芪板青颗粒体外抗PRRSV效果研究

为了检验芪板青颗粒体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒效果,降低养猪场因感染猪繁殖与呼吸综合征病毒带来的损失,本试验通过调整芪板青颗粒溶液与猪繁殖与呼吸综合征病毒液加到Marc-145细胞中的不同顺序,分别检验芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制、杀灭和阻断作用。结果显示：芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒有一定的抑制、杀灭和阻断作用,在芪板青溶液浓度为24.4～3 125.0 mg/L时,有显著的抑制和杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,在浓度195.3～3 125.0 mg/L时,有显著的阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒作用。结果表明：芪板青颗粒可用于体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒,本试验为芪板青颗粒的应用提供了依据,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了帮助。     

双黄连水煎液对猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外作用效果研究

[目的]通过建立的荧光定量PCR方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒载量的检测,探究双黄连水煎液在体外对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响.[方法]建立非洲绿猴胚胎肾细胞与猪繁殖与呼吸综合征病毒共感染模型,并应用CCK8法筛选双黄连水煎液的最大安全质量浓度.根据DNA序列数据库公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒-N蛋白参考序列,设计特异性引物,构建猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因质粒,建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因的荧光定量PCR方法,研究最大安全质量浓度下的双黄连水煎液对猪繁殖与呼吸综合征病毒载量的影响.[结果]双黄连水煎液对非洲绿猴胚胎肾细胞的最大安全质量浓度为6.25 mg/mL,在此安全质量浓度下对猪繁殖与呼吸综合征病毒具有良好的阻断吸附和抑制复制作用,作用效果呈时间和剂量依赖性,而对猪繁殖与呼吸综合征病毒的直接杀灭作用效果不显著.[结论]成功建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒载量的荧光定量PCR方法,通过此方法检测到双黄连水煎液在6.25 mg/mL时具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用.     

兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒血清在Marc-145细胞上对病毒复制影响

制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,探索其对病毒复制影响,通过大量培养猪繁殖与呼吸综合征病毒XH-GD株病毒,高速离心后蔗糖梯度纯化浓缩并免疫新西兰大白兔,4免后采集抗血清,ELISA法测定效价。同时将抗血清与病毒共同孵育接种Marc-145细胞,荧光定量PCR和TCID50测定病毒复制情况。成功制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,效价达1640,抗血清可以在m RNA水平和TCID50上降低病毒滴度。结果表明,兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清可以在Marc-145细胞上抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一种新传染病,分布广泛且对养猪业造成巨大损失.就猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构、基因组编码蛋白、病毒结构蛋白的抗原性等方面的研究进展进行综述,为相关研究提供重要依据.     

广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征调查分析

【目的】了解广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的感染情况,为广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的监督及防控工作提供参考。【方法】通过对Nsp2基因的分析,合成新的特异性诊断引物,并利用RT-PCR的方法对广西贵港地区111个规模猪场采集的1865份扁桃体同时进行高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征的分子流行病学调查。【结果】25个猪场检出92份猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点总阳性率为22. 5%,样品总阳性率为4. 93%。其中9个猪场检测出24份高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为8. 10%,样品阳性率为1. 29%; 18个猪场检测出68份经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为16. 2%,样品阳性率为3. 65%; 2个猪场同时检测出高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒。【结论】广西贵港地区规模猪场感染猪繁殖与呼吸障碍综合征的现象较为严重。     

PRRSV 的病毒蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的病毒性疾病,给世界养猪业造成了极大的威胁.从猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因组、非结构蛋白和结构蛋白3个方面对PRRSV的病毒蛋白研究进展进行综述.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的猪的一种新传染病，分布广泛且对养猪业造成巨大损失．就猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组结构、基因组编码蛋白、病毒结构蛋白的抗原性等方面的研究进展进行综述，为相关研究提供重要依据．     

猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重RT-PCR检测方法的建立

[目的]建立具有高敏感性能区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株的双重RT-PCR检测方法.[方法]首先从退火温度与引物浓度先对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的单项RT-PCR方法的条件分别进行筛选与优化,然后对其双重RT-PCR方法的条件进行筛选与优化,并进行特异性与敏感性检测,最后初步应用于临床样品检测.[结果]建立的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重RT-PCR检测方法不能检出猪流行性腹泻病毒和猪瘟病毒等当前流行较广的其他猪源RNA病毒,对猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的检测灵敏度分别是100、200copies/μL.此方法对2020-2021年8个猪场的220份血清样品的检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病株的个体阳性率分别为7.73％和43.64％,与单项RT-PCR方法检测结果完全一致.[结论]建立了一种高敏感性的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株和高致病株双重RT-PCR检测方法.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒对猪免疫力的影响研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)对全世界养猪业而言是一种致命的病毒性疾病。它是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种严重的临床疾病,并且保持终身隐性感染的能力。PRRS也使我国养猪业遭受了巨大的损失,近年来尤其是高致病蓝耳病毒的出现,已严重影响我国生猪养殖业的健康发展。对猪繁殖与呼吸综合征的免疫作用机制及防制措施进行了综述,旨在为其今后的防制提供新的思路与方案。     

一株猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病株的分离与鉴定

[目的]分离一株近期流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒并解析其基因变异情况.[方法]适当处理猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性临床样品,接种非洲绿猴胚胎肾细胞进行病毒分离,间接免疫荧光试验对所分离病毒进行鉴定;同时用RT-PCR技术扩增其全基因组,并进行序列测定与分析.[结果]分离培养物可引起非洲绿猴胚胎肾细胞出现稳定的细胞病变,间接免疫荧光试验显示有许多特异性荧光,分离培养物中存在猪繁殖与呼吸综合征病毒.病毒全基因组大小15 323个核苷酸,在非结构蛋白2基因有30个氨基酸缺失的典型标记;其与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株JXA1株、HUN4株和SD-CXA/2008株之间的核苷酸同源性较高,达到98.9％以上;该毒株与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒SD-CXA/2008株在同一分支上.[结论]分离出一株典型的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难、病毒血症为典型症状的一种传染性疾病,给世界养猪业带来巨大的经济损失。深入研究PRRSV的相关致病机制可为该病防控奠定理论依据。在对PRRSV的研究中,非结构蛋白2(non-structural protein 2, Nsp2)一直是研究的热点,文章综述了Nsp2与遗传变异、病毒致病性、病毒复制、免疫调控和重组疫苗与分子标签等相关的研究进展。Nsp2基因序列在对疫苗毒株的鉴别诊断中发挥重要作用。     

猪蓝耳病和猪瘟疫苗免疫后抗体检测分析

[目的]仔猪在14日龄接种蓝耳病毒疫苗,25日龄接种猪瘟疫苗,检测接种蓝耳病疫苗和猪瘟疫苗后的免疫合格率。[方法]采用猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒检测抗体表达量。[结果]猪蓝耳病疫苗免疫3 d后,6.7%免疫个体为抗体阳性,免疫7 d后,26.7%免疫个体为抗体阳性,免疫14 d后,85%免疫个体为抗体阳性,免疫后30 d 100%免疫个体为抗体阳性;猪瘟疫苗免疫3 d后,13%免疫个体为抗体阳性,免疫7 d后,40%免疫个体为抗体阳性,免疫14 d后,58.3%免疫个体为抗体阳性,免疫30 d后,83.3%免疫个体为抗体阳性。[结论]仔猪在蓝耳病疫苗免疫3 d后抗体效价最低,30 d后免疫效果很好,接种猪瘟疫苗3 d后抗体效价最低,仔猪不足以抵抗病毒侵袭,虽然蓝耳病疫苗和猪瘟疫苗接种后30 d,抗体水平都达到了农业部规定的70%的标准,但是猪瘟疫苗免疫效果不能达到100%理想效果。     

Pig macrophages with site-specific edited CD163 decrease the susceptibility to infection with porcine reproductive and respiratory syndrome virus

Porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is recognized as one of the most infectious viral diseases of swine. Although Cluster of differentiation 163 (CD163) is identified as an essential receptor for mediating PRRS virus (PRRSV) infection, the important residues involved in infection on CD163 are still unclear. Therefore, it is very important to identify these key residues to study the mechanism of PRRSV infection and to generate anti-PRRSV pigs. In this study, we first generated immortalized porcine alveolar macrophage (IPAM) cell lines harboring 40-residues (residues 523–562, including R561 (arginine (R) at position 561)) deletion of CD163. PRRSV infection experiments showed that these IPAM cell lines were completely resistant to PRRSV infection. We then generated cloned pigs carrying CD163-R561A (an arginine (R) to alanine (A) substitution at position 561 of CD163). PRRSV challenge experiments in porcine alveolar macrophages (PAMs) isolated from the CD163-R561A pigs showed significantly lower susceptibility to PRRSV than that of CD163-R561 PAMs. Through this study, we show that CD163 523–562 contains essential residues for mediating PRRSV infection, and that CD163 R561 significantly contributes to PRRSV infection but is not essential for infection. These functional sites can therefore serve as new targets for understanding the mechanism of PRRSV infection. Furthermore, CD163-R561A pigs can be used as an important model for improving pig germplasm with resistance against PRRSV.     

A brief review of microRNA and its role in PRRSV infection and replication

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), a single-stranded RNA virus, mainly infects cells of monocyte/macrophage lineage. Recently, host microRNAs were shown to be capable of modulating PRRSV infection and replication by multiple ways such as targeting viral genomic RNA, targeting viral receptor and inducing antiviral response. MicroRNAs are small RNAs and have emerged as important regulators of virus-host cell interactions. In this review, we discuss the identified functions of host microRNAs in relation to PRRSV infection and propose that cellular microRNAs may have a substantial effect on cell or tissue tropism of PRRSV.     

Influence of Hypericum perforatum Extract on Piglet Infected with Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus

To study the influence of Hypericum perforatum extract （HPE） on piglets infected with porcine respiratory and reproductive syndrome virus （PRRSV）, enzyme-labeled immunosorbent assay （ELISA） and cytopathic effect （CPE） were used to determine in vitro whether HPE could induce swine pulmonary alveolar macrophages （PAMs） to secrete IFN-γ, and whether PRRSV titers in PAMs were affected by the levels of HPE-induced IFN-γ. HPE （200 mg·kg-1） was administrated by oral gavage to piglets infected with the PRRSV in vivo to observe whether HPE affected the viremia, lung viral titers, and weight gain of piglets infected with PRRSV. The results showed that HPE was capable of inducing PAMs to produce IFN-γ in a dose dependent manner and HPE pretreatment was capable of significantly reducing PRRSV viral titers in PAMs （P〈 0.01）. Administration of HPE to the PRRSV-infected animals significantly （P〈 0.05） reduced viremia over time as compared with the PRRSV-infected animals. But there was not significant decrease in lung viral titers at day 21 post-infection between the HPE- treated animals and the PRRSV-infected control piglets. There were no significant differences in weight gain over time among the HPE-treatment animals, the normal control, and the HPE control animals. The PRRSV-infected animals caused significant （P〈 0.01） growth retardation as compared with the HPE controls and the normal piglets. It suggested that HPE might be an effective novel therapeutic approach to diminish the PRRSV-induced disease in swine.     

Critical role of cytochrome c1 and its cleavage in porcine reproductive and respiratory syndrome virus nonstructural protein 4-induced cell apoptosis via interaction with nsp4

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) actively induces cell apoptosis both in vitro and in vivo,which can contribute critically to viral pathogenesis.Previous studies have shown that the PRRSV nonstructural protein 4(nsp4) is an important mediator of this process,but the underlying molecular details remain poorly understood.In this study,we found that the PRRSV nsp4 interacted with the mitochondrial inner membrane protein cytochrome c1(cyto.c1) and induced its proteolytic cleavage.Interestingly,the cleaved N-terminal fragment of cyto.c1 was found to exert apoptotic activity,which could cause mitochondrial fragmentation,resulting in apoptotic cell death.And RNA interference(RNAi) silencing experiments further confirmed the crucial role which cyto.c1 played in nsp4-and PRRSV-induced cell apoptosis.Thus,our data provide an important piece of mechanistic clues for PRRSV-induced cell apoptosis and also elucidate a novel mechanism for the 3 C-like proteases in this finding.     

CSFV和PRRSV二联RT-PCR检测方法的建立

参照GenBank中猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)基因保守序列,设计2对特异引物,通过对最佳反应条件的优化,建立了CSFV和PRRSV的二联RT-PCR检测方法,该方法可同时扩增得到2条与试验设计相符的443 bp(CSFV)和246 bp(PRRSV)特异性条带。应用该二联RT-PCR方法检测猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)结果均为阴性,证明该方法有良好的特异性。将已知阳性病毒PCR模板最高稀释倍数作为PCR的敏感度,结果表明该二联RT-PCR体系扩增的敏感度为10-3,可对CSFV和PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。     

猪波形蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用

为了研究波形蛋白在介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞过程中的作用,利用RT-PCR方法从PRRSV非易感细胞系猪肾细胞系PK-15细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达的重组猪波形蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用病毒抑制试验检测重组猪波形蛋白及多克隆抗体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用。结果表明,成功扩增猪波形蛋白基因并克隆入pET-28a载体,经诱导后得到高效表达,纯化后免疫兔子产生高价血清抗体(105)。病毒阻断结果表明,猪波形蛋白及多克隆抗体均能阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这为以波形蛋白为基础的PRRSV受体阻断抑制剂的研究提供了实验依据。