平菇原生质体制备及再生培养研究

平菇菌丝原生质体的释放以菌龄４～６ｄ的幼嫩菌丝,用２％Ｌｙｗａｌｚｙｍｅ采用０．６ＭＫＣｌ为渗稳剂在ｐＨ值为５．５、温度为３５℃、酶解２～２．５ｈ生长较好,可达１０７个／ｍＬ,孢子释放原生质体在１．５％溶壁酶和１．５％纤维素酶混合作用,同样外界条件下原生质体转化率可达１００％。原生质体再生以２号培养基在０．６Ｍ甘露醇的作用下,用载片悬浮滴式再生法,再生率可达１２．３％。     

菌丝培养条件的改进对香菇原生质体释放的促进效果

原生质体制备技术是通过体细胞杂交或基因转导进行种质改良的基础。探讨了菌丝培养条件对食用担子菌香菇原生质体释放的影响。在采用１．５％国产酶Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ的条件下，对接处物进行预切碎处理后，用ＭＹＧ培养基培养可使原生持产量提高７倍，而对再生率影响有大。大ＭＹＧ中添加１μｇ·ｇ＾－＾１α－萘乙酸（ＮＡＡ）使原生质体产量进一步提高１倍，酶解４ｈ时产量达７２×１０＾６／ｍＬ（０．１ｇ湿菌丝），显著高于     

蝉拟青霉原生质体形成与再生

比较了不同酶液,菌丝生长增减基,渗透稳定剂,酶解温度及菌龄等因素对原生质体形成的影响。用１．５％的溶壁酶,菌丝生长培养在为淀粉琼脂培养基,０．６ＭＫＣｌ为渗透稳定剂,温度２８℃,菌龄１６ｈ,可从所试菌株的菌丝获得大量的原生质体。０．６ＭＮａＣｌ为稳定液,黄豆粉培养基上原生质体再生率可达７．９７％。原原生质体释放和再生的形态学过程进行了描述和显微摄影。     

香菇细胞融合育种的预备研究——原生质体制备与再生

探讨了在森林资源综合利用中具重要意义的木腐性食用菌香菇(Lentinus edodes)的原生质体制备及再生条件。对用MYG培养的菌丝,采用以0.6mol甘露醇为稳渗剂的1.5％溶壁酶Lywallzyme进行酶解脱壁,在菌龄7d、酶解液pH值4.5、温度28℃、酶解4h时原生质体产量最高(6×10~6/ml,每0.1g鲜菌丝)。酶解温度>31℃时原生质体产量和再生率都明显降低。用SO培养基代替MYG可使原生质体产量提高1倍,但再生率显著下降(从8.5％下降到1.1％)。从产量和再生率两方面综合考虑,以MYG作为菌丝培养基效果较好。     

禾谷镰孢原生质体的形成与再生

研究报道了制备禾谷镰孢（ＦｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍＳｃｈｗ．）原生质体的方法及影响原生质体再生的条件。ＰＤＳ培养液中培养的菌丝和５％绿豆汁中产生的分生孢子，在２８℃下通过蜗牛酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％＋１．５％）酶解，２ｈ开始有原生质体释放，５ｈ左右达释放高峰，后趋于稳定。而以纤维素酶（３％）、溶菌酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）、纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）处理，原生质体形成效果较差。原生质体在ＰＤＡＳ高渗培养基上再生频率较高（２０％～３０％），在ＭＭＳ上再生频率较低，而在ＮＭＳ上原生质体则不能再生。在ＰＤＡＳ中加入ＫＣｌＯ３和ＭＮＮＧ对原生质体再生有一定影响     

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌

报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０－１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异；９０－１１２－４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨｏｏ ２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合组合的融合频     

黑曲霉和里氏木霉原生质体形成与再生条件选择 Ⅱ.菌龄,酶…

用正交试验比较了菌龄、酶种类及浓度配比、酶解温度和酶解时间４个主要因素，对黑曲霉ＡＭＳ１１和里氏木霉ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的影响。结果表明，ＡＭＳ１１和ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的４个因素的合理参数分别是：菌龄１４～１６小时和１８～２０小时；三种酶配比（纤维素酶：蜗牛酶：溶菌酶）（ｍｇ／ｍｌ）为（８：４：２）和（５：２．５：２．５）；酶解温度均为３２℃；酶解时间均为２～３小     

榆黄蘑(Pleurotus citrinopileutus)原生质体分离和再生的研究

试验从影响原生质体制备的诸多方面进行了研究,探索榆黄蘑原生质体制备的优化系统。试验时取鲜嫩的菌丝,用ＰＨ值为６．０的ＣＫｌ,蔗糖,甘露醇做酶解稳定液,３０℃下水浴酶解,酶解时间为４－５ｈ,此时榆黄蘑原生质体释放量最大,达到１０＾７个／ｍＬ。     

苧麻子叶原生质体的分离和初步培养

在成功建立麻悬浮细胞原生质体再生植株技术体系的基础上，对麻子叶原生质体的分离和培养进行了研究。以２℃冷藏或不冷藏的真叶初露期的绿色子叶，用３％ＣｅｌｌｕｌａｓｅＲ－１０，０．５％ＭａｃｅｒｏｚｙｍｅＲ－１０的ＣＰＷ０．６ｍｏｌ／Ｌ甘露醇混合溶液处理５ｈ，原生质体产量最高，可达５×１０６个／ｇ鲜重，原生质体以海藻酸钠包埋培养在附加２，４－Ｄ０．５或１．０ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的ＫＭ８ｐ培养基上，仅发生少数几次分裂。     

黑曲霉和里氏木霉原生质体形成与再生条件选择──Ⅱ．菌龄、酶配比及酶解温度和时间的选择

用正交试验比较了菌龄、酶种类及浓度配比、酶解温度和酶解时间４个主要因素，对黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）ＡＭＳ１１和里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的影响。结果表明，ＡＭＳ１１和ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的４个因素的合理参数分别是：菌龄１４～１６小时和１８～２０小时；三种酶配比（纤维素酶：蜗牛酶：溶菌酶）（ｍｇ／ｍｌ）为（８：４：２）和（５：２．５：２．５）；酶解温度均为３２℃；酶解时间均为２～３小时。     

黑曲霉AMS—11原生质体的制备

研究了酶系统，制备方法，培养基成分及Ｃａ＾＋２对纤维素酶高产菌黑曲霉ＡＭＳ－１１原生质体释放量的影响，结果表明，经ＹＧ液体培养基静置培养所获得的菌膜用粗糙圆头玻棒仔细充分地捣碎。在３２℃下以２％纤维素酶＋１％蜗牛酶混合酶液酶解３．５ｈ，可以获得最佳的制备效果。     

烟管菌T1原生质体制备及菌丝再生条件优化

[目的]研究烟管菌T1(Bjerkandera adusta)原生质体制备及菌丝再生的最佳条件。[方法]研究菌龄、渗透压稳定剂种类和浓度、pH、酶浓度及酶解时间对原生质体得率的影响,并研究再生培养基种类对菌丝再生的影响。[结果]在PDA液体培养基中,以28℃摇床培养3 d的菌丝最适于该菌原生质体制备;用0.5 mol/L KCl配制的含有15 mg/m L的溶壁酶于30℃下酶解3 h,获得原产量最高,达1.18×10~6个/m L;RM1培养基再生率最高,达1.22%。[结论]该研究优化了原生质体制备及菌丝再生条件,为进一步研究烟管菌噬藻分子机制提供理论依据。     

层出镰孢菌原生质体制备条件的研究

[目的]研究层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)原生质体的最佳条件,建立高效制备层出镰孢菌原生质体制备的方法.[方法]通过对菌丝体菌龄、酶解液组合、酶解反应温度及酶解时间等影响因素进行优化,对层出镰孢菌原生质体的制备条件进行研究.[结果]菌块在CMC液体培养基中25℃培养分生孢子3 d后,过滤离心后转移至YEPD液体培养基中培养12 h,该菌丝最适于层出镰孢菌原生质体的制备;用1.2 mol/L KCl溶液配制含有5 mg/m L裂解酶、25 mg/m L崩溃酶、0.05 mg/m L溶壁酶的酶解液在30℃下对菌丝酶解1.5 h,此时原生质体的数量最大,为2.47×10~9个/m L.原生质体再生培养时,使用40%PTC溶液恢复细胞壁,在TB3液体培养基中30℃过夜培养,离心后与TB3固体培养基混合后倒入平板培养,原生质体再生率可达39.75%.[结论]通过对菌丝体菌龄、酶解液浓度、温度、酶解时间等条件的优化,可提高层出镰孢菌原生质体的产量及再生率,为进一步研究层出镰孢菌致病分子机制提供理论依据.     

利用同源菌株融合改良农抗5102产生菌Ⅰ.原生质体的制备、再生和融合

报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合研究的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０～１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异：９０－１１为２～４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨ－１为２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的相对再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合各组合的融合频率是，９０－１１×ＷＨ－１为１０－２，ＦＲ－００８×－９０－１１以及ＦＲ－００８×ＷＨ－１均为１０－３。     

龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)原生质体制备与再生条件研究

报道了龟裂链霉菌（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｓ ｒｉｍｏｓｕｓ） 原生质体制备与再生最佳条件和该原生质体对抗生素的抗性结果。在 Ｓ生长培养基中加入φ＝ １ ％ 甘氨酸进行菌丝体培养２４ ｈ ,原生质体制备最佳条件为：溶菌酶浓度φ＝ ３ ％ 、酶解温度２８ ℃、酶解时间９０ ｍｉｎ ,其制备的原生质体数达到６ ．０ 亿个／ ｍ Ｌ 以上;原生质体最佳再生培养基为 Ｒ５ 再生培养,其再生率达到４６ ％ 。     

秦巴蛹虫草原生质体的制备及再生条件研究

【目的】研究秦巴蛹虫草原生质体制备及再生的最适条件,建立高效制备和再生原生质体的方法。【方法】以秦巴蛹虫草无性型菌株CM-16为材料,研究细胞壁裂解酶种类、酶解时间、酶解温度、菌丝体菌龄及稳渗剂种类对原生质体制备及再生效果的影响,并在单因素试验结果基础上进行正交优化试验。【结果】(1)以0.6mol/L NaCl为稳渗剂,用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1)℃对菌龄6d的菌丝酶解3h,原生质体的产量最高。(2)以0.6mol/L甘露醇为稳渗剂,用混合酶(质量分数1%纤维素酶和质量分数0.5%蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26±1)℃对菌龄5d的菌丝酶解2h,原生质体的再生率最高;验证试验结果表明,在此条件下,原生质体再生率平均为25.7%,此时原生质体平均产量为83.42×105 mL-1。【结论】对酶解温度、酶解时间、菌丝体菌龄、稳渗剂及酶系种类等条件的优化,可提高秦巴蛹虫草原生质体的产量及再生率。     

新抗生素B—3543生产菌原生质体制备和再生条件

新抗生素Ｂ－３５４３生产菌的菌丝在１号和２号培养基上生长最佳，用溶壁酶酶解经洗涤和过滤纯化，可制得纯度在９４％以上的原生质体，其再生率在７７％以上，在３１４株再生株中获得１株高产菌株Ｒ－２０３，传代后其效价在６５００Ｕ左右。     

鸡腿菇原生质体制备与再生研究

以鸡腿菇双核菌丝为材料,利用溶壁酶制备原生质体,采用单因素试验确定最佳条件。结果表明,原生质体产量最高的条件是取菌龄为5 d的液体静置培养的菌丝体,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,在酶解温度30℃、酶浓度20 g/L、菌丝量20 g/L的条件下酶解3 h,制备的原生质体量为2.5×107个/m L。将制备的原生质体稀释并涂布于再生培养基,再生率为10.9%,研究为鸡腿菇原生质体融合及优良品种选育提供研究基础。     

鲍鱼菇原生质体的制备与再生研究

以鲍鱼菇为材料,拟研究稳渗剂种类、酶解时间、菌丝量、菌龄对原生质体产量及再生率的影响。结果表明,原生质体制备的优化条件是取菌龄为10 d、液体静置培养的菌丝0.04 g,在以0.6 mol/L蔗糖作为稳渗剂的酶液(浓度为2%)中于30℃酶解2 h,获得原生质体的产量为1.2×10~7个/mL。在优化条件下得到的原生质体再生率达到0.30%;对再生菌落进行镜检发现,无锁状联合的原生质体单核菌株菌丝洁白,长势旺盛,超过了双核菌丝的长速。研究结果可以为鲍鱼菇原生质体融合选育新品种提供一定的基础。     

青花菜子叶和下胚轴原生质体的遗传转化系统

用根癌农杆菌共培养法将外源基因导入青花菜上海１号的无菌苗子叶及下胚轴原生质体。菌株为ＥＨＡ１０５,携带质粒ｐＭＯＧ４１０,含ＧＵＳ和ＮＰＴⅡ基因,实验得出其子叶芽分化率最高的激素组合为６－ＢＡ ５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ。原生质体以８￣１０℃暗培养５￣６ｄ,然后于２５℃光照８ｈ生长的无菌苗下胚轴切片游离出的密度最高,Ｋ８Ｐ培养基激素组合（ｍｇ／Ｌ）以２,４－Ｄ１．０＋ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．