αV,β3整合素在绵羊体外受精胚胎的表达模式研究

[目的]探讨胚胎附植调控因子αV,β3整合素在绵羊早期体外胚胎的表达情况,为早期胚胎发育及附植调控机理提供理论依据.[方法]采用RT-PCR和间接免疫荧光染色技术,检测绵羊体外受精个发育阶段胚胎中αV及β3整合素mRNA的表达模式及蛋白表达定位情况.[结果]在绵羊2-细胞至桑椹胚体外胚胎中未能检测到整合素αV及β3 mRNA的表达,但可以检测到囊胚期胚胎有微量整合素αV及β3 mRNA的表达.并且在绵羊第7d扩张囊胚和第8d孵化囊胚上均可检测到整合素αVβ3蛋白的表达,且蛋白表达主要分布在胚胎滋养层细胞周围,孵化囊胚蛋白表达量略高于扩张囊胚.[结论]αV,β3整合素在绵羊早期胚胎发育及附植过程中具有重要调控作用.     

TLR4基因在绵羊不同生理状态下子宫内膜组织中的mRNA表达

为了研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在绵羊胚胎附植期和发情周期子宫内膜中mRNA的表达模式。采用半定量RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR分别检测妊娠21 d母羊全身组织和妊娠9、13、17、21、25 d的母羊子宫内膜组织TLR4基因的表达以及绵羊卵泡期与黄体期母羊子宫内膜组织TLR4基因的表达。结果表明,TLR4基因在肝脏、脾脏、卵巢、输卵管、子宫、小肠、膀胱、肌肉及松果体等组织出现表达,其中在输卵管、卵巢、子宫、膀胱、脾脏及松果体中表达量较高,在肝脏、小肠、肌肉中表达较弱,而在心脏、垂体、脂肪等组织中不表达。从妊娠9 d开始,绵羊胚胎TLR4基因表达量呈逐渐下降趋势;至胚胎附植点17 d,TLR4基因表达量最低,之后又呈现上升趋势,到25 d达到峰值。不管是在细毛羊还是在湖羊子宫内膜组织中检测,TLR4基因黄体期的表达水平均显著高于卵泡期(P 0. 05)。说明TLR4的mRNA表达具有组织特异性,在胚胎附植期绵羊子宫内膜中呈现先低后高的趋势,以及其在绵羊发情周期中表达出现黄体期显著高于卵泡期现象,也初步说明了TLR4可能在胚胎附植早期和发情周期中均发挥一定作用。     

Smad7蛋白的研究进展

Smad7是一种抑制蛋白,其主要功能是参与转化生长因子β(TGF-β)超家族的细胞内信号转导。介绍Smad7蛋白的结构,参与的信号通路,对细胞的调节机制。     

Smad7蛋白的研究进展

Smad 7是一种抑制蛋白,其主要功能是参与转化生长因子β(TGF-β)超家族的细胞内信号转导.介绍Smad 7蛋白的结构,参与的信号通路.对细胞的调节机制、     

Smad7蛋白的研究进展

Smad7是一种抑制蛋白,其主要功能是参与转化生长因子β（TGF—β）超家族的细咆内信号转导。介绍Smad 7蛋白的结构,参与的信号通路,对细胞的调节机制。     

TGF-β/Smad途径在肿瘤进展中的研究进展

转化生长因子-β(TGF-β)超家族信号通路调控着复杂的基因表达反应,并因不同生理和病理环境而变化,其在多个水平上广泛地调节维持着体内平衡。TGF-β信号通过与膜上特异性受体结合发生信号级联反应,依次激活并磷酸化胞内Smad蛋白形成TGF-β-Smad复合物,随后移入细胞核调节相关靶基因转录反应。调节过程中任何信号转导因子发生异常可导致或促进肿瘤的发生和发展。综述了对近年来TGF-β/Smad信号通路在肿瘤发生过程中的作用,阐述TGF-β/Smad调控肿瘤进展过程,以期为其在肿瘤治疗中的应用提供参考。     

一氧化氮对小鼠胚胎附植影响的研究

采用子宫角注射方法研究了一氧化氮（N0）对小鼠胚胎植入的影响,并采用组织切片的方法,光镜观察了一氧化氮对小鼠子宫及其内膜形态变化及脱膜化的影响。结果表明,与对照侧相比,L-NAME 0.2 mg/只处理组植入胚胎数降低,在L-NAME中加入NO供体硝普钠（SNP）时,则不影响胚胎植入数;附植过程中,妊娠侧的子宫内膜发育明显,上皮细胞增高,腺体发达,间质疏松,间质细胞增大,发生明显的蜕膜样变。抑制侧子宫内膜柱状上皮细胞相对较低,腺体数少,子宫内膜在附植后期出现较明显退行性变化,基质变得紧密。一氧化氮作为一种内源性平滑肌松驰剂和血管扩张剂,对子宫内膜MMP-9mRNA的表达有着极为显著的调节作用,在附植过程中一氧化氮合酶受到抑制后能显著降低MMP-9基因的表达,并进一步影响子宫内膜发育和胚胎的附植。     

一氧化氮对小鼠胚胎附植影响的研究

采用子宫角注射方法研究了一氧化氮(N0)对小鼠胚胎植入的影响,并采用组织切片的方法,光镜观察了一氧化氮对小鼠子宫及其内膜形态变化及脱膜化的影响。结果表明,与对照侧相比,L-NAME 0.2 mg/只处理组植入胚胎数降低,在L-NAME中加入NO供体硝普钠(SNP)时,则不影响胚胎植入数;附植过程中,妊娠侧的子宫内膜发育明显,上皮细胞增高,腺体发达,间质疏松,间质细胞增大,发生明显的蜕膜样变。抑制侧子宫内膜柱状上皮细胞相对较低,腺体数少,子宫内膜在附植后期出现较明显退行性变化,基质变得紧密。一氧化氮作为一种内源性平滑肌松驰剂和血管扩张剂,对子宫内膜MMP-9mRNA的表达有着极为显著的调节作用,在附植过程中一氧化氮合酶受到抑制后能显著降低MMP-9基因的表达,并进一步影响子宫内膜发育和胚胎的附植。     

水牛胚胎附植过程中瘦素及其受体在子宫内膜中的表达

[目的]探讨瘦素及其受体ob-Rb在水牛子宫内膜中的表达规律及其对水牛胚胎附植的影响。[方法]母水牛经孕马血清促性腺激素(PMSG)超排后与公牛交配,分别在交配后第0、5、7、9和15天各屠宰10头水牛,分别取胚胎附植部位的子宫组织,提取瘦素及其受体总RNA。利用RT-PCR方法检测不同时期瘦素mRNA及其受体表达情况。[结果]瘦素在胚胎附植过程中在水牛子宫内膜都有表达,各时期的表达水平差异不明显(P>0.05),Ob-Rb在胚胎附植过程中亦有表达,但是交配后第7、9和15天的表达水平与0和5天差异显著(P<0.05),并且在妊娠期0～7天内表达水平上升,7天达到峰值,然后下降。[结论]瘦素及其受体Ob-Rb可能不仅参与胚胎的附植,而且也可能参与附植后胚胎的生长发育。     

附植前后不同时期兔子宫蛋白质的特异性

为探明胚泡附植的分子机制,运用双向电泳技术分析了兔子宫内膜蛋白和子宫冲洗液蛋白．结果表明,在给定的时期内,子宫内膜蛋白质有差异,差异点共有11个;子宫冲洗液中蛋白质也有很大的差异,但在短时间内,存在有相对分子质量和等电点相同的蛋白质点,子宫冲洗液蛋白以分泌蛋白为主。     

Uterine Expression of WNT7A and β-catenin After Induction of Oestrus in Sheep

WNT7A and β-catenin localisations and roles in regulating periimplantation ovine conceptus development under natural estrous conditions have been elaborated.However,their locations and expression patterns have not been reported under induction of oestrus.The localisation,expression and function of WNT7A and β-catenin in the uterine tissues of the early pregnant and non-pregnant sheep on days 10,12,14,16 and 18 following artificial induction of oestrus were investigated by means of in situ hybridisation,real-time RT-PCR,immuno-histochemistry and western blotting methods.WNT7A and β-catenin mRNA and protein were both restricted to the apical surfaces of the uterine luminal epithelium (LE) and glandular epithelium (GE).In pregnant sheep,protein localisation of WNT7A and β-catenin was observed both in the endometrial LE and GE.Their staining presented on day 10,increased between day 12 and day 16,and decreased on day 18.WNT7A and β-catenin mRNA and protein expression increased initially and then decreased from day 10 to day 18,peaking on day 16,and β-catenin reaching a peak on day 18 in the uterine tissues of pregnant sheep (p0.05).By contrast,no significant changes in WNT7A and β-catenin mRNA and protein expression levels were observed from day 10 to day 18 of the oestrus cycle in the uterine tissues of non-pregnant sheep (p0.05).Additionally,WNT7A and β-catenin mRNA and protein expression levels in the uterine tissues of the early pregnant sheep were significantly higher than those of non-pregnant sheep (p0.05).Treatment of endometrial epithelial cells with WNT7A increased the mRNA expressions of β-catenin,c-myc and Cyclin D1.These results provided an underlying mechanism of periimplantation ovine conceptus development under induction of oestrus.     

干扰素对附植前后哺乳动物妊娠识别与维持的作用

哺乳动物胚泡附植过程中能产生一种特异的妊娠相关蛋白——干扰素,它对妊娠的识别与维持十分重要。综述了绵羊、牛、猪、红鹿早期胚胎发育期间所产生的干扰素及其作用。     

蒙古绵羊胚胎大肠黏膜上皮的组织发生

[目的]研究蒙古绵羊胚胎大肠黏膜上皮的组织发生。[方法]利用组织学常规方法。[结果]蒙古绵羊胚胎大肠黏膜上皮的发育经历了单层细胞到复层细胞再到单层细胞的过程;杯状细胞在37 mm胚初见;90 mm胚直肠腺开始发育,142 mm胚盲肠、结肠肠腺开始发育。[结论]蒙古绵羊胚胎大肠黏膜上皮经历了单层细胞到复层细胞再到单层细胞的发育过程。     

绵羊Y染色体特异性引物及SNPs的筛选

【目的】哺乳动物Y染色体雄性特异区在减数分裂过程中不与X染色体发生重组,遵循严格的父系遗传,是研究父系遗传多样性的重要遗传资源;此外绝大多数Y染色体基因主要或者特异性的在睾丸组织中表达,并在精子发生和雄性繁殖力方面扮演着至关重要的作用。由于Y染色体测序极其困难,造成很多物种Y染色体序列很少。因此本文基于目前现有牛科动物Y染色体引物信息,旨在鉴定绵羊Y染色体特异性引物,比较绵羊Y染色体基因片段与岩羊、牛、山羊和牦牛Y染色体的差异,同时筛选不同绵羊品种在Y染色体基因片段内的SNPs,将找到的Y-SNPs和绵羊的睾丸大小进行相关性分析,为鉴定绵羊Y染色体基因片段奠定基础,并为今后绵羊Y染色体单倍型的构建、绵羊胚胎性别早期鉴定和公绵羊繁殖力相关分子标记的筛选提供科学依据。【方法】根据目前文献公布的29对牛科动物Y染色体特异性引物序列,以母绵羊和水分别作阴性和空白对照,以公绵羊DNA为模板验证引物的雄性特异性;确定绵羊Y染色体特异引物后,利用DNA混合池测序结合限制性长度片段多态性等技术在萨福克羊(n=146)、白萨福克羊(n=91)、东弗里升羊(n=6)、特克塞尔羊(n=72)、南非肉用美利奴羊(n=17)、杜泊羊(n=32)、湖羊(n=55)、藏羊(n=34)、滩羊(n=43)和岩羊(n=14)公羊群体中进行Y-SNPs扫描。用Chromas和DNASTAR等软件分析混合池测序的结果,利用DNAman软件将绵羊Y染色体基因片段与牦牛、山羊、黄牛和岩羊进行同源性分析。同时,测量萨福克羊、白萨福克羊、东弗里升羊、特克塞尔羊、南非肉用美利奴羊、杜泊羊周岁的阴囊围,利用SPSS19.0软件分析SNPs位点与公羊阴囊围的相关性。【结果】在分析的29对引物中,6对引物为绵羊Y染色体特异性引物,分别能扩增出ZFY3、SRY6、USP9Y、UTY、SRY11和ZFY6片段。17对引物未能出现扩增条带,6对引物在母羊DNA中出现扩增条带。通过比对发现绵羊6个基因片段与岩羊、牛、山羊、牦牛的同源性在81.51%—98.84%。此外,首次在萨福克和白萨福克羊群体的SRY11片段中鉴定得到一个GA的突变,通过Hpy188I酶切分析发现在萨福克羊、白萨福克羊中有2种基因型(AA、GG),在其他7个绵羊品种中只有GG基因型。在白萨福克羊群体中,GG基因型的频率为0.747,AA基因型的频率为0.253;在萨福克羊群体中GG基因型的频率为0.986,AA基因型的频率为0.014;说明在萨福克羊和白萨福克羊群体中,GG基因型为优势基因型。关联分析显示在白萨福克羊群体中,GG基因型个体周岁的阴囊围显著的高于AA基因型(P=0.029)。【结论】鉴定得到6个绵羊Y染色体基因片段,它们与牛、山羊、牦牛和岩羊具有较高的同源性,表明Y染色体基因在进化过程中具有一定的保守性。首次在萨福克和白萨福克羊群体SRY11片段中找到一个Y-SNP(GA),其与白萨福克羊周岁的睾丸大小紧密相关。     

水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究(英文)

[Objective] The experiment aimed to set up a method for isolating and culturing endometrial stromal cells (BESC) and endometrial glandular epithelial cells(BEGEC) of buffalo as well as laid foundation for studying biological mechanism of embryo implantation and uterine diseases. [Method] The enzymatic digestion method, scraping method, serial filtration and differential velocity adherent technique were used to isolate BESC and BEGEC, then immunocytochemical method and TRYPAN-Blue assay were used to determine the purity and survival rate of isolated cells. [Result] The BESC and BEGEC were successfully isolated and cultured while immunocytochemical method and cell count method demonstrated that the purity was over 90%. The result of TRYPAN-Blue assay shown that survival rate of BESC and BEGEC was 91% and 78% respectively. [Conclusion] The enzymatic digestion method, scraping method, serial filtration and differential velocity adherent technique could isolate BESC and BEGEC with high purity.     

白细胞介素6及其受体在绵羊卵母细胞成熟过程中的表达

采用实时定量PCR技术检测了不同成熟培养时间绵羊卵母细胞和卵丘细胞白细胞介素6基因（interleukin-6 gene, IL-6）及其受体基因（interleukin-6 receptor gene, IL-6R）mRNA的相对表达量。结果显示,在体外成熟培养过程中,卵母细胞和卵丘细胞中持续表达IL-6及其受体IL-6R mRNA,培养4~8 h,其相对表达量呈现显著升高,随后则降低;在16~20 h时卵母细胞中IL-6 mRNA表达重新升高;相应的卵丘细胞在12~16h时IL-6R mRNA表达也升高。绵羊卵母细胞和卵丘细胞中IL-6和IL-6R mRNA的持续表达以及动力学变化提示了白细胞介素6在卵母细胞成熟过程中具有潜在调控作用。     

H2A变体在小鼠不同时期雄性生殖细胞核质区的分布

【目的】了解小鼠雄性生殖细胞中macro H2A、H2A.Z和H2A.X 3种组蛋白变体变化与其发育特征间的联系,为揭示原始生殖细胞（PGCs）的发育机理及其分子调控机制奠定基础。【方法】以C57BL/6J小鼠胚胎的中肾和生殖嵴为试验材料,通过免疫荧光染色技术检测11.5dpc、12.5dpc和13.5dpc不同发育时期含有PGCs的组织石蜡切片及单细胞中macro H2A、H2A.X和H2A.Z变体的分布情况。【结果】macro H2A变体在11.5dpc胚胎时主要存在于细胞质中,12.5dpc时在细胞质中的表达增强,但进入生殖嵴后（13.5dpc）表达消失;H2A.X变体在11.5dpc和12.5dpc时存在于PGCs的核质区,13.5dpc时主要存于细胞质,且呈聚集分布;H2A.Z变体在11.5dpc时在PGCs的核质区均有存在,12.5dpc和13.5dpc时主要分布在细胞核,且表达明显增强。【结论】随着PGCs的不断迁移、增殖与分化,macro H2A、H2A.X和H2A.Z 3种组蛋白H2A变体在细胞核质区的分布及表达情况也发生变化,即H2A变体分布特征与PGCs的性别分化及其有丝分裂停止相关。     

序贯共培养体系对小鼠体外受精胚胎发育效果的影响

采用体外分离培养的兔输卵管上皮细胞和子宫内膜细胞构建了序贯共培养体系,并与体外受精得到的受精卵进行共培养。试验结果表明,HTF液受精率显著高于T6液(P<0.05),更适用于卵母细胞的体外受精。序贯共培养体系和输卵管上皮细胞培养组2-细胞率都显著高于单独培养液组和子宫内膜细胞培养组(P<0.05),二者均可克服2-细胞阻滞。序贯共培养体系胚胎的囊胚体外发育率显著高于其他共培养组(P<0.05)。表明序贯共培养体系比单一体细胞共培养体系能更好地模拟体内环境,提高早期胚胎的体外发育率。     

不同培养条件下小鼠体外胚泡着床模型的研究

用对比的方法观察不同培养条件对小鼠体外胚泡着床的影响,从而建立在体外研究着床机制的简易着床模型。在无血清单独培养系统、子宫内膜上皮细胞(EEC) 无血清共培养系统、EEC 3%胎牛血清(FCS)系统和EEC 0.4%牛血清白蛋白(BSA)系统中分别移入胚泡,观察并统计脱带率、粘附率和扩展率。结果显示后面两组的脱带率、粘附率、扩展率明显高于前面两组,差异显著(P<0.05);而EEC 3?S共培养组的脱带率、粘附率、扩展率和EEC 0.4%BSA共培养组相比,差异不显著(P>0.05)。因此胚泡与子宫内膜上皮细胞用FCS共培养与用BSA共培养都是比较理想的着床模型,可以用来体外研究着床的影响因素。     

水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究

[目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用免疫细胞化学法和台盼兰染色法检测分离细胞的纯度和活率。[结果]成功分离培养出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞;免疫荧光染色和细胞计数表明上皮细胞和基质细胞的纯度均达90％以上;台盼兰染色结果显示,上皮细胞的活率为91％,基质细胞的活率为78％。[结论]采用酶消化、刮取、过滤和差速贴壁相结合的方法可分离出高纯度的永牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。