小麦高低分子量谷蛋白亚基分离纯化方法的研究

以普通小麦为试材,提取麦谷蛋白,分别利用两种不同型号的葡聚糖凝胶Sephadex G-50和Sephadex G-100对高低分子量麦谷蛋白进行层析分离纯化,并采用SDS-PAGE的方法检测分离效果,利用紫外分光光度计法测定各层析峰蛋白含量,计算蛋白回收率。结果表明,Sephadex G-50的蛋白回收率较高,且对低分子量谷蛋白亚基的纯化有一定效果,但不能实现高分子量谷蛋白亚基的有效分离纯化。Sephadex G-100能有效实现小麦高低分子量谷蛋白亚基的分离纯化,但与Sephadex G-50相比,蛋白回收率低。∶:     

多粘类芽孢杆菌S960抑制尖孢镰刀菌的活性物质分离纯化

对多粘类芽孢杆菌S960胞外粗提液采用硫酸铵沉淀法和Sephadex G-75凝胶层析法分离纯化多粘类芽孢杆菌S960释放的活性物质,用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测该活性蛋白质的相对分子量、薄层层析法初步鉴定该活性物质。结果表明,40%的硫酸铵沉淀提取效果最佳,Sephadex G-75凝胶层析在控制0.5 mL·min^-1的流速下,洗脱时间为50～70 min的收集液中具有有效活性物质,聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该活性物质相对分子量约为66.2 kDa,纯度为91.87%。薄层层析展开结果显示该活性物质可能含有α-氨基酸、苯丙氨酸、羟脯氨酸或脯氨酸。这说明多粘类芽孢杆菌S960可以通过释放具有抑菌活性的蛋白而抑制尖孢镰刀菌的生长。     

溶藻细菌胞外溶藻物质的分离方法和特性的初步研究

本文研究了溶藻细菌S7胞外溶藻物质的分离特性和纯化方法。通过透析,有机溶剂萃取和乙醇沉淀的方法对活性物质进行了分离并用硅胶柱层析纯化,结果显示:该溶藻物质分子量小于14KD,具有较好的亲水性和较强的极性,能用乙醇沉淀方法进行分离;该溶藻物质可能不是蛋白质、核酸和糖类物质,甲醇洗脱组分具有显著的溶藻效果。     

黑曲霉D226乳糖酶分离纯化研究

为从黑曲霉D2-26发酵液中得到单一的乳糖酶组分,以便研究其酶学性质。试验通过采用过滤、超滤、硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25脱盐、DEAE-纤维素-32离子强度梯度层析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-纤维素-32 pH梯度层析等方法从发酵液中分离纯化乳糖酶,纯化酶液经PAGE电泳鉴定得到单一蛋白条带。为此建立了一套简单易行的黑曲霉D2-26乳糖酶分离纯化方法。     

中国林蛙皮肤抗菌活性肽的分离提取

将中国林蛙毁双髓,置冰浴中迅速剥皮,冲洗血污后粉碎,经80％甲醇抽提2次;再经sephadex G-100、sephadex G-25和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等,从林蛙皮肤中分离获得5种小分子多肽。抗菌活性试验表明：经sephadex G-25凝胶过滤获得的小分子多肽洗脱峰第6峰,对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌具有较强的抗菌活性;SDS-PAGE电泳表明为单一区带,此抗菌活性多肽的相对分子量为4．31ku。     

无指盘臭蛙皮肤分泌液中促胰岛素释放肽的分离纯化与活性初步研究

通过葡聚糖Sephadex G-50凝胶过滤和反相高压液相层析等手段,对无指盘臭蛙皮肤分泌液进行分离纯化,得到了高纯度的多肽分离峰。分别采用体外培养的大鼠胰岛和INS-1胰岛β细胞系检测分离峰的促胰岛素释放活性。结果表明,所得多肽既可促进原代培养的大鼠胰岛分泌胰岛素,又可以促进INS-1细胞胰岛素释放;运用飞行质谱仪测定该促胰岛素释放肽的相对分子质量,其大小为1868。此外,利用鸡胚尿囊绒毛膜（CAM）体内模型检测,发现该多肽还具有显著的抑制血管生成活性。     

大蜡螟抗菌物质的抑菌活性检测及其初步分离

以大蜡螟末龄幼虫为材料,诱导后获得免疫血淋巴为抗菌粗提物,并分为新鲜,冷冻,加热3种不同的处理,进行了对2种常见细菌和16种植物病原真菌的抑菌活性检测,并进行了Sephadex G-50凝胶过滤分离.结果表明,大蜡螟抗菌物质对大肠杆菌没有明显的抑制作用,而对金黄葡萄球菌抑制作用明显,抑菌活性单位在10左右;对10种植物病原真菌均有不同的抑菌活性,其中对苹果树皮腐烂病菌的抑制率达到65%以上;经过凝胶过滤分离,及对分离组分的抑菌活性测定,筛选出较合适的洗脱液为50 mM乙酸铵,各分离组分抑菌活性差异明显,粗提物被分成了两个差异显著的部分.     

无指盘自蛙皮肤分泌液中促胰岛素释放肽的分离纯化与活性初步研究

通过葡聚糖 Sephadex G-50凝胶过滤和反相高压液相层析等手段,对无指盘臭蛙皮肤分泌液进行分离纯化,得到了高纯度的多肽分离峰.分别采用体外培养的大鼠胰岛和INS-1胰岛β细胞系检测分离峰的促胰岛素释放活性.结果表明,所得多肽既可促进原代培养的大鼠胰岛分泌胰岛素,又可以促进INS-1细胞胰岛素释放;运用飞行质谱仪测定该促胰岛素释放肽的相对分子质量,其大小为1 868.此外,利用鸡胚尿囊绒毛膜(CAM)体内模型检测,发现该多肽还具有显著的抑制血管生成活性.     

黄粉虫体内脂类抗菌活性物质及化学成分分析

为探索提取黄粉虫体内脂类抗菌活性物质的新途径,用5种不同有机溶剂对黄粉虫幼虫和成虫体内的抗菌物质进行提取,利用硅胶柱层析法和薄层层析法对粗提物进行分离,利用圆形纸片扩散抑菌法检测幼虫和成虫粗提物及各步纯化物对11种细菌的抗菌活性.结果表明:两类虫体的粗提物及各步纯化物对11种细菌均有显著抑菌效果,其中,以乙醇洗脱组分的抑菌效果最强,对两类虫体的乙醇洗脱组分进行薄层层析,各筛选出一条抗细菌活性最强的条带,用气相色谱-质谱法(GC-MS)确定各条带的主要化学成分,并分析其抗菌机理,为黄粉虫体内脂类抗菌活性物质的研究开发提供了理论依据,为寻找新型抗菌药物提供了重要来源.经过柱层析纯化后得到的乙醇洗脱组分的抗菌活性比粗提物明显提高.     

无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与部分性质研究

采用分级盐析和Sephadex G-50的方法分离纯化无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂,用BAPNA法进行抑制活性的测定,用SDS-PAGE法测定蛋白质的分子量,用不同的温度处理方法对它的热稳定性进行研究,并对抑制剂的Lys和Cys进行了化学修饰。结果表明在饱和度为60%的硫酸铵作用下,能够沉淀出活性较强的胰蛋白酶抑制剂,其分子量为29 512 Da,并且具有一定热稳定性,在80℃恒温处理1 h仍保持一定的抑制活性。证明了无种皮南瓜籽胰蛋白酶抑制剂是一种分子量较小的,以Lys为活性中心的具有一定热稳定性的蛋白质。     

草鱼肠道抗菌肽的提取及体外抑菌效果初步研究

将新鲜草鱼肠道组织经超声破碎、乙酸浸提后,再经Sephadex G50和Sephadex G25 凝胶柱过滤层析,收集各组分,采用药敏纸片法检测各组分的抗菌活性.收集具有抗菌活性的组分,经Tricine SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后分析获得1条较明显的蛋白带,相对分子质量约为6 200.该抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和嗜水气单胞菌均表现出较强的抗菌活性,说明抗菌肽对维持鱼类肠道微生物区系稳定具有重要作用.     

昆虫抗菌肽研究与应用

昆虫抗菌肽(AMPs)是昆虫在受到刺激或感染之后,在其血淋巴中会产生的一种抗菌类物质,具有分子量小、稳定性好、广谱抗菌、无毒副作用等特点。随着抗菌肽家族的不断扩大,其各方面的研究也日益深入,昆虫抗菌肽作为一种新型短肽以其独特的特性已成为食品、农业、医药等领域的研究热点。简要综述了昆虫抗菌肽的生物特性、作用机理及应用现状。     

中性蛋白酶酶解蛋清制备活性肽的研究

研究了AS1398中性蛋白酶酶解鸡蛋蛋清制备小分子活性肽,确定了酶解的最佳工艺:pH值8.0,酶解温度60℃,底物浓度4%,酶加入量为底物浓度的7%,水解时间4h.在此条件下,水解度达到26.1%.用SephadexG-15测定了水解物分子量分布,结果表明:水解产物中的主要成分是分子量集中在1 300Da的寡肽.     

Study on Enzymatic Hydrolysis of Gadus morrhua Skin Collagen and Molecular Weight Distribution of Hydrolysates

Process parameters on enzymatic hydrolysis and molecular weight （MW） distribution of collagen hydrolysates from Gadus morrhua skin were investigated. The optimal process parameters were obtained by the single-factor and orthogonal experiments. The molecular weight distribution of hydrolysates was determined using both Sephadex G25 partition and high speed liquid chromatography electricity spray mass spectrum （HPLC-ESI-MS）. Collagen hydrolysates were first gained by an alkaline protease ＂alcalase＂ for 3 h at temperature （50~C）, pH （10.0）, substrate concentration （75 g L-~）, and E/S （3%）. The molecular weight distribution of collagen hydrolysates ranged from 300 to 1 500 Da, and most of peptides were under 1 200 Da. Sephadex G25 partition and HPLC-ESI-MS should be successfully employed to determine the molecular weight distribution of collagen hydrolysates.     

贻贝抗菌肽的分离纯化

[目的]从贻贝中提取具有抗菌作用的多肽。[方法]以紫贻贝为原料,采用0.5%的乙酸直接提取方式提取抗菌肽,再经过Sephacryl S-100聚丙烯酰胺凝胶色谱进行纯化,收集各馏分并用滤纸片扩散法测定其抗菌活性及对各种细菌的最低抑菌浓度,使用SDS-PAGE测定抗菌肽的分子质量,测定其在100℃条件下不同处理时间和不同pH条件下抗菌活性的变化。[结果]使用0.5%的乙酸作为提取液粗提取抗菌肽具有较高的提取效率,使用Sephacryl S-100纯化抗菌肽,可将抗菌肽纯化为单一物质。分离纯化出的贻贝抗菌肽具有较强的抗菌性,分子质量为5 908,且具有耐高温、耐酸碱的性质。[结论]该研究为抗菌肽的大规模生产奠定了基础。     

大豆多肽分子质量分布与苦味的确定

利用葡聚糖凝胶（Sephadex G-25)柱层析和高压液相色谱（HPLC）测定大豆多肽分子质量与水解度以及分子质量与苦味之间的关系。试验结果表明，随着水解度的增加，大豆蛋白水解物分子质量变小，当水解度约为25％时，其分子质量绝大多数在500－1000u之间。分子质量为500－1000u的大豆多肽苦味较强。     

波纹巴非蛤活性肽的酶法提取及其抗氧化性研究

[目的]为波纹巴非蛤活性成分的提取分离及利用提供理论依据。[方法]以波纹巴非蛤为原料,采用木瓜蛋白酶水解法制备波纹巴非蛤活性肽复合物,并对所制备的活性肽复合物进行分离纯化,采用铁氰化钾法测定不同分子量区间的波纹巴非蛤活性肽复合物的抗氧化性。[结果]波纹巴非蛤活性肽复合物具有一定的还原能力,说明其具有一定的抗氧化活性;经2步葡聚糖凝胶色谱法结合双缩脲法和茚三酮法定性鉴定所得到的波纹巴非蛤活性肽的分子量多集中在2000～10000U之间,洗脱体积为30～50ml;波纹巴非蛤活性肽的抗氧化能力与其分子量大小有关,分子量为2065.4U的活性肽复合物抗氧化性最强。[结论]确定了抗氧化能力最强的波纹巴非蛤可溶性活性肽的分子量。     

林蛙皮多肽制备及其理化性质

从林蛙皮肤中提取的小分子多肽具有诸多生物活性。以鲜活林蛙为试验材料,剥离皮肤,采用酶解法提取小分子活性多肽,并研究其理化性质。结果表明:制备的林蛙皮多肽的紫外特征吸收峰位于220 nm处,280 nm附近吸收峰较小;分子量主要分布在190~1 000 u,并且在250~540 u的分布最多,占37.47%;该混合多肽具有多种生物活性因子,尤其是抗菌肽和凋亡调控蛋白;在不同p H值缓冲溶液中都具有良好的溶解性;抑菌试验表明其对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有不同程度的抑菌活性。证明制备的小分子混合多肽有望成为新的制剂原料。     

氨卞西林钠和马来酰肼对菊花形态、花色和花期的影响

在秋菊品种姹紫嫣红的营养生长期,以氨卞西林钠(AMP 1000 mg/L)和不同浓度马来酰肼(MH 100 mg/L,200 mg/L和300 mg/L)的水溶液进行叶面喷雾处理,初步研究了AMP和MH对菊花绿蕾期叶片、盛花期植株与花瓣形态、花色和花期的影响。结果表明,AMP处理使菊花绿蕾期叶片叶绿素含量、干重/鲜重和叶面积均明显高于对照,始花日期比对照提早8.8 d,单花寿命、盛花期株高、株径、花瓣干重/鲜重和花青素含量也比对照明显提高,有助于提高菊花的观赏价值;MH处理提高了菊花的叶绿素含量,但明显降低了菊花的叶面积,延迟了菊花的花期,在MH100~300 mg/L范围内,对菊花的延迟效应为4.2~16.6 d,对菊花的观赏价值也有不同程度的降低效应,且随着MH浓度的提高,处理效应逐渐增强。     

脱脂南极磷虾粉中降血糖与抗氧化肽的分离纯化与鉴定

食源性二肽基肽酶Ⅳ（Dipeptidyl peptidase-Ⅳ,DPP-Ⅳ）抑制肽和抗氧化肽分别有助于清除体内自由基和调节机体血糖。为实现脱脂南极磷虾粉的高值化利用,以及为糖尿病治疗寻找新方法,本研究从脱脂南极磷虾粉酶解产物中制备DPP-Ⅳ抑制肽和抗氧化肽段。使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶水解脱脂南极磷虾粉,探究时间与水解度、活性、产率的关系,并分离纯化多肽,最后通过分子对接确定抑制作用位点。结果表明,酶解液经超滤、Sephadex G15分离纯化和液相-质谱联用技术鉴定后,得到了4条具有DPP-Ⅳ抑制和抗氧化作用的肽,氨基酸序列分别为WPPLSPFRCPR、IPDWFLNRQ、FLWLKKTPLPL和DTVPWFPR。其中IPDWFLNRQ具备较高的DPP-Ⅳ抑制活性,DPP-Ⅳ抑制活性IC50值为（0.616±0.097）mmol/L;WPPLSPFRCPR具有较高的抗氧化活性,DPPH EC50值为（0.098 3±0.011） mmol/L,ABTS EC50值为（0.116±0.073） mmol/L。分子对接结果表明这4个肽主要通过氢键与DPP-Ⅳ活性中心及其以外的位点...