小白菜小孢子胚状体诱导影响因素研究

以10个小白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响小孢子胚状体形成因素的结果表明,不同品种胚状体的诱导率不同;NLN培养基中大量元素减半有利于小孢子胚诱导,其诱导率达到100%;培养基中添加0.05 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA可以提高胚状体诱导率;活性炭和琼脂糖对诱导胚状体发生和发育有促进作用,可使子叶胚的比例达90%以上;花蕾经4℃低温预处理24 h后的成胚率显著提高.     

小白菜小孢子胚状体诱导影响因素研究

以10个小白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响小孢子胚状体形成因素的结果表明,不同品种胚状体的诱导率不同;NLN培养基中大量元素减半有利于小孢子胚诱导,其诱导率达到100%;培养基中添加0.05 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA可以提高胚状体诱导率;活性炭和琼脂糖对诱导胚状体发生和发育有促进作用,可使子叶胚的比例达90%以上;花蕾经4℃低温预处理24 h后的成胚率显著提高。     

春、夏大白菜花药培养胚状体诱导的影响因素研究

以13份春、夏大白菜为材料进行花药培养,研究几种因素对花药胚状体诱导的影响.结果表明,当花蕾长为2.0～3.0mm,花瓣与花药长度之比为1/2～4/5时,54%～70%的小孢子发育处于单核靠边期,最适合进行花药培养.花药培养结果表明,基因型不同,胚状体的诱导率有极大的差异,最容易形成胚状体的材料是126,诱导效率达13.71%;胚状体的出现在花药接种后的15～30d之间,培养后20d左右是胚状体出现的高峰期.培养基的种类对培养结果也有影响,其中以Keller培养基效果最佳,Keller培养基中有机成份加倍,则可以明显提高胚状体的诱导效率,培养基中10%的蔗糖浓度促进胚状体的诱导.     

菜心小孢子胚再生体系优化及植株倍性鉴定

为进一步优化菜心游离小孢子胚再生技术体系,本研究以3份不同基因型的菜心小孢子胚状体为试验材料,研究不同培养基类型、培养基中不同琼脂浓度和不同胚龄对胚再生的影响,并对再生植株进行倍性鉴定。结果表明,使用B5培养基时各基因型的成苗率均高于MS培养基,褐化率低于MS培养基,B5培养基是菜心小孢子胚状体再生的适宜培养基;培养基中添加适宜浓度的琼脂可提高再生植株的成苗率,随着琼脂浓度的增加,出苗率呈先升后降的趋势,琼脂浓度为1.0%时,各基因型的出苗率达到最高;胚状体再生的最佳胚龄是25～29 d,胚龄时间过长或过短均不利于胚状体出苗,其中40 d以上胚龄的胚状体几乎不出苗;倍性鉴定发现菜心小孢子再生植株中同时存在单倍体、二倍体和多倍体,3个基因型的二倍体自然加倍率在62.22%～71.11%之间;75 mg/L秋水仙素处理可提高菜心再生株系的二倍体率。本研究为菜心游离小孢子胚再生体系优化及再生植株倍性鉴定提供了技术基础。     

IAA、KT、GA_3和CH对棉花胚状体发育的影响

棉花组织培养中所产生的胚状体在不加任何激素及ＣＨ的ＭＳ基本培养基上，部分球形胚状体可发育成具子叶的胚状体，并进而形成相当数量的正常试管苗；外加０．１ｍｇ·Ｌ（－１）的ＧＡ＿３对球形胚状体及具子叶胚状体的正常发育均不利，导致大量胚状体重新形成愈伤组织；ＣＨ（５００ｍｇ·Ｌ（－１））可促进球形胚状体的正常发育，大大降低异常胚状体的发生，并可抑制具子叶胚状体次生愈伤组织化，同时可使试管苗生长健壮：ＫＴ明显的促进了胚状体的正常发育，大大提高了正常具子叶胚状体及试管苗的形成率，但若同时附加一定浓度的ＩＡＡ，刚抑制了ＫＴ的作用，表明ＩＡＡ对胚状体的发育有害。     

烤烟K326人工种子悬浮培养下体细胞胚胎的发生研究

通过对烤烟K326不同外植株、不同培养基及影响烟草体细胞胚发生因素的研究。结果表明：烤烟K326产生愈伤组织的百分率因不同外植株而异，在含2，4－D 1.0mg/L的MS固体培养基上产生愈伤组织的百分率分别为52％、26％、4％，而在含NAA0.1mg/L和KT2.0mg/L的MS去分化培养基上产生愈伤组织的百分率分别为63％、44％、5％；体细胞胚发育是不同步的；一定浓度的2，4－D对烤烟体胚发生是必须的，但高浓度2，4－D将抑制体胚的形成；2％蔗糖比3％蔗糖利于烤烟K326体胚发生。     

活性炭对甘蓝型油菜（Brossica napus L．）小孢子胚胎发生的影响

试验以大田环境下的多份甘蓝型油菜的品种或品系为材料，研究了活性炭对游离小孢子胚胎发生的影响。结果表明：活性炭对甘蓝型油菜游离小孢子培养胚状体发生有很好的促进作用，不仅提高了胚产量，而且有利于小孢子胚的正常发育，添加活性炭的固液双层培养基效果尤为显著。     

基本培养基和蔗糖浓度在大白菜花药培养中对胚状体诱导的影响

以6个大白菜品种为试材进行花药培养,研究了不同基本培养基和蔗糖浓度对胚状体诱导的影响。结果表明,B5和Keller培养基为适适宜的基本培养基;培养基适宜的蔗糖浓度为8％-12％,最适浓度为10％。     

基本培养基及蔗糖浓度对大白菜花药培养胚状体诱导的影响

以6个大白菜品种为试材进行花药培养,研究了不同基本培养基和蔗糖浓度对胚状体诱导的影响。结果表明,B5和Keller培养基为适适宜的基本培养基;培养基适宜的蔗糖浓度为8%~12%,最适浓度为10%。     

杂花苜蓿高效再生体系的建立

通过对新疆塔城杂花苜蓿品种下胚轴再生植株的系统研究，经筛选获得种子萌发培养基为：1／2MS无糖培养基；胚性愈伤组织诱导培养基：MS＋2，4-D2mg／L＋6-BA0．5mg／L＋蔗糖3％。胚性愈伤组织诱导率为100％；胚状体诱导培养基：SH＋2，4-DZing／L＋6-BA0．5mg／L＋CH250mg/L＋蔗糖1％，胚状体诱导率为86．96％；胚状体萌发培养基：SH＋GA30．5mg／L＋CH250mg／L＋蔗糖1％，胚状体萌发率为90％-95％；生根培养基：1／2MS＋IBA0．5rag／L＋蔗糖1％。生根率为100％。完成再生时间120d左右。     

单叶省藤组培苗不定根诱导研究

对单叶省藤组织培养中影响不定根诱导的因素进行研究,以解决单叶省藤生根率低的问题。以增殖培养10代的单叶省藤组培苗为材料,研究培养基中的离子浓度、生长调节剂的种类和浓度、活性炭及剪切方式对根系诱导的作用。结果表明：培养基中的大量元素、活性炭及NAA的浓度变化对单叶省藤组培苗的生根率有极显著影响;组培苗的剪切方式对生根率也有显著影响;最适生根培养基为1/2MS大量元素+NAA 0.5 mg/L+糖20 g/L。     

小麦花药培养的基因型差异与亲本选配分析

对104份不同基因型材料进行花药培养,结果表明：F1代愈伤组织诱导率为13.28%,高于F3代的6.02%; 绿苗产率F1代为2.88%,F3代为1.10%,F1相当于F3的2.6倍。同样的培养条件下,不同基因型材料间花药培养力差异很大,愈伤诱导率在 0～111.43% 之间、绿苗产率在 0～49.29% 之间;愈伤诱导率、绿苗分化率与绿苗产率三者之间成正相关关系。同时筛选出了一批如宁春4号等具有高培养力、高产和优质基因的花培桥梁亲本,为有目的配制杂交组合提供依据。     

通过花药漂浮培养提高花椰菜小孢子胚胎发生率

通过花药漂浮培养,成功地诱导两个秋花椰菜基因型的小孢子胚胎发生.在液体培养基与固、液体双层培养基上,小孢子胚胎产量相仿,但后者褐色胚产生较多.在液体培养基中加入62.5mg/L的硝酸银对诱导小孢子胚胎发生效果较好.试验结果表明,采用花药漂浮培养方法可以明显提高花椰菜小孢子胚产量.     

白芦笋花药愈伤组织诱导及绿芽分化

为建立芦笋单倍体育种技术体系以解决国内芦笋新品种资源贫乏问题,笔者以白芦笋花药为外植体进行了愈伤组织的诱导及绿芽分化研究。试验结果表明,芦笋花药经过4d的冷藏(4℃)处理后,接种于含有NAA2.0 mg/L、6-BA1.0mg/L及6%蔗糖的1/2MS培养基上,可产生愈伤组织;每年的4月份接种花药的愈伤组织诱导率最高,8月份次之,11月份最低。品种间、同一品种不同单株间花药的愈伤组织诱导率不同,以‘UC155’品种(18.9%)最高,显著高于其他三个品种‘UC142’(11.6%)、‘Gijnlim’(10.3%)、‘Thielim’(5.8%),所有试验株系中以‘UC155’-8的愈伤组织诱导率最高,达83.5%;每日补充光照强度为1000 lx的光照,比全暗培养更有利于芦笋花药愈伤组织的形成;花药接种前进行离心处理(4000 r/min)30 min,不能提高愈伤组织诱导率;愈伤组织转瓶培养于NAA 0.5 mg/L、6-BA 1.0 mg/L及3%蔗糖的MS培养基上,能分化出无根绿芽;不同品种间绿芽分化率有差别,以‘Gijnlim’品种最高(67.2%),‘UC142’品种最低(14.1%);未分化绿芽的愈伤组织再转入于不含植物生长调节剂的MS培养基上培养,部分愈伤组织能分化出绿芽     

Production of triploid plants of Japanese pear (Pyrus pyrifolia Nakai) by anther culture

Triploid plants were grown from the diploid pear scion cultivar (Pyrus pyrifolia Nakai) by anther culture. Androgenic callogenesis occurred at about 10 days after anther excision, and most calli formed within four weeks and stopped growing at less than 1–3 mm in diameter. Androgenic embryogenesis occurred within 8–12 weeks after anther culture. The formed embryos were generally white, globular or heart-shaped. To increase callogenesis and embryogenesis, the effects of cold pre-treatment, light and activated charcoal (AC) on anthers collected from buds were investigated. Cold pre-treatment, dark and lack of AC increased callogenesis more than no cold pre-treatment, light and adding AC. A decisive condition was not found for embryogenesis. The embryogenesis frequency was extremely low and only six embryos were grown. Two embryos expanded greenish cotyledons and developed foliage, and they proliferated when transferred monthly to fresh proliferation medium. The proliferated shoots were rooted and acclimated. Flow cytometric analysis and investigation of the number of chromosomes of regenerants showed that all cells were triploid.     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L₁₆(4⁴)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根。结果表明:天蓝苜蓿现蕾15~25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达60.5%。4℃低温预处理2~4 d有利于愈伤组织诱导,诱导率达77.2%。适宜花药愈伤组织诱导的培养基为NB+2,4-D 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,诱导率达78.5%。比较不同基本培养及生长调节剂的不同组合发现,NB培养基愈伤组织分化效果优于B₅和MS,NB+NAA0.5 mg/L+6-BA 2.0 mg/L适宜愈伤组织的分化,分化率为66.3%。不定芽在1/3MS+NAA 0.5 mg/L中培养,生根率最高,为86.55%。本研究建立了天蓝苜蓿花药培养再生体系,获得了单倍体植株,为天蓝苜蓿的育种实践及基因组学研究提供基础材料。     

铁在寒地早粳花药培养中的效应研究

摘要：铁是水稻花培培养基的重要成分。通过对7份寒地早粳组合F1（或品系）花药在不同Fe2+含量培养基上离体培养,发现培养基中的Fe2+的含量对诱导率、绿苗分化率影响较大。结果表明在N6培养基中将Fe2+提高到32-40mg/kg诱导率最大,高于N6培养基（Fe2+含量为5.6mg/kg）1.4倍以上。在此以内随着Fe2+含量的增加诱导率增加,大于此含量诱导率降低,呈单峰曲线分布。分化培养基中Fe2+含量增加到40mg/kg分化率显著降低。但在32-40mg/kgFe2+培养基上诱导出的愈伤组织在MS培养基上的绿苗分化率差异明显,71.4%材料可使绿苗生产率提高到9.2%左右。因此适当提高诱导培养基中Fe2+含量可提高寒地早粳的花培效率。     

Assessment of different anther culture approaches to produce doubled haploids in cucumber (<Emphasis Type="Italic">Cucumis sativus</Emphasis> L.)

Cucumber is one of the most important vegetable crops worldwide, which makes it a good candidate to produce doubled haploid (DH) lines to accelerate plant breeding. Traditionally, these approaches involved induction of gynogenesis or parthenogenesis with irradiated pollen, which carries some disadvantages compared to androgenesis. Despite this, studies on anther/microspore cultures in cucumber are surprisingly scarce. Furthermore, most of them failed to unambiguously demonstrate the haploid origin of the individuals obtained. In this work we focused on anther cultures using two cucumber genotypes, different previously published protocols for anther culture, different in vitro culture variants to make it more efficient, and most importantly, a combination of flow cytometry and microsatellite molecular markers to evaluate the real androgenic potential and the impact of anther wall tissue proliferation. We developed a method to produce DH plants involving a bud pretreatment at 4 °C, a 35 °C treatment to anthers, culture with BAP and 2,4-D, and induction of callus morphogenesis by an additional 35 °C treatment and sequential culture first in liquid medium in darkness and second in solid medium with light. We also found that factors such as genotype, proliferation of anther wall tissues, orientation of anthers in the culture medium and growth regulator composition of the initial anther culture medium have a remarkable impact. Our rate of chromosome doubling (81%) was high enough to exclude additional chromosome doubling steps. Together, our results present androgenesis as an improvable but yet more convenient alternative to traditional gynogenesis and parthenogenesis-based approaches.     

短光低温不育水稻新种质的花药培养研究

对短光低温不育水稻进行花药培养的结果表明：不同基因型材料的花培力差异较大；同一材料在不同的基本培养基和激素配比中进行培养的效果不同，对宜DIS，以M8附加2,4-D(2mg/L) NAA(2mg/L) Kt(1.5mg/L)的花培力最高；不同时间段所取的材料花培力差异较大，可能与材料生长所处的最适环境不同有关；适当的通气状况有利于绿苗分化率的提高。     

水稻高效花药培养技术体系的构建

为提高水稻花药培养效果,产生大量的花粉植株,以多年的试验并结合多方面的研究结果,论述了水稻花药培养各个环节中的关键技术,创建了通常情况下的一套水稻高效花药培养技术体系。本系统着重于在利用基因型的选择和基本配养基的交叉使用以提高花药愈伤组织诱导率的的前提下,在其它的每个环节,尤其是壮苗和移植管理技术方面进行了优化改进,以提高绿苗分化率和组培苗移植后的成活率。