氨基糖苷类药物耐药新机制——16S rRNA甲基化酶的研究进展

从16S rRNA甲基化酶的发现、作用机制、基因环境、分布和起源等方面介绍了16S rRNA甲基化酶介导的氨基糖苷类耐药机制。阐明16S rRNA甲基化酶是在革兰氏阴性杆菌中新出现的介导对庆大霉素等氨基糖苷类高度耐药的酶；16S rRNA甲基化酶基因位于质粒和转座子上，具有易于传播和扩散的特点，成为临床抗感染的重要问题。     

山东地区禽源致病性大肠杆菌氨基糖苷类药物耐药性及耐药基因的检测

采用K-B纸片法对224株大肠杆菌进行5种氨基糖苷类药物的药敏试验,采用微量肉汤稀释法进行庆大霉素和阿米卡星最低抑菌浓度（MIC）的测定,三重PCR法检测全部菌株氨基糖苷类钝化酶基因ant（3’’）-Ia、aac（6’）-Ib和aph（3’）-Ⅱa,普通PCR法检测16S甲基化酶基因。结果显示：山东省禽源大肠杆菌对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为84.4%、57.1%、55.8%、46.9%和40.2%;3种钝化酶基因ant（3’’）-Ia、aac（6’）和Ib、aph（3’）-Ⅱa的检出率依次为49.6%、25.0%和22.8%,介导高水平耐药的16S甲基化酶基因RmtB的检出率为11.6%（26/224）,只有1株大肠杆菌检测到armA基因,没有检测到rmtA,且3种甲基化酶基因在低度耐药菌中检出率均为0;所检大肠杆菌中携带2种及2种以上耐药基因的菌株占33.5%（75/224）,有1株大肠杆菌同时携带4种耐药基因。结果表明,氨基糖苷类钝化酶及16S甲基化酶广泛存在于禽源大肠杆菌菌中,其耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,部分菌株的耐药性与耐药基因的检出率不一致,表明还存在其他耐药机制。     

氨基糖苷类药物高水平耐药16S rRNA甲基化酶的研究进展

16S rRNA甲基化酶的出现可直接导致革兰氏阴性菌对氨基糖苷类药物高度耐药,已成为临床治疗中面临的重大难题。作者简要概述了细菌对氨基糖苷类药物高水平耐药的16S rRNA甲基化酶的发现过程、作用机制、医学和兽医临床分布、遗传背景及扩散机制,以期引起对该类药物耐药机制的关注。     

氨基糖苷类药物分子作用机制及钝化酶抑制剂的研究进展

随着氨基糖苷类抗生素研究的不断深入,其作用机制已深入到分子生物学水平。为制止耐药菌的产生及传播,根据当前氨基糖苷类抗生素发展的趋势,钝化酶的抑制剂成了研究的新方向。     

氨基糖苷类抗生素耐药机制研究进展

分别从氨基糖苷类抗生素修饰酶、核糖体靶位修饰、药物的主动外排系统3个方面对近年来氨基糖苷类抗生素耐药机制的最新研究进展做以综述,以期为临床合理应用氨基糖苷类抗生素及控制致病菌氨基糖苷类耐药性提供参考。     

获得性16S rRNA甲基化酶的研究进展

外源获得性16S rRNA甲基化酶基因广泛分布于革兰阴性细菌中,介导对多种氨基糖苷类药物的高水平耐药。该酶能将S-腺苷-L-甲硫氨酸的甲基添加到16S rRNA氨酰tRNA识别位点的特异性核苷酸上,从而干扰氨基糖苷类药物与靶位点的结合。16S rRNA甲基化酶基因通常由转座子等活动性遗传元件介导并嵌入到可转移的质粒或染色体中,从而导致耐药基因广泛而迅速地传播。更令人担忧的是,16S rRNA甲基化酶基因经常与bla_NDM-1、bla_CTX-M和qnrB1等其他耐药基因偶联,介导对β-内酰胺类药物和氟喹诺酮类药物的多重耐药。对于多重耐药16S rRNA甲基化酶阳性菌引发的感染,治疗方法非常有限。迄今为止,至少已有30个国家和地区对16S rRNA甲基化酶进行了相关报道,由此可见,16S rRNA甲基化酶基因的全球传播正成为一个全球重大公共卫生问题。     

动物源性大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性及其耐药基因的检测

旨在调查大肠杆菌3种氨基糖苷类耐药基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb和arm A的携带情况,探究耐药基因与氨基糖苷类药物耐药表型的相关性。采用K-B纸片法探究70株大肠杆菌对6种氨基糖苷类药物的耐药性;采用PCR法检测全部菌株氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb及16S rRNA甲基化酶基因arm A。结果显示:70株大肠杆菌中对链霉素、卡那霉素、庆大霉素、妥布霉素、新霉素的耐药率依次是62.9%、42.9%、37.1%、35.7%和21.4%,耐药率最低的是阿米卡星为15.7%。70株大肠杆菌中检测出携带1个或多个耐药基因的菌株占总菌株数的32.9%,钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb的检出率分别是18.6%和15.7%,介导高水平耐药的16S rRNA甲基化酶基因arm A的检出率为4.3%,有1株大肠杆菌同时携带3种耐药基因。研究表明江苏南京、扬州、镇江、泰州、盐城等地区的大肠杆菌具有很严重的耐药性,其相关的耐药基因检出率与其所具有的耐药性呈正相关,部分耐药严重的菌株未检测到这3种耐药基因,提示可能存在其他耐药机制。     

鸡源致病性大肠埃希菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测

为了解鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性变化和钝化酶耐药基因的携带情况及耐药基因与耐药性的相关性,从陕西、河南、河北、山西、宁夏和甘肃6省(区)的部分规模化养鸡场的病、死鸡中分离鉴定320株致病性大肠埃希菌。采用K-B药敏纸片法检测分离菌对6种氨基糖苷类药物的敏感性,PCR方法检测6种氨基糖苷类钝化酶耐药基因,用DNA Star软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,鸡源致病性大肠埃希菌分离株对庆大霉素、链霉素、妥布霉素、卡那霉素、新霉素和阿米卡星的耐药率分别为53.4%、49.3%、37.5%、34.7%、22.8%和5.3%,对妥布霉素和卡那霉素耐药率呈上升趋势,而对庆大霉素的耐药率虽呈下降趋势,但仍维持在40%以上。3重以上耐药菌株占80%(256/320)。氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅱ、aph(3′)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅰ的检出率分别为50.9%、25.9%和3.1%,未检测到aac(3)-Ⅳ、ant(3′′)-Ⅰ和aph(3′)-Ⅱ基因。研究表明,分离的鸡源致病性大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性普遍存在,以多重耐药为主,且对妥布霉素和卡那霉素的耐药性不断上升。耐药基因aac(3)-Ⅱ和aph(3′)-Ⅰ的检出率与其耐药性呈正相关。     

rmtB阳性猪大肠埃希氏菌中氨基糖苷钝化酶分析

分析rmtB阳性猪大肠埃希氏菌中氨基糖苷钝化酶的流行特点。设计10对引物,采用PCR、RFLP和测序等方法检测分析rmtB阳性猪大肠埃希氏菌中的10种氨基糖苷钝化酶基因。采用微量稀释法测定rmtB阳性猪大肠埃希氏菌及其接合子对10种氨基糖苷类的敏感性。48株rmtB阳性猪大肠埃希氏菌中检测到7种氨基糖苷类钝化酶基因,检出率从高到低依次是aac(3)-II(85.8%)、aph(3′)-VII(77.6%)、aph(3′)-II(77.6%)、aadA1(34.7%)、aac(6′)-Ib(14.3%)、aac(3)-IV(10.2%)和aph(4)-I(8.2%);48株rmtB阳性猪大肠埃希氏菌对卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、西索米星、萘替米星、新霉素、链霉素、大观霉素及安普霉素的耐药率分别为100%、100%、100%、100%、100%、100%、79.2%、77.1%、89.6%和27.1%。其对氨基糖苷类抗菌药的耐药表型与钝化酶基因型的符合率最高约98%。研究结果表明,氨基糖苷钝化酶广泛存在于rmtB阳性猪大肠埃希氏菌中,它们与其他氨基糖苷类耐药机制共同介导受试菌对氨基糖苷类抗菌药的耐药性。     

猪源大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性以及耐药基因的检测

为指导临床合理用药,根据耐药表型和基因型研究耐氨基糖苷类药物猪源大肠杆菌的流行情况,采用K—B法检测大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性,同时用PCR技术扩增氨基糖苷类药物的耐药基因以明确其基因型。结果显示,60株临床分离菌中,耐氨基糖苷类抗生素菌株54株,耐药率为90％;aac（3）-Ⅰ基因PCR扩增均为阴性;aac（3）-Ⅱ基因检出阳性28例,阳性率为46．7％;aac（6’）-Ⅰ基因检出阳性54例,阳性率为90％。结果表明,耐氨基糖苷类药物的大肠杆菌比较普遍,氨基糖苷类耐药基因以aac（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅰ为主。     

95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查

为调查我国规模化猪场大肠杆菌细菌耐药性及其氨基糖苷类药物耐药基因的流行状况,采用K—B（Kirby-Bauer）法检测2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种抗生素的耐药性。结果表明：仅有多黏菌素B（85．6％）、头孢噻肟（85．3％）、阿米卡星（84．8％）和大观霉素（65．0％）相对敏感。480株大肠杆菌以多重耐药菌株为主,其中13、14、15、16和17重耐药较多,并且有26株18重耐药,14株19重耐药。采用WHONET5．4软件分析大肠杆菌耐药性,对阿米卡星、头孢噻肟和多黏菌素B耐药的猪场相对较少,分别是29、26和24个。采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因,耐药基因检出率分别是aadA1（65．89％）、aaC2（52．35％）、aaC4（12．91％）和aphA3（10．95％）。耐药基因型检出率较高的是aadA1／aaC2（29．61％）、aadA1（18．04％）。Excel软件统计相关耐药基因的猪场分布,表明耐药基因型aadA1／aaC2（43）、aadA1／aaC2／aaC4（20）和aadA1／aaC2／aaC4／aphA3（20）在猪场分布较普遍。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型与耐药基因型符合率较高的是阿米卡星（68．39％）。本研究表明猪肠道内常在大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性,也成为耐药基因的储存库,对猪场环境中耐药基因在致病菌和非致病菌间传播发挥重要作用,能够作为检测细菌耐药性的指示菌。     

我国18个省份猪源肠球菌耐药调查及分析

为研究我国猪源肠球菌的耐药情况,本研究采集18个省市猪养殖场的粪便样品836份进行了肠球菌的分离鉴定,并通过琼脂稀释法测定11种抗菌药物的最小抑菌浓度.结果 显示:从836份样品中共分离出225株肠球菌,其中屎肠球菌106株,粪肠球菌56株,小肠肠球菌34株,鹑鸡肠球菌17株,铅黄肠球菌7株,坚忍肠球菌4株,Enter...     

16S rRNA甲基化酶rmtB在猪肠道菌中的传播方式分析

为研究16S rRNA甲基化酶rmtB在猪肠道菌中的传播方式,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分别对来源于A、B猪场的48株rmtB阳性大肠埃希氏菌进行基因分型;用膜接合试验研究rmtB基因的水平传播方式;用微量稀释法对rmtB阳性菌及其接合子进行药敏试验。有45株rmtB阳性大肠埃希氏菌(45/48)能进行PFGE分型,可分为28种不同的PFGE基因型。其中来源于A猪场的20株菌可分为12种基因型,来源于B猪场的25株菌可分为16种基因型;46株rmtB阳性菌可以通过接合试验将rmtB基因及其介导的耐药性传递给受体菌E.coliC600和E.coli488 Rifr,接合频率从4.6×10-13~3.0×10-6不等,接合子对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、西梭米星、萘替米星、庆大霉素6种二脱氧链霉胺类抗生素均高度耐药(MIC≥512μg/mL)。结果表明,rmtB基因位于接合性质粒上,该基因在两猪场的大肠埃希氏菌中既存在克隆传播,又存在水平传播,以水平传播为主。     

鱼源温和气单胞菌对氨基糖苷类和四环素类抗生素的耐药性分析

为探究温和气单胞菌对氨基糖苷类和四环素类抗生素的耐药性,试验采用PCR法检测10株来源不同的鱼源温和气单胞菌对氨基糖苷类抗生素的4种耐药基因（aph（3'）-Ⅱa、ant（3″）-Ⅰa、aac（6'）-Ⅰb、aac（3）-Ⅱa）及四环素类抗生素的3种耐药基因（tetA、tetC、tetM）的表达情况,并利用K-B纸片扩散法对6种抗生素进行耐药表型分析。结果显示,10株温和气单胞菌对氨基糖苷类耐药基因aph（3'）-Ⅱa、ant（3″）-Ⅰa、aac（6'）-Ⅰb的检出率分别为20%、30%、20%,未检测出aac（3）-Ⅱa基因;对四环素类的耐药基因tetA、tetC、tetM的检出率分别为70%、20%、60%。K-B纸片扩散法结果显示,10株菌对四环素耐药率最高,对链霉素敏感,对庆大霉素、卡那霉素、多西环素、米诺环素高度敏感。结果表明,本次分离的温和气单胞菌对氨基糖苷类和四环素类抗生素具有一定的耐药性,为深入了解温和气单胞菌的耐药机制提供参考。     

规模化猪场仔猪致病性大肠埃希菌的耐药性检测

用NCCLS法选用20种抗生素对青海地区4个规模化猪场流行的18株致病性大肠埃希菌进行了药物敏感性试验。结果表明,18株菌株对20种药物均有不同程度的耐药性,其中6重耐药2株(2/18,11.1%),7重耐药2株(2/18,11.1%),8重耐药2株(2/18,11.1%),9重耐药3株(3/18,16.7%),10重耐药4株(4/18,22.2%),11重耐药1株(1/18,5.6%);抑菌作用最强的为复达欣(17/18,94.4%),其次为菌必治(16/18,88.8%),氯霉素(15/18,83.3%),氧氟沙星(14/18,77.7%),阿米卡星(14/18,77.7%),而青霉素完全没有抑菌作用。     

广东水禽源大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类耐药基因研究

为了调查广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物耐药现状和耐药基因的流行情况,探索大肠埃希菌的氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型之间的关系,本研究采用琼脂梯度稀释法测定251株广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药性和采用PCR方法检测耐药基因。药敏试验结果显示,大肠埃希菌对链霉素耐药较严重,鸭源和鹅源的耐药率分别为81.58%和75.43%,对庆大霉素和卡那霉素较敏感,耐药率分别为25%和54.86%,对阿米卡星最为敏感,其中鸭源的菌株耐药率仅为1.32%。PCR方法检测显示,aadA1和aph(3′)-1检出率较高,为84.6%和91.9%,表明携带aadA1和aph(3′)-1耐药基因的水禽源大肠埃希菌在广东地区呈流行趋势。耐药基因型与耐药表型相关性分析结果显示,耐药基因rmtB的携带与4种药物(庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素和壮观霉素)耐药株的产生具有显著相关性,表明耐药基因rmtB对大肠埃希菌耐药株的产生起重要的作用。本试验结果可为指导广东地区水禽大肠埃希菌病的临床用药提供理论基础和研究大肠埃希菌的耐药基因提供相关的数据。     

92株猪腹泻大肠杆菌的耐药性分析

分析92株猪腹泻大肠杆菌的耐药性,为临床合理用药提供理论依据。采集腹泻病猪直肠拭子,分离、鉴定大肠杆菌,采用微量稀释法测定分离菌对17种抗菌药物的敏感性。结果表明,从92份腹泻直肠拭子样品中共分离鉴定出92株大肠杆菌,对17种抗菌药物的耐药率从高到低依次为磺胺甲噁唑（100%）、甲氧苄啶（100%）、卡那霉素（89%）、庆大霉素（80%）、氯霉素（78%）、链霉素（76%）、新霉素（76%）、四环素（73%）、大观霉素（72%）、恩诺沙星（66%）、氨苄西林（50%）、阿米卡星（45%）、氟苯尼考（32%）、安普霉素（27%）、利福平（23%）、头孢唑啉（22%）、头孢噻呋（0%）;所有菌株均为多重耐药菌株,92株菌的耐药谱型为81种,菌株最多对14种药物耐药,最少对3种药物耐药。研究结果表明,92株猪腹泻大肠杆菌耐药谱广,耐药率高。     

Tetracycline Resistance of Enterobacteriaceae Isolated From Feces of Synanthropic Birds

Tetracycline is a broad-spectrum antibiotic which is commonly used in humans and animals for treatment of bacterial infections. Therefore, tetracycline-resistant Enterobacteriaceae species found in the nature, humans, and animals are usually considered a serious health concern. The feces of birds that live with humans may be a source for of these antibiotic resistant bacteria. For this reason, presence of tetracycline-resistant Enterobacteriaceae in bird droppings collected from 18 different breeders and pet shops fed in Istanbul was investigated by cultural and molecular methods in terms of the presence of that a/b gene. In addition, susceptibilities of isolates to various antibiotics were also determined. The current study reported that Enterobacter cloacae, Citrobacter freundi, Escherichia coli, Edwardsiella spp., Enterobacter spp., Escherichia vulneris, Klebsiella pneumonia, Pantoea agglomerans, Proteus mirabilis, Pantoe spp., Pseudomonas spp., Serratia marcescens, Salmonella spp., Shigella spp. were isolated from the samples. Ninety-seven of the isolates (97/150) were resistant to tetracycline (65.2%). In addition, the isolates were resistant to other antibiotic medications and 114 of them (58%) evaluated as multi drug resistant. The tet (A) and tet (B) genes were found in bacteria isolated from synantrophic birds’ feces as 46.6% and 8%, respectively. Although working conditions are limited, the results obtained provide baseline information regarding antibiotic resistance to Enterocatericeae isolates obtained from captive birds’ feces. Thus, the results of the present study emphasize the necessity of genotypic resistance research in future studies to help maintain antibiotic treatment efficacy for Enterocatericeae infections.