笼具形状对选育合浦珠母贝幼贝生长的影响

2011年8月,以海南三亚亲贝(♀)×广东徐闻亲贝(♂)构建的第一代选育合浦珠母贝(Pinctadafucata)群体为材料,研究长方形、圆柱形和半球形笼具形状在不同水深对合浦珠母贝幼贝(平均壳长1.4 cm)生长的影响。结果表明,长方形笼具在4 m水深时,幼贝的壳高和体重增长率最大,分别为24.55%和6.44%,显著高于其它水层(P<0.01);半球形笼具在3 m水深时,幼贝壳高和体重增长速度最大,分别为22.55%和5.40%,与其它水深的差异极显著(P<0.01);圆柱形笼具在6 m水深时,壳高和体重增长最快,增长率分别为22.46%和5.37%,显著高于3、5、7 m水深组(P<0.01),而与其余深度组差异不显著。此外,圆柱形笼具的高对合浦珠母贝的生长也有影响,在3 m水层20 cm高的圆柱形笼具中贝壳高和体重增长速度最大(增长率分别为24.70%和6.20%),与5、10、15 cm高度组差异显著(P<0.05);而长方形笼具虽然10 cm高的笼具较好,但与其它各实验组差异并不显著(P>0.05)。综合来看,合浦珠母贝在3～4 m水层用半径11.5 cm、高20 cm的圆柱形笼具或20 cm(长)×12 cm(宽)×10 cm(高)的长方形笼具养殖效果较好。但在制作成本方面,圆柱形笼具的成本低于长方形笼具。     

马氏珠母贝附着生物及防除方法研究

论文主要对马氏珠母贝附着敌害生物的种类、附着方式、危害及防治等进行了综述。     

限食对合浦珠母贝幼虫生长、成活及变态的影响

自2009年4月27日至2009年5月25日,在不同投饵条件下研究了限食对合浦珠母贝（Pinctada fucata）幼虫生长、成活和变态的影响。结果显示,试验初期对照组幼虫的壳长、壳高日增长率逐渐升高,自第20天开始迅速下降;试验一组（隔天投喂）和二组（隔2d投喂）幼虫的壳长、壳高日增长率缓慢升高,且与对照组同期幼虫的日增长率差异显著,这表明饵料是否充足直接影响马氏珠母贝幼虫的生长。试验期间,对照组幼虫的成活率逐渐降低,畸形率无显著性变化,而试验一组和二组幼虫的成活率显著低于对照组,试验二组幼虫的畸形率高于同期对照组和试验一组幼虫的畸形率,表明在食物匮乏的情况下,幼虫的发育受到影响。对照组幼虫在第20天时开始变态,随后变态率逐渐升高,试验一组幼虫在第30天时开始变态,而试验二组幼虫在试验期间一直没有变态,表明该组幼虫的营养状况不足以支持其变态附着。     

合浦珠母贝同工酶的电泳分析

采用聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直板电泳技术和特异性染色方法，对合浦珠母贝外套膜、闭壳肌、肝脏和鳃组织中的15种同工酶系统进行分析，结果表明a-GPDH、ADH在4种组织中均未见表达；AK、AMY、PGM、ALP、GDH和LDH只在肝脏中表达，而ME、SOD、EST、MDH、G6PD、6PGD和AAT则有较广泛的组织分布，其中12个座位(Aat-1、Aat-2、Sod-1、Sod-2、Sod-3、Sod-4、m-Mdh-c、G6pd-2、6Pgd-2、Ak-1、Gdh-1、Me-2)具有多态性，多态位点比例为46.1％，平均杂合度0.1122±0.0576。     

合浦珠母贝深水浮筏式养殖试验

合浦珠母贝采用深水浮筏式吊养，从幼贝到插核贝成活率为３８．２％，而传统的浅水立桩式平养成活率仅９．８％。深水浮筏式养的合浦珠母贝生长快，缩短了珍珠养殖周期，降低了成本，提高了经济效益。     

合浦珠母贝幼贝生长性状的遗传参数估计

以广东徐闻和海南三亚2个地理群体合浦珠母贝(Pinctada fucata)为亲本, 采用人工授精方法构建了33个全同胞家系。在162日龄时从每个家系随机抽取50个个体, 共1 650个, 测量其壳长、壳高、壳宽和体质量4个生长性状, 利用动物模型对4个性状进行遗传参数分析。结果表明, 合浦珠母贝4个生长性状的总平均值分别为(16.28 ± 4.46) mm、(14.85 ± 4.39) mm、(4.58 ± 1.52) mm、(0.66 ± 0.67) g。4个性状的遗传力分别为0.202 ± 0.020、0.203 ± 0.020、0.200 ± 0.021和0.204 ± 0.020, 均属中等遗传力, 因此可以用选择育种进行遗传改良。4个性状间表型相关系数和遗传相关系数的范围分别为0.667~0.698和0.685~0.959, 其中壳长、壳高和壳宽之间的遗传相关系数均低于0.7, 与表型相关一致, 而三者与体重间的遗传相关系数较高(0.868~0.959), 其中壳宽与体质量间的遗传相关系数最高(0.959)。本研究中合浦珠母贝的4个性状为中等遗传力, 并可通过对壳宽的选育来改良体质量性状。上述结果为进一步开展合浦珠母贝选择育种研究奠定了基础。

     

合浦珠母贝完全双列杂交组合生长性状比较

对合浦珠母贝(Pinctada fucata)三亚(SY)、越南(VN)、深圳(SZ)3个不同地区的养殖群体进行完全双列杂交,构建了6个杂交组合和3个自交组合,分别在135日龄、205日龄和260日龄从每个组合随机抽取100 ind个体,测量其壳长、壳高、壳宽和体重4个生长性状,分析杂交子代和自交子代的生长情况和杂交优势率,为群组选育提供科学依据。结果表明,在135日龄SYSY的4个性状生长速度最快,VNSY的生长速度最慢,显著性分析表明,SYSZ、SZSZ和VNSZ三个组合在壳高、壳宽和体重3个性状上差异不显著(P0.05),正反交组合差异极显著(P0.01);在205日龄SYVN的各性状生长速度最快,其次是SZVN;在260日龄SZSY的壳长、壳高、壳宽和体重增长最快,分别为39.32 mm、38.36 mm、14.19 mm、9.85 g,其次为VNSY和SZVN。合浦珠母贝早期主要集中在贝壳的形态性状上的生长,随着时间推移其生长速度下降,而体重生长上升。由杂种优势可知,不同阶段杂交组均表现出一定程度的杂种优势率,并随着日龄的增长,杂交组合SZSY和VNSY的杂种优势率随之增加。其中以SZSY在各性状的杂种优势率最大,分别为26.71%、22.87%、18.56%、49.12%,SZVN次之。杂交组合SZSY、SZVN、VNSY具有明显的生长优势,可作为进一步定向培育生长快速、个体大的合浦珠母贝的基础材料。     

插核手术对合浦珠母贝免疫水平的影响

对插核手术前后合浦珠母贝血清的超氧化物岐化酶（SOD）活力、溶菌活力和抗菌活力以及血细胞的吞噬活性进行了比较研究。结果表明：插核手术后贝血清的SOD活力明显上升,溶菌、抗菌活力明显下降,血红细胞的吞噬活性降低,化学发光的各种参数显著改变,说明贝的体液和细胞免疫水平都明显降低。据此推断手术贝的免疫力低下是导致手术贝高死亡率的最根本原因。     

合浦珠母贝遗传连锁图谱的构建

用AFLP标记构建了印度合浦珠母贝(Pinctada fucata)全同胞家系的遗传图谱。用经过筛选的36对引物组合对父母本和62个子代个体进行遗传分析,共得到1 547个标记,包括581个1∶1分离标记。母本分离标记294个,其中178个符合1∶1孟德尔分离规律;父本分离标记287个,其中182个符合1∶1孟德尔分离规律。雌性框架图包括33个遗传标记,分布在14个连锁群中,标记间平均间隔24.3 cM,有2个3联体,11个连锁对,图谱总长度为488.5 cM。雄性框架图包括53个遗传标记,分布在19个连锁群中,标记间平均间隔30.5 cM,有4个3联体,10个连锁对,图谱总长度为1 035.5 cM。雌雄两个框架图中AFLP标记的分布都较均匀。雌雄基因组估算长度分别为1 168.4 cM和2 037.1 cM,图谱覆盖率分别为41.8%和50.8%。本研究为进一步构建高密度遗传连锁图谱及QTL定位分析奠定了基础。     

合浦珠母贝三倍体的卵诱导四倍体

将合浦珠母贝三倍体的卵与二倍体的精子授精,用０．５μｇ／ｍＬ细胞松弛素Ｂ抑制精卵第一极体的释放诱导四倍体。研究了处理起始时间及持续时间对胚胎孵化率和四倍体诱导率的影响及幼虫的生长及存活。实验结果表明：持续时间与胚胎孵化率呈负相关,而与四倍体诱导率呈正相关,持续时间一般为１５￣１８ｍｉｎ,处理起始时间一般在第一极体出现前３￣５ｍｉｎ。在胚胎期,四倍体诱导率平均为２０％。在幼虫培养阶段,幼虫死亡严重,     

合浦珠母贝全同胞家系贝壳珍珠质颜色分析

合浦珠母贝（Pinctada fucata）小片贝的珍珠质颜色直接影响育珠贝所产珍珠的颜色。每个合浦珠母贝的珍珠质颜色都有自己的颜色特征值,即三刺激值和颜色参数。试验选择16个合浦珠母贝全同胞家系,用CSE成像分析色度系统测量并比较各家系左壳内侧外缘珍珠质颜色参数Lab和三刺激值,以筛选适合做插核小片贝的家系。珍珠质的颜色参数明度（L）为98.586～105.234,其中F16家系的明度最大,F3家系的明度最小;a（红绿色品）为-0.967～-6.577,b（黄蓝色品）为5.915～11.237,F14家系色品最偏向于绿色（-a）,F16家系色品最偏向于黄色（b）。F3和F14家系贝壳外缘珍珠质的色差（ΔEab）最大（7.885）,肉眼能明显觉察。16个家系的合浦珠母贝都属于白色系列,其中离白光中心最近（a2＋b2最小）且个体颜色集中的F1家系最适合用作小片贝来选育培养。     

合浦珠母贝DNA的抽提和RAPD反应体系的优化

分别从保存于-70℃和95%乙醇的合浦珠母贝组织提取总DNA。结果表明,乙醇保存标本用双蒸馏水预处理后所提的DNA与-70℃保存的标本所提的DNA质量均较好。用抽提的DNA为模板优化RAPD条件,得到适合于合浦珠母贝的RAPDPCR反应条件为:20μL反应体系中包括20ngDNA模板,1×PCRBuffer,0.1mmol·L-1dNTPs,2.5mmol·L-1MgCl2,0.2μmol·L-1引物,1UTaqDNA聚合酶。最佳退火温度40℃。PCR产物用非变性PAGE银染和琼脂糖EB染色检测所得到的主要带型相同,但PAGE能检测到更多的多态带。     

Effects of glycopeptides on development,growth and non‐specific immunity of pearl oyster Pinctada fucata (Gould)

The effects of glycopeptides, prepared from pearl oyster Pinctada fucata, on embryonic development, larval and juvenile growth and adult non‐specific immunity of P. fucata were investigated in this study. Glycopeptides had a pronounced stimulatory effect on embryonic development and larval and juvenile growth of P. fucata. enhancing with increased glycopeptide concentrations. All of haemocytes, phagocytosis, aggregation, serum microbiostatic activity and bacteriocidal activity all showed significant increases after 60‐day feeding, relative to unfed controls. The major conclusion is that glycopeptides had a pronounced stimulatory effect on the non‐specific immunity of pearl oysters.     

Age‐dependence of cultured pearl grade and colour in the black‐lipped pearl oyster Pinctada margaritifera

Pinctada margaritifera is an economically important marine bivalve species for cultured pearl production in French Polynesian aquaculture. In order to evaluate the influence of donor oyster age on pearl quality traits, experiments were conducted over 6 years using both grafts and surgreffe operations. At harvest, six pearl quality traits were recorded and compared: surface defects, lustre, grade, darkness level and visual colour. Analysing the quality traits of pearls harvested in the initial graft process and those of pearls obtained from surgreffe experiments allowed a comparison of the influence of pearl sac cells originating from the initial mantle graft, which aged together with their recipient oysters. The results demonstrated a significant decrease between these successive grafts in lustre, grade (A‐B‐C), darkness level, and green colour – traits that are of major importance in the pearl market. The duplicated graft experiment allowed the comparison of donor oyster families at 2 and 5 years old, where a mantle graft was inserted into recipient oysters aged 2.5 years. The results showed the same tendencies to a lesser extent, with (i) an improved pearl grade, predominantly through a most important rate of 0 surface defect category, and (ii) a green/grey ratio in favour of the younger donor. A comparison between the graft‐surgreffe and the duplicated graft experiments also highlighted: (i) the indirect role played by the younger recipient oysters, which must be optimized for optimal pearl quality realization, and (ii) the complex interplay between the donor and recipient oysters.     

微胶囊饲料对马氏珠母贝育珠性能、生长基因和矿化基因表达的影响

本研究分析了自主研发的微胶囊饲料替代微藻对马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)育珠性能、生长相关基因和矿化相关基因表达的影响。共设置了3个实验组,其中,EG1组投喂亚心形扁藻(Platymonas subcordiformis),EG2组投喂微胶囊饲料+亚心形扁藻,EG3组投喂微胶囊饲料。养殖170 d后,比较马氏珠母贝的育珠性能、闭壳肌生长相关基因EGFR、FGF18、GHITM和TβRI以及外套膜的中央膜和边缘膜矿化相关基因pearlin、DPT、pif177和N19的表达。结果表明:(1)各组间马氏珠母贝育珠贝的存活率、留核率不存在显著性差异(P0.05),所采收珍珠的珍珠层厚度及平均质量也不存在显著性差异(P0.05);(2)各实验组间马氏珠母贝闭壳肌中EGFR、FGF18、GHITM和TβR I的相对表达量不存在显著性差异(P0.05);(3)各实验组间马氏珠母贝中央膜中DPT和N19的相对表达量差异不显著(P0.05),EG2和EG3组pearlin的表达量显著性高于EG1组(P0.05),pif177在EG3组中的表达量显著性高于EG1和EG2组(P0.05);(4)各实验组间马氏珠母贝边缘膜中pearlin、DPT和N19的相对表达量差异不显著(P0.05),EG2和EG3组pif177的表达量显著高于EG1组(P0.05)。研究结果说明,该微胶囊饲料可以替代部分微藻进行育珠生产,为进一步研发马氏珠母贝的人工配合饲料及开展工厂化育珠积累了参考资料。     

Phenotypic indicators for cultured pearl size improvement in the black‐lipped pearl oyster (Pinctada margaritifera): towards selection for the recipient growth performance

The black‐lipped pearl oyster, Pinctada margaritifera, is the most important farmed species in French Polynesia and the basis of the most valuable export industry. Mass production of black pearls relies on a surgical operation requiring tissue from a donor pearl oyster to be grafted, together with a nucleus made of shell, into the gonad of a recipient oyster. Improving pearl size through family selection remains one of the main challenges for future aquaculture development. This study analyses the relative contribution of donor and recipient oysters to pearl size. To this end, hatchery‐produced donor oysters of two batches, large and small (based on shell height), were used to supply grafts for recipients, which were then monitored individually for their growth performance by recording shell height, width, and thickness, and total live weight (flesh + shells) every 6 months (four biometric measurement times) over 20 months of culture. Pearls issued from the two batches of donors showed no significant differences in nacre weight or thickness. In contrast, recipient oyster shell height and total weight were increasingly positively correlated with these pearl size parameters over the culture period, becoming significant at 8 months post‐grafting. Potential therefore exists to use shell height and oyster weight as phenotypic indicators for selective breeding of recipient oysters with high growth performance to increase pearl size in P. margaritifera.     

日本珍珠贝人工繁殖苗在热带海区的养殖生长观察

日本珍珠贝引进海南陵水热带海区养殖,人工繁殖幼贝苗1·5~2·0mm下海养殖。经1年的养殖生长观察,结果为:平均壳长59·2mm、壳高59·7mm、壳宽20·7mm,平均个体重34·8g;养殖90d,生长速度较快,壳长平均增长值为11·9mm,相对增长率为55·4%;壳高平均增长值11·2mm,相对增长率61·2%;壳宽平均增长值5·9mm,相对增长率为190·3%。壳长、壳高和体重增长之间具有非常显著的相关关系。研究表明,该贝在海南热带海区养殖的生长速度快,是适宜引进的养殖对象。