对于血清制造工作中“防止污染”的几点体会

血清对一般细菌来说是一种良好的培养基,在生物药品制造中这种产品最容易污染,这个问题是制造工作者经常碰到的,我厂为了和各兄弟厂取得联系,交流经验以达到今后工作共同提高的目的,茲将二年多的时间内,在制造抗氣肿疽血清中每批40、000毫升左右而未污染的几点体会作一简单介绍,供各兄弟厂参考,并请指正:     

标准化无菌及支原体检验培养基应用试验

经微生物促生长及灵敏度检测合格的无菌及支原体检验培养基各3批,分别在6个兽用生物制品企业进行了应用试验。抽检疫苗52批和半成品抗原5批,3批无菌检验培养基检测结果一致,疫苗2/52批、半成品抗原3/5批污染。禽源支原体检验培养基抽检样品17批、非禽源支原体检验培养基抽检33批及血清支原体检验培养基抽检10批,3批培养基检测结果一致,均无支原体污染。     

防止霉菌污染的经验教训

1、污染情况: 广东省在三、四月份天气温暖潮湿,霉菌极易生长。我厂统计上半年污染、损失很大,如猪丹毒菌苗制造污染,占制造量25.6％,分装污染,占分装量10.8％,猪肺疫菌苗制造污染,占制造量23％,分装污染占分装量32.4％,家禽出败制造污染占制造量5.6％,分装后污染占分装量15.5％。     

兽用生物制品生产用牛血清质量标准研究——牛血清对Sp2/0细胞增殖试验研究

为制定兽用生物制品生产用牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准,将处于对数生长期的Sp2/0细胞分散,配制成50万/mL细胞悬液,用含10%不同牛血清的MEM营养液,在96孔细胞培养板上作对倍稀释,在5%CO2培养箱37℃培养48 h,计数每种血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率。结果表明,胎牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为20%-26%,犊牛血清对Sp2/0细胞的绝对克隆形成率为12%-18%。以胎牛血清作为标准参考血清计算不同牛血清对Sp2/0细胞的相对克隆形成率,3批胎牛血清的相对克隆形成率均在80%以上,6批有效期之内的新生牛血清的相对克隆形成率为50%左右。因此,将兽用生物制品生产用胎牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于80%;新生犊牛血清对Sp2/0细胞增殖试验的质量标准规定为对标准血清相对克隆形成率不低于50%。     

提高猪瘟疫苗效价的方法

从成都修改规程会议后,我们杭州生物药厂以批修整风为纲,疫苗组全体职工认真学习《猪瘟兔化弱毒乳兔组织冻干疫苗制造及检验规程》(草案),找差距、分析原因,采取了一些措施,产品质量有所提高。1973年1—4月份生产137批(共计1,247万头份)产品中,产品合格率由1972年的98.77％提高到100％,污染率下降了20.7％,重检率下降13％(详见下     

猪传染性胃肠炎病毒N蛋白原核表达和间接ELISA检测方法的建立

试验构建了pET28a-TGEV-N重组表达质粒,完成TGEV N蛋白的表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting分析,表明表达产物N蛋白可被猪TGEV阳性血清识别。用TGEV N蛋白作为诊断抗原,建立了检测TGEV血清抗体的间接ELISA检测方法,该方法批内、批间重复试验变异系数均小于5%;检测血清的特异性为100%,假阳性率为0,假阴性率为5%,与7种常见猪病血清无交叉反应。针对临床血清,用该方法检测结果与中和试验结果相比,符合率为100%。该方法能够快速、有效地检出TGEV抗体,重复性和特异性好,为标准化诊断试剂盒的开发奠定了基础。     

驴抗猪繁殖与呼吸综合征病毒IgG注射液的制备工艺及质量监控

用繁殖与呼吸障碍综合征病毒灭活抗原加佐剂接种关中驴 ,采用基础免疫和强化免疫程序 ,于接种后 9～ 1 1d采集其血浆 ,从中分离 ,提纯免疫球蛋白IgG。制备出抗PRRSV特异性的IgG注射液。对制备出的五批IgG注射液产品进行了血清中和试验 ,结果显示IgG抗体效价均达 1∶32 0以上 ,表明该法可以成功制备抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒免疫球蛋白IgG注射液 ,并对其制备工艺及质量监控进行了多次试验 ,结果显示该生物制剂制造的工艺流程重复性好 ,IgG获得率较理想 ,质量稳定     

管道化培养与常规转瓶培养BHK21细胞的比较与分析

本试验在常规转瓶培养BHK21细胞的基础上,推出管道化培养BHK21细胞,旨在控制污染,提升产品质量。通过此工艺的革新,在降低细胞污染率和淘汰率、提高产品质量、提高工作效率和产能、降低劳动强度等方面均起到了很大的作用。给大规模动物细胞培养提供了可靠的保障。     

牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

为建立一种简单快速、敏感特异、高通量的牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,采用原核表达方法对BVDV E2基因中免疫原性强的1段序列进行截短表达,获得了具有良好反应活性的重组E2蛋白,以重组E2蛋白为包被抗原建立了检测BVDV抗体的间接ELISA方法。结果显示:该方法检测牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)阳性血清均为阴性,检测BVDV抗体的灵敏度可达1∶12 800,批内和批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%,与中和试验的符合率为94.44%。应用该方法检测国内外5个生产厂家的53批次细胞培养用牛血清样品,阳性污染率达39.62%;检测589份临床牛血清样品,阳性感染率为34.80%。研究表明,建立的BVDV重组E2蛋白间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和适用性,为BVDV感染的监测提供了重要工具。     

猪丹毒弱毒冻干苗的保存条件对存活菌数的影响

猪丹毒弱毒冻干苗在我厂正式生产只有一年多时间,在这期间,丹干苗小组曾结合生产在制造工艺和保存条件等方面作了若干项目的试验,这对于促进我们严格遵守《规程》,提高产品质量,有很大帮助。现将保存条件对丹干苗存活菌数影响的试验资料整理如下: 残余水份对存活菌数的影响由于我们生产丹干苗经验不足,曾一度出现水份高的批数较多,为保证产品质量,我们第一次对数十批水份超过4％的产品进行了重新计数,同时抽计了9批水份4％以内的合格产品作对照。为求充分掌握数据,第     

生物制品中支原体污染及清除方法的研究进展

支原体是生物制品污染中较常见的一种微生物,它可以污染细胞、病毒批、血清等制品,给科研及生物制品产业带来危害。文章简要介绍了支原体污染生物制品后带来的危害,并对清除支原体方法的研究进展进行了综述。     

犊牛血清的检验

对我厂外购4个不同厂家的46批血清分别进行了无菌检验、细胞培养观察和口蹄疫抗体检测。结果表明,有12批出现细菌污染;1批细胞培养贴壁分裂慢,形态差,不符合细胞生长要求;所有样品均为口蹄疫抗体阴性。     

饲喂赛乐锌对奶牛血液生化指标和生产性能的影响

[目的]通过饲喂试验,探究日粮中添加赛乐锌对奶牛生化指标和生产性能的影响。[方法]将试验奶牛随机分为4个处理,每个处理2个重复,采用4×4拉丁方设计,进行饲喂试验。[结果]表明,在奶牛日粮中添加350mg/kg的赛乐锌,奶牛血清锌浓度和血清碱性磷酸酶(AKP)活性显著提高(P0.05);各试验组血清尿素氮浓度呈下降趋势,但差异不显著(P0.05)。[结论]在不影响乳脂率和乳蛋白率的前提下,显著提高奶牛的产奶量,牛奶中乳锌的含量显著提高,使牛乳的品质得到很大程度的提升。     

广西地区配合饲料霉菌毒素污染状况调查研究

对广西分布在10个不同市县的19个规模化种猪场30批种猪配合饲料及全区的猪、牛、禽、鱼配合饲料47批,合计77批全区有代表性的饲料样品进行了6种常见霉菌毒素的检测,结果表明:①所测饲料普遍受到6种霉菌毒素的污染,呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、T-2毒素和黄曲霉毒素B1的检出率为100%。呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素在所测饲料中污染较为严重,超标率为10.0%～100%;T-2毒素、赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B1污染相对较轻,未超标。②所检种猪配合饲料中至少含有一种霉菌毒素的污染率为100%,同时含有5种所检霉菌毒素的污染率为52.6%,同时含有2种超标的霉菌毒素(呕吐毒素和伏马毒素)的污染率为36.8%。③种猪场配合饲料比全区各地配合饲料样品污染要轻。     

2种蓝舌病ELISA抗体检测试剂盒的比较和分析

为了验证云南出入境检验检疫局检验检疫技术中心自主研发的蓝舌病病毒C-ELISA抗体检测试剂盒(YN BTV C-ELISA)的可应用性,将YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒与美国IDEXX公司研制的蓝舌病病毒VP7蛋白抗体ELISA检测试剂盒对田间牛羊的1 028份血清样本进行对比检测试验,并使用YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒对15份检出的已知背景血清进行批内和批间可重复性试验。YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒相对IDEXX公司蓝舌病病毒ELISA抗体试剂盒的符合率、敏感性、特异性分别是98.44%、98.03%、98.85%,两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0.97。批内试验强阳性、弱阳性变异系数在0.23~1.81之间,阴性血清变异系数在3.94~6.64之间,批间试验强阳性、弱阳性变异系数在0.26~2.35之间,阴性血清变异系数在3.55~8.51之间。结果表明:YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒的符合率、敏感性、特异性均较高,具有高度的可靠性、一致性和真实性。YN BTV C-ELISA抗体检测试剂盒的批内和批间有高度的重复性,在蓝舌病的诊断中具有良好的实用价值。     

鸡胚源疫苗中污染霉形体的对策——Ⅲ.热力清除制苗用鸡蛋中霉形体防止活毒疫苗中霉形体污染在工厂化生产中的应用

在工厂生产条件下,对于准备用于生产鸡新城疫弱毒疫苗的8批鸡蛋次第随机分别取其半数左右先行以45℃经14小时预处理,而后再与另一半未处理的鸡蛋同时入孵,接种病毒(LaSota或Ⅱ系)和制造疫苗,共计处理鸡蛋3936枚,未处理对照组4549枚,结果证明,处理组与未处理的对照组的受精蛋制苗利用率平均值分别为84.25%和83.62%,预处理未降低鸡蛋的利用率。制成的疫苗对鸡胚半数感染量平均值分别为8.27和8.22,达到疫苗规定效力要求,预处理不影响疫苗的效力。八批疫苗中除一批因意外事故未完成霉形体检查外,7批处理组的疫苗皆未检出霉形体,而对照组7批中有5批检出了霉形体。说明预处理已消灭了鸡蛋中污染的霉形体。这种方法可以用于疫苗工厂制造无霉形体污染的疫苗。     

山羊抗小鹅瘟血清的研制

多年来,用鹅抗小鹅瘟高免血清进行紧急预防或治疗,起到了良好的效果。但是大量制造鹅抗小鹅瘟血清,无论在抗原接种、饲养管理以及无菌采血等方面十分麻烦,成本和技术要求较高,所制血清极易污染。因而所制血清数量常不能满足生产上的需要。根据苏联1984年《养禽业》杂志第5期报道,用兔、鸡、鹅、山羊等几种动物制造的抗小鹅瘟(苏联称鹅病毒性肠炎)血清防制小鹅瘟,以山羊抗小鹅瘟血清效果最好。他     

用激素激发母猪的繁殖机能

在夏季,为了缩短母猪断乳至下一次配种的间隔时间,提高繁殖率,应用不同剂量的孕马血清和脑垂体后叶素作了两批生产试验。第一批试验用700头哺乳母猪(分娩后24—26日),分成3组。试验Ⅰ组250头,断乳当天肌注孕马血清1800—2000小白鼠单位;试验Ⅱ组200头,断乳后8日内自然发情的就直接配种,未发情的母猪于第9日注射上述剂量的孕马血清;Ⅲ组为对照组,250头。所有母猪发情后按常规方法输精。     

鸭病毒性肠炎间接ELISA诊断方法的建立及应用

本研究以鸭病毒性肠炎(DVE)病毒作为包被抗原,建立了检测DVE抗体的间接ELISA诊断方法.应用该ELISA诊断方法检测DVE阳性对照血清,当血清稀释至12800 倍时,结果仍为阳性;检测其它7种鸭病阳性血清结果均为阴性;批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均小于10%;该检测方法与血清中和试验的符合率为100%.DVE 活疫苗皮下免疫鸭抗体监测结果表明:鸭免疫后第7d 可以在血清中检测出DVE特异性抗体.本试验建立的诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为DVE免疫鸭的抗体监测和DVE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法.     

对供港育肥牛炭疽免疫效果的血清学检测试验

为摸清供港育肥牛炭疽免疫的实际情况,对我市某旗外贸供港育肥牛进行了血清学抽样检测试验。采用Ascoli氏沉淀反应,共检测供港育肥牛血清360头份,血清学阳性共306头,即疫苗阳转率为85.0%。其中第一批牛血清阳性率为87.8%(158/180);第