番鸭"花肝病"的病原研究

从广西患“花肝病”的雏番鸭肝，脾分离到三株病毒，定名为NM1，NM2，NM3。该三株病毒能在番鸭胚和番鸭胚成纤维细胞上增殖。并产生细胞病变，人工感染1日龄番鸭死亡率达100%，但对鸡，康贝尔鸭和鹅不致病。该病毒对氯仿不敏感，耐热，耐酸，不被DNA抑制物所抑制。经超薄切片，磷钨酸负染，电镜观察到大量球形，实心（少量空心）病毒粒子，其大小为66-70nm，该病毒无囊膜。这是一株无囊膜的RNA病毒，其具体的生物学分类位置有待进一步研究。     

鸭疱疹病毒Ⅱ型（暂定名）的分离鉴定

自1990年以来，在福建、浙江和广东等省发生一种以双翅羽毛管淤血呈紫黑色、断裂和脱落以及皮下、脏器（肝脏、胰脏）和肠道（十二指肠、直肠和盲肠）出血为主要特征的新的鸭传染病，暂定名为鸭出血症。我们对从自然感染该病典型病死番鸭脏器中获得的1株含2种病毒粒子（直径大小分别为30－40mm和80－120mm)的分离物，以Ⅰ型雏鸭病毒性肝炎标准阳性血清进行连续4代中和后接种番鸭胚，收集死亡番鸭胚胚液进行病毒纯化、负染、电镜观察和SPF鸡胚接种试验证明获得单一病毒分离株（定名为鸭出血症病毒）。该病毒为不耐酸、不耐碱、不耐热、对氯仿处理敏感、核酸类型为双股DNA的有囊膜病毒，直径为80－150nm；对番鸭胚、鹅胚、麻鸭胚、半番鸭胚、北京鸭胚和SPF鸡胚的致 死率分别为100％、100％、78．3％、60％、82．1％和0％；对10－11日龄番鸭胚的ELD50为10^-7.78/0.2ml；无血凝活性，不凝集“O”型人、鸭、鸡、鹅、家兔、小鼠，豚鼠、猪和绵羊红细胞；经血清中和试验证明该病毒与Ⅰ型雏鸭肝炎病毒、雏番鸭细小病毒、雏鹅细小病毒、鸭瘟病毒无血清学相关性。据以上结果可将该病毒确定为疱疹病毒科成员，但鉴于其与鸭瘟病毒（鸭疱疹病毒Ⅰ型）无血清学相关性，则暂定名为鸭疱疹病毒Ⅱ型，此为国内外首次报道。     

番鸭呼肠病毒的分离与RT-PCR鉴定

从发病番鸭中分离到1株病毒,用该病毒接种番鸭胚,至第2代可引起鸭胚死亡,胚体出血,部分鸭胚肝脾有少量白点。分离毒经用RT-PCR方法进行检测,可与番鸭呼肠病毒标准株扩增出大小一致的特异条带,证实该分离毒为番鸭呼肠病毒。     

免疫鸭群中一株变异型番鸭呼肠孤病毒的分离与特性研究

本研究从广东省某发病番鸭场分离得到的呼肠孤病毒(DRV)混合有番鸭细小病毒(MDPV)疫苗株.采用MDPV阳性血清中和后,经2轮番鸭胚有限稀释克隆获得纯化的DRV.电镜观察病毒粒子呈球形、无囊膜、双层衣壳、直径约70 nm.F6代病毒滴度为log107.5 TCID50/0.1 mL,病毒能够致番鸭胚成纤维细胞产生细胞病变,并能够致死番鸭胚和SPF鸡胚,回归1日龄雏番鸭出现典型的肝脏点状或斑块状出血等特征性病变,与临床发病鸭相同.分离株S3基因核苷酸同源性与太湖流域2011年分离株DRV-TH 11最高,为99.9％,与福建番鸭源分离株MDRV-J 18为98％;与早期MDRV在66.8 ％～67.2％之间,处于不同进化分支上.本研究分离株对番鸭胚、SPF鸡胚及雏番鸭致病力强,而且其基因序列比早期分离株变异较大,应加强监测并及时筛选新疫苗株以有效防控该病的发生和蔓延.     

鸭副粘病毒的分离与初步鉴定

从疑为流感的病死鸭肝、脾和肾脏中分离到1株病毒,该病毒能凝集鸽红细胞,并能被康复鸭血清、新城疫标准阳性血清抑制,但不能被EDS、禽流感H5、H7、H9血清抑制;电镜观察见到形态不规则、囊膜表面具有密集纤突的病毒粒子,直径100～200nm.部分生物学特性表明:该分离毒具有较强的毒力,其对鸡胚和番鸭胚的最小致死量的平均致死时间(MDT)为43.6和48.6 h;接种鸡胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞均能引起细胞病变,且该病变能被康复鸭血清、新城疫标准阳性血清中和,而不能被GPV、MPV、H5、EDS血清所中和.人工感染1日龄雏番鸭和50日龄鸡均可发病并能回收到病毒.上述结果初步表明该分离毒为鸭副粘病毒.     

雏半番鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

自以肝脏、脾脏、胰腺、肾脏表面出现多量针尖大的白色坏死点和法氏囊出血为特征的病死雏半番鸭脏器中 ,以番鸭胚分离到病毒 ,经对分离的病毒株 (FZ2 株 )进行形态学观察、理化特性测定以及血清定性中和试验等 ,发现该病毒无囊膜 ,直径为 5 5～ 70 nm;对氯仿处理敏感 ,对乙醚处理不敏感 ;无血凝活性 ;可被鸡关节炎病毒阳性血清、雏番鸭呼肠孤病毒阳性血清所中和 ,但与鸡传染性法氏囊病病毒、鸡减蛋综合征病毒无血清学关系。据此 ,确定 FZ2 株病毒为呼肠孤病毒     

番鸭病毒性疾病--花肝病

1病原 “花肝病”病原为番鸭呼肠孤病毒。该病毒呈球形,正二十面体,立体对称,在超薄切片电镜中有时呈品格状排列,粒子直经为42-70nm,无囊膜,属无囊膜的RNA病毒。该病毒对氯仿不敏感,耐热,耐酸,不被DNA抑制物所抑制。不能凝集豚鼠、鸡、鸭、鹅、山羊、人的O型红细胞。该病原与禽呼肠孤病毒有一定的抗原相关性,可致死敏感番鸭胚、半番鸭胚和鸡胚,并能经接种种蛋感染出壳番鸭。     

山东省传染性支气管炎病毒分离株的电镜观察

从山东省分离到4株病毒株，经病理剖检、鸡胚传代，血凝检测、动物回归、电镜和免疫电镜观察确证为传染性支气管炎病毒。将分离毒分别接种SPF鸡胚，制备各自的阳性血情，经磷钨酸负染，电镜和免疫电镜观察。可见到典型的冠状病毒粒子，病毒的直径界于60－200mm之间，呈多形性，有囊膜，个别有纤突。病毒大量聚集，各株病毒在形态上无差异。     

禽呼肠孤病毒鸡源分离株的鉴定与人工感染试验

从临床患病鸡关节病料中分离到一株病毒，在电镜下观察到病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，外衣壳直径约75nm，内核约50nm；分离病毒株对酸、热有较强的抵抗力，对乙醚不敏感；病毒感染鸡胚成纤维细胞上能产生以融合细胞为特征的CPE；爪垫接种1日龄雏鸡表现出明显的病毒性关节炎临床症状，并伴有吸收障碍型和坏死型的病理变化；血清中和交叉试验表明，该病毒分离株与国内的2株番鸭源呼肠孤病毒（YH和YB）分离株和国外S1133呈不同程度的交叉反应。通过对分离病毒株进行电镜观察、理化特性试验、病毒感染力测定、致病性试验、血清学试验，可以确定该分离病毒为禽呼肠孤病毒。     

番鸭新病——花肝病的研究：Ⅰ．分离毒的致病必及感染途径试验

番鸭花肝的是近年流行的一种新的番鸭疫病，其特征性病变是死亡番鸭的肝、脾、小肠等部位出现灰白色的坏死点，本文自广东省主要疫区分离到几株病毒，这些病毒在番鸭胚上可继代繁殖，其胚液可使番鸭妇病。不同途径感染试验表明该病毒通过肌肉注射、爪垫部注射、口服，同居感染均可使番鸭发病和死亡，并具有典型病变，分离毒不能使半番鸭，本地鸭，鸡发病。     

鸭病毒性肝炎的病原分离和鉴定

从间接免疫荧光检测呈DVH阳性的病死鸭肝脏分离到3株(CD、HB、XC)病毒,电镜下病毒颗粒呈圆形、无囊膜,直径30～40nm,对氯仿、pH3.0、50℃,60min的处理不敏感,分离毒连续传代3次,全部鸭胚在24～60h死亡,胚体呈弥散性充血、出血,其致死鸭胚的能力能够被Ⅰ型DHV高免血清中和。分离毒人工感染1日龄雏鸭后出现与自然病例相同的临床症状和病理变化,并能重新分离到相同病毒。间接免疫组化检测自然病例和人工感染雏鸭的肝、脾、肾等均呈现DVH阳性。结果表明分离到的3株病毒均为Ⅰ型DHV,为有效预防DVH提供了有用的实验数据。     

番鸭细小病毒病疫苗毒株特性的研究

用患病雏番鸭肝脏和胰脏病料接种易感番鸭胚分离到一株病毒,经鉴定为细小病毒科、细小病毒属、番鸭细小病毒。本毒株首先在番鸭胚传3代适应后,转在鹅胚传38代,使12日龄鹅胚的致死时间稳定在第5～9天,致死率约98％,毒价ELD_(50)可达10~(6～7/0.2ml;M_(91)G_(26)鹅胚绒尿液接种1日龄易感雏番鸭已不引起发病,接种后20天,血清中琼扩抗体均为阳性。     

雏番鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

从洛江区临床发病鸭分离到2株病毒,2株分离病毒能够致死鸡胚,能被Ⅰ型鸭病毒性肝炎标准强毒高免血清特异性中和。分离毒株在鸡胚上传代培养,并测定ELD50分别为10-6.32/0.2 m L、10-5.49/0.2 m L;经动物回归试验,对1日龄雏番鸭的致死率分别为80%和70%,雏番鸭出现明显的角弓反张姿态,剖检可见肝脏出血斑、出血点,为鸭病毒性肝炎的典型症状,表明分离到的病毒为Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-I)。     

番鸭新病-花肝病的研究Ⅰ.分离毒的致病性及感染途径试验

番鸭花肝病是近年流行的一种新的番鸭疫病,其特征性病变是死亡番鸭的肝、脾、小肠等部位出现灰白色的坏死点.本文自广东省主要疫区分离到几株病毒,这些病毒在番鸭胚上可继代繁殖,其胚液可使番鸭发病.不同途径感染试验表明该病毒通过肌肉注射、爪垫部注射、口服、同居感染均可使番鸭发病和死亡,并具有典型病变.分离毒不能使半番鸭、本地鸭、鸡发病.     

番鸭"花肝病"病原的研究

文章对番鸭"花肝病"病原进行了研究,证实病原为番鸭呼肠孤病毒。该病毒大小为50nm-70nm左右,圆形,无囊膜;雏番鸭人工感染该病毒后可出现和自然病例相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒,鸡、麻鸭人工感染不发病;该病毒不凝集鸡、鸭的红细胞,能够在鸡胚、番鸭胚成纤维细胞上增殖并出现明显的细胞病变;核酸类型为RNA,琼扩试验表明与禽呼肠孤病毒有血清学交叉反应。     

山羊痘病毒NM株的分离鉴定

从内蒙古牛场疑似山羊痘病毒感染的病羊中分离到1株病毒,命名为NM株。取病羊的皮肤痘疹和水疱作病料样品,分别接种BHK-21传代细胞和10日龄SPF鸡胚。结果表明,BHK-21细胞出现了明显的、规律的细胞病变,鸡胚接种部位出现了明显的痘斑;NM株细胞毒和胚毒均能够被山羊痘病毒阳性血清所抑制。利用1对山羊痘病毒特异性检测引物对NM株病毒进行PCR扩增,获得445 bp片段,与预期大小一致。将扩增产物提纯后克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定正确后,对阳性克隆株进行序列测定,结果表明,NM株的基因片段与已发表的山羊痘病毒毒株的相应基因片段具有高度同源性,同源性在99.2%~100%之间。     

半番鸭胚中鹅细小病毒的分离鉴定及其基因组分子特征分析

通过胶体金试验、电镜观察及PCR扩增等方法,自半番鸭胚及孵化的雏半番鸭中分离获得了鹅细小病毒(GPV)毒株(命名为MDE株),并进行了病毒全基因组分子特征分析。结果表明,该病毒粒子为直径20~24nm的球形、无囊膜粒子。胶体金试验结果呈GPV阳性。该毒株基因组全长为5 106bp,与GenBank登录的15株GPV基因组序列相似性为93.2%~98.1%,其中与SH株及疫苗株SYG61v株等的相似性较高,而与半番鸭源的GPV重组病毒M15株相似性最低。基于病毒VP1和NS1基因的遗传进化分析表明,分离毒株MDE与GPV疫苗毒株的亲缘关系最近,处于同一个独立的分支上,与番鸭细小病毒的亲缘关系较远。与疫苗毒株SYG61v株比较,MDE株VP1区的糖基化位点增加了703NRTS糖基化位点。以上结果表明,本研究揭示了GPV可通过半番鸭胚垂直传播给雏鸭,丰富了GPV的生态学内容。     

鹅与番鸭溃疡性胃肠炎病原的分离鉴定

从患以胃肠道出血、溃疡为主要特征的急性、败血性传染病发病死亡的鹅和番鸭病料中各分离到 1株病毒 ,DQ和DQ M。病毒分离物对鸡胚、番鸭胚、鹅胚和番鸭均具有极强的致病性。血清学实验结果表明 ,DQ和DQ M属于禽Ⅰ型副粘病毒     

入孵种鸭胚病毒性感染的检测及禽坦布苏病毒的分离鉴定

本研究应用RT-PCR技术对孵化过程中死亡的不同品种种鸭胚进行常见病毒感染检测。结果表明,死亡的种鸭胚感染病毒种类多达9种,且首次从鸭胚中检测到禽坦布苏病毒(ATV)感染,不同品种的种鸭胚病毒感染率差异较大,以种番鸭胚感染率最高达58.82%。ATV囊膜蛋白(E)基因分析表明,3株种鸭胚ATV分离毒(PT15-4株、FJFQLL36株和PT15-27株)与GenBank中已发布鸭源ATV囊膜蛋白的核苷酸及氨基酸序列同源性分别在97.2%~99.8%及97.1%~99.4%之间,亲缘关系密切。动物试验表明,3株病毒对开产麻鸭的致病性不尽相同,其中PT15-4株和PT15-27株可引起麻鸭产蛋量显著降低及卵巢的出血病变,而FJFQLL36株病毒对麻鸭产蛋影响不明显,且未引起蛋鸭卵巢明显出血或卵黄液化病变。以上结果表明,我国种鸭胚中病毒性感染较为复杂,而且还出现了ATV的感染,尽管不同禽坦布苏病毒分离株间存在毒力差异,但均可从种鸭经卵传播到种蛋而成为新的传染源。     

鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定

通过鸡胚接种，从北京郊区某鸡场出现呼吸道症状并有肾肿大、苍白的鸡群中分离到一株病毒，该病毒能导致鸡胚出现侏儒胚；病毒大小为８５～１０３ｎｍ，表面有特征性纤突，排列稀疏均匀，在鸡胚内能干扰鸡新城疫病毒增殖，对乙醚敏感，属有囊膜病毒；该病毒不耐热，５６℃１小时即被更活；用本病毒回归２５日龄雏鸡，可使试验鸡出现典型的花斑肾，上述各项鉴定证明，该分离毒为肾型ＩＢＶ．此外，用本病毒制备的油乳剂灭活苗，基本上可抵抗该每株的攻击．