酶联免疫吸附技术—Ⅰ酶联免疫吸附法(ELISA)实验技术

从植物检疫的任务着眼,为了防止传染性病害的传入和散布,早期准确诊断是十分重要的。由于这个原因,高度敏感和特异性强的血清学诊断方法已经得到广泛的应用。随着免疫学理论的进展,血清学实验技术也有很大发展,主要表现在抗原、抗体纯化,操作技术的微量化、自动化、标准化,以及荧光素、同位素、特别是酶标记抗体球     

酶联免疫吸附试验(ELISA)方案

A.试剂1、饱和硫酸铵溶液煮沸溶解足够的(NH_4)_2SO_4,最少764克/升水放凉到室温。2、磷酸盐缓冲盐水(PBS),pH7.4。8.0克 NaCl0.2克 KH_2PO_42.9克 Na_2HPO_4.12H_2O0.2克 KCl0.2克 NaN_3将各种成分溶解在800毫升蒸馏水中,加到1,000毫升,核对 pH。3、吐温 PBS 液加1.0毫升吐温20到1,000毫升 PBS 液中,     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测花生种子带毒的研究

 利用花生上分离到的花生轻斑驳病毒(PMMV),黄瓜花叶病毒CA株系(CMV-CA),花生矮化病毒Mi株系(PSV-Mi)所制备的抗血清,从中提取IgG、应用ELISA间接法检测花生种子,在花生种子中不程度地都检测出带有PMMV、CMV、PSV病毒,而且有复合带毒现象。经催芽的花生种子子叶、胚芽及胚根分别用PMMV和CMV免疫制备的抗体进行检测,花生的上述三部分均带有PMMV和CMV病毒,且胚芽中病毒量最高。萌发种子及未萌发种子的子叶无论从带毒率还是病毒含量上均看不出明显的差异。ELISA间接法由于直接利用商品酶标抗体,简化了试验程序,利于对种子带毒进行快速检测。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测豆类种传病毒的研究

本文介绍使用微量板酶联免疫吸附法(ELISA)检测TMV(杆状)、SMV(线状)、CMV(球状)、AMV(杆菌状多粒体)四种不同形态、不同分类组群的病毒。此法非常灵敏,能够检测病毒提纯液的最低浓度为7.6～10亳微克/毫升,也能检出稀释1563～10240倍病叶粗澄清液中的病毒,灵敏度比琼脂双扩散法高1000倍以上。 ELISA可以直接检出单粒种子中的病毒,而且可以分别检出单粒种子不同部位如大豆的种皮、种胚、胚乳及胚根中的病毒存在。该法适用于检测大量标样,对植物检疫来说,这是一个很好的方法。     

酶联免疫吸附反应(ELISA)在烟草病毒病检测中的应用

本文综述了酶联免疫吸附分析法(ELISA)在烟草病毒检测中的应用。对EIISA的基本类型,改进和提高灵敏度的方法进行了分析,并阐述了该技术的某些发展趋势。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测天津近郊番茄病毒病类型的研究

 1986年度以13种血清为抗体,应用ELISAN接检测了305份天津近郊番茄抗原标样,检测出:TMV43.28%,CMV33.44%,PVY11.15%.PVX9.18%等9种病毒类型.     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测天津近郊番茄病毒病类型的研究

1986年度以13种血清为抗体,应用ELISAN接检测了305份天津近郊番茄抗原标样,检测出:TMV43.28%,CMV33.44%,PVY11.15%.PVX9.18%等9种病毒类型,其中还首次检测出国内在番茄上尚未报道过的番茄黑环病毒     

酶联免疫吸附技术——Ⅲ酶联免疫吸附法在检测植物病毒上的应用

一、酶联免疫吸附法(ELISA)概述1966年 Nakane 等及 Avrameas等,分别报道用酶代替荧光素标记抗体,作生物组织中抗原的鉴定及定位。随后发展用于鉴定免疫扩散及免疫电泳板上的沉淀线。Miles(1968)等描述了如何在免疫测定中用酶代替同位素。Avrameas(1969,1971)试验使抗体与酶结合,并进行了检测抗原的基础试验。继而由     

酶联免疫吸附测定(ELISA)检测苏云金杆菌伴孢晶体蛋白质研究

用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Bt伴孢晶体毒素蛋白质,最低可检值7.79ng/0.15ml,灵敏、精确,具高度专化性。测定标准品HI—1—S—1980和Bt乳剂产品中伴孢晶体蛋白质含量,分别为108.06mg/g粉剂和4.57—6.17mg/ml乳剂。用标准品与待测样品(Bt乳剂)的晶体蛋白质含量,就可计算出待测样品的相对毒力效价。ELISA与昆虫生测之间有良好的相关性。     

甲萘威酶联免疫吸附分析技术研究

合成了两种不同结构的甲萘威半抗原并与载体蛋白质共价偶联制备人工抗原。以人工抗原免疫动物获得对甲萘威具特异性的高效价抗体 ,建立并优化了痕量甲萘威的竞争性酶联免疫吸附测定法。该法测定甲萘威的线性浓度范围为 10 1～ 10 -4 μg/ml,检测限低于 0 .0 1ng/ml。其他结构类似的氨基甲酸酯类杀虫剂对甲萘威的分析无干扰。     

应用酶联免疫吸附试验法鉴定几种主要马铃薯病毒

制备了PVX,PVY_o,PVY~n,PVA,PVS,PVM,PLRV和TRV等8种主要马铃薯病毒抗体的辣根过氧化物酶结合物,在检测黑龙江省马铃薯主栽品种克新一、二、三、四号等品种的植株样品1155份和800余份正在脱毒中的试管苗样品中,发现上述8种马铃薯病毒在几个主栽品种中的侵染率较高,而且大多数感病植株是由3至7种病毒复合侵染,并首次查明本省存在PVY~n和PVM病毒。对不带上述8种病毒的样品又用双向反向聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定带马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle Tuber Viroid)状况,现已获得无上述8种病毒和类病毒的种植材料。     

用酶联免疫吸附技术（ELISA）检测水稻细菌性条斑病菌的研究

兔抗 Xanthomonas campestris pv.oryzicola 抗血清经提纯得特异性免疫球蛋白 IgG,用过典酸钠法标记获辣根过氧化物酶标兔抗 X.c.pv.oryzicola IgG 结合物。ELISA 双抗体夹心法和间接法的灵敏度分别为10~2～10~3个菌/ml 和10~4～10~5个菌/ml,这两种方法检测稻谷带菌的结果与用七叶苷选择性培养基分离及琼脂双扩散验证结果一致,双抗体夹心法的灵敏度和特异性比间接法高,从制样到完成检测约需40小时。检测结果不但可以目测定性,还可用酶联免疫检测仪所测得的 OD 值在本试验制作的曲线上查出稻谷带菌量。     

大豆花叶病毒的酶联免疫吸附剂测定(ELISA)

 大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus简称SMV),经聚乙二醇沉淀、差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯后免疫家兔。得到效价为512-1024的抗血清。免疫球蛋白IgG以饱和硫酸铵沉淀和DE32柱层析提纯,用过碘酸盐氧化法制备标记抗体。ELISA测定方法为双抗体夹心法。     

用酶联免疫吸附法检测番木瓜的两种病毒病

同属于马铃薯Y病毒组的番木瓜环斑病毒P型(PRSV—P)和番木瓜叶变形花叶病毒(PLDMV)能在番木瓜上引起症状相似的病害。这两种病害仅根据症状难以区别。采用双向抗体夹层的酶联免疫吸附法,可以上述两种抗体血清的1000倍稀释液对被侵染的番木瓜的天然提取液进行检测。     

用酶联免疫吸附技术检测柑桔溃疡病初报

长期以来,对柑桔溃疡病的鉴定和检测,采取病原分离、生理生化等常规技术,不仅时间长,还需要较多的设备仪器,不适应植检工作对检测技术快速、准确、方便的要求。四川省植检站同四川农业大学协作,应用血清学先进技术——蔼联免疫吸附技术检测柑桔溃疡病菌,研究结果用该技术的间接法和双抗体夹心法都能在40小时内快速、准确(灵     

应用酶联免疫吸附法鉴定粘虫的捕食性天敌

试验采用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定捕食性天敌的消化道内容物。ELISA 方法敏感、快速、便于应用。用此法鉴定粘虫低龄幼虫抗原的最小检出量为0.1mg(虫重)/ml,经吸附处理的抗血清对粘虫幼虫具有高特异性而与麦蚜和天敌无交叉反应。粘虫幼虫被丁纹豹蛛取食后的最长可测时间为9.5小时(食1头)和23.5小时(食3头)。对麦田中12种天敌的鉴定结果表明:七星瓢虫和蜘蛛是粘虫低龄幼虫的主要捕食性天敌。ELISA 结果与室内测定的天敌捕食量作了比较。     

化学防治中的几个问题(一)

近三、四十年来,化学农药的使用,在确保农业丰产与预防传染疾病等方面起了不可磨灭的作用,但由于长期的连续使用化学农药,也确实带来了不少问题。我们对化学防治中所产生的问题,既不能等闲视之,又不能掉以轻心;要研究分析,正确对待,加以解决。     

化学防治中的几个问题(二)

毒性问题 农药能防病灭虫,但有些农药对人畜亦有较大的毒性,在生产、运输、使用的过程中,如果处理不当,可能引起中毒事故。 当然,一般化学药物,都有不同程度的毒性,使用时都应该注意。有人(Bubois及Geiling)曾把化学药品的急性口服毒性,以致死中量(LD_(50))为标准,分为六类:(1)剧毒(1毫克/公斤以下),(2)高毒(1—50毫克/公斤),(3)中毒(50—500毫克/公斤),(4)稍毒(0.5—5克/公斤)(5)无毒(5—15克/公斤),(6)无害(15克/公斤以上)。作为农药而论,由     

酶联免疫吸附技术在小麦丛矮病测报中的应用研究

小麦丛矮病是我国北方麦区的一种主要病害。七十年代,河北省发生普遍而严重,八十年代初,我省的部分地区发生较重。1983年聊城地区发病面积达60余万亩,近8万亩绝产,对小麦生产构成了严重威胁,自1982年我省将丛矮病列为主要测报对象之一。小麦丛矮病的病原为小麦丛矮病毒,该病毒寄主范围广,除侵染小麦外,还侵染多种禾本科杂草,它的传毒介体是灰飞虱[Laodelphex striafellus(Fallen)]。小麦丛矮病的测报主要依据灰飞虱的带毒率和丛矮病