾Penaeus vannamei和中华绒螯蟹Eriocheir sinensis中残留的氯霉素。比较了用不同方法处理样品对检测结果的影响,通过对检测范围、精密度、回收率等项目的测定,验证了该方法的可靠性。结果表明：氯霉素标准液为50～4050ng／L时,具有良好的线性关系;板问变异系数小于16．4％,样品测定的变异系数为9．4％～13．8％;用乙腈水溶液方法提取的回收率（84％～116％）比用乙酸乙酯提取的回收率（62％～92％）高。     

高效液相色谱——串联质谱法测定鸡肉中的氯霉素

氯霉素(CAP)是一种广谱类抗生素,广泛存在于动物的饲料中。长期食用氯霉素,会对人体的骨髓造血系统和神经系统等造成损害。为保障人体健康,氯霉素含量的检测显得尤其重要,特别是食用肉类中氯霉素残留含量的检测。样品经过乙腈水溶液提取,离心取用上清液再经过PRIME HLB固相萃取柱净化,氮吹,甲醇水溶液定容,过0.22μm水相滤膜,用液相色谱法—串联质谱法检测氯霉素。结果显示,氯霉素线性关系良好,其相关系数为0.999。在0.2、1.0、2.0μg·kg^-13个水平添加回收实验条件下,回收率为80%～100%,相对标准偏差为2.67%～8.81%,可确定的方法检出限为0.05μg·kg^-1。该方法灵敏度高、重现性好,可满足鸡肉中痕量元素的检测。     

酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量

[目的]探索水产品中氯霉素残留量的快速检测方法。[方法]采用酶联免疫法(ELISA)测定鱼、虾类水产品中氯霉素的残留量。[结果]检测的20个水产品中有1个阳性样品,其他样品均为阴性。ELISA方法的检出限为0.01μg/kg,平均回收率为76.1%~90.7%,相对标准偏差(RSD)≤3.21%,在0.025~1.600 ng/ml范围内有良好的线性关系,相关系数为0.997 5。[结论]该检测方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于大批量水产品中氯霉素残留的快速检测。     

克仑特罗在猪肝脏中残留检测的ELISA法研究

本研究旨在用ELISA试剂盒建立一种简便、可靠的猪肝脏中克仑特罗残留的检测方法。添加了适量克仑特罗标准工作液的肝脏样品同 5倍 0 .1mol/L的盐酸溶液匀浆 ,冻藏、解冻后离心。上清液用正已烷萃取脂溶性杂质 ,再用氢氧化钠溶液调节pH至 1 2。用异丁醇提取待测药物 ,将提取液在 6 0℃用氮气吹干。用 1mL试剂盒中的稀释液将残渣溶解后 ,用ELISA法在 4 50nm处检测克仑特罗的含量。该方法的线性范围为 0 .1 3～ 5.3ng/mL ,回归方程为y=- 1 .80 0x 2 .2 85,相关系数r=0 .997,最低检测限为 0 .1 3ng/mL ,最低可定量限为 0 .2 5ng/g,浓度为 0 .2 7、0 .53和 1 .0 6ng/g时的回收率分别为 6 8.9%、72 .7%和 77.4 % ,CV <2 0 %。本法的可靠定量限低于克仑特罗在动物肝脏中的最高残留限量 ,且回收率和变异系数均能满足残留检测的要求 ,是一种较简便、可靠的克仑特罗在猪肝脏中残留的快速检测方法     

酶联免疫吸附法在磺胺类药物残留检测中的应用

介绍了磺胺类药物的毒性及其残留量的检测方法,着重叙述了酶联免疫吸附法及其在磺胺类药物残留检测中的应用。     

肉鸡组织中马杜霉素残留检测的研究

用混合酸酐法和活化酯法合成5种马杜霉素结合抗原。用其中2种免疫家兔制备出对马杜霉素具有极高亲和性和特异性的抗体;用其余3种作包被原,发现马杜霉素分子羧基上连接一个6个碳分子后再与卵清蛋白结合成的包被抗原（M-C#-6-OVA）,能大大提高ELISA检测灵敏度。首次制备针对马杜霉素的特异性高容量免疫亲和色谱柱（Ⅰ柱动态柱容量为3750ng/ml胶,Ⅱ柱为7160ng/ml胶）。组织样品用甲醇提取,经免疫亲和色谱（IAC）柱分离纯化,ELISA检测,即建立IAC-ELISA方法。检测时,只需制备PBST-10%甲醇为介质的标准曲线即可,组织样品添加回收率测定结果证明了这一点。以不同剂量马杜霉素添加于饲料饲喂肉鸡,测得马杜霉素主要残留于脂肪,其次是肝脏,最少是肌肉。以5.0mg·kg#+(-1)剂量马杜霉素混拌料饲喂肉鸡,停药2～3d,鸡组织中马杜霉素的残留量就低于最高残留限量的规定。     

饲料中三聚氰胺的ELISA检测方法的探讨

试验利用BRAXIS试剂盒和自制（经气相色谱质谱法确证不含三聚氰胺）三聚氰胺添加量为2 mg/kg的配合料和浓缩料作为阳性对照样品,对100批次饲料产品的进行了三聚氰胺筛选,并将两种方法的筛选结果按照NY/T1372-2007中的气相色谱质谱法进行了确证和比较。试验结果表明：利用三聚氰胺添加量为2 mg/kg配合料和浓缩料为阳性对照样品,对样品的筛选结果,要比使用BRAXIS试剂盒的内制曲线筛选的结果,产生的假阳性少,准确率相对要高。     

鸡肝中链霉素残留的2种免疫分析法

研究对比了鸡肝中链霉素残留的酶联免疫分析(ELISA)和Charm Ⅱ放射免疫分析(RIA)。ELISA分析中，链霉素标准在0．5～128．0μg/L的范围内呈良好线性，定量检测限为30μg/kg。RIA分析中，链霉素标准在25～500μg／L的分析浓度范围内相关性较好，筛选水平为200μg/kg。2种方法的检测限、精密度、回收率等指标符合鸡肝链霉素残留监控的最大允许限量要求。ELISA方法对二氢链霉素的交叉反应率为155％。     

96微孔板固定鸡肝酯酶研究

[目的]研究并优化鸡肝酯酶固定化的条件,提高其稳定性,便于在流动注射式生物传感器中使用。[方法]以聚氯乙烯和聚苯乙烯材料的96微孔板为载体,采用物理吸附法固定鸡肝酯酶。通过单因素试验考察时间、温度、酶浓度对固定化酶活力及对甲胺磷农药响应值的影响。[结果]聚苯乙烯材料固定的固定化酶对农药抑制有较高响应值,在最佳固定化时间5 h、温度30℃、酶浓度为30 U/m l的条件下得到的固定化酶吸光值为0.87,1 mg/kg甲胺磷农药对其抑制率为28.39%。[结论]该聚苯乙烯材料对鸡肝酯酶具有较好的吸附能力,且固定方法简单,酶分子空间构型稳定,是一种优良的载体。