抗莱克多巴胺多克隆抗体的制备

为了制备抗莱克多巴胺多克隆抗体,试验通过连接剂butane-1,4-diol diglyciydyl ether把莱克多巴胺和载体蛋白BSA和OVA偶联成免疫抗原和包被抗原,免疫新西兰大白兔,饱和硫铵沉淀方法纯化抗体,间接ELISA法检测抗血清效价。结果通过免疫兔获得了抗莱克多巴胺的多克隆抗体。经ELISA测定,其效价为1∶12800。     

莱克多巴胺免疫抗原与多克隆抗体的制备

采用碳化二亚胺-N-羟基琥珀酰亚胺(EDC-NHS)法将莱克多巴胺(RAC)与活化的牛血清白蛋白(BSA)偶联,合成了免疫抗原(RAC-BSA),经聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外吸收法鉴定偶联成功.用合成的免疫抗原免疫家兔获得了高效价的多克隆抗体,采用所得抗体和辣根过氧化酶标抗原建立莱克多巴胺直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA),标准曲线呈典型S型,具有良好的线性关系.     

洛美沙星鼠源多克隆抗体的制备

用合成的LMLX-BSA偶联物免疫小鼠,ELISA方法检测抗体效价,制备洛美沙星(LMLX)多克隆抗体。结果表明:5只动物中4只产生了高效价的抗体,1只产生的效价较低。用合成的LMLX-BSA偶联物免疫小鼠获得了高效价的多克隆抗体。     

鼠源环丙沙星多克隆抗体的制备

为了制备环丙沙星(CPLX)多克隆抗体,将修饰成功的CPLX-NH2分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备完全抗原—CPLX-NH2-BSA和CPLX-NH2-OVA,用CPLX-NH2-BSA免疫小鼠,获得了高效价的环丙沙星多克隆抗体.     

巴氯芬人工抗原的合成及其鼠源多克隆抗体的制备

【目的】合成巴氯芬（baclofen,BA）人工抗原并制备其多克隆抗体,为巴氯芬免疫学快速检测方法的建立奠定基础。【方法】采用碳二亚胺（EDC）法将BA分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联,合成免疫抗原BA-BSA和包被抗原BA-OVA,通过紫外扫描和SDS PAGE凝胶电泳鉴定其偶联效果。将免疫抗原BA-BSA免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA、间接竞争ELISA及交叉反应试验分别对所获多克隆抗体的效价、敏感性、特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果表明人工抗原偶联效果良好。ELISA结果表明,多克隆抗体的效价达到1∶256 00,半数抑制浓度（IC₅₀）为22.33 ng/mL,且与巴氯芬结构类似物及其他瘦肉精类药物（γ-氨基丁酸、氯丙那林、可乐定、赛庚啶、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺）交叉反应率均小于0.3%,具有良好的敏感性和特异性。【结论】成功合成了巴氯芬人工抗原,并制备了免疫学特性良好的巴氯芬鼠源多克隆抗体。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒多克隆抗体制备及检测应用

将黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaicvirus,CGMMV)辽宁分离物繁殖在葫芦(Lagenaria siceraria)上,用葫芦作为繁殖寄主进行病毒提纯,将提纯病毒制剂免疫家兔制备多克隆抗体,抗体效价为1∶320000,建立了间接ELISA检测黄瓜绿斑驳花叶病毒方法,检测病汁液的灵敏度为1∶32000,检测提纯病毒的灵敏度为4.75×10-5mg。     

睾酮多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

采用优化的碳化二亚胺法制备睾酮(TES)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线.标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.096～92.200 ng/mL,相关系数R2=-0.972 2,半数抑制浓度(IC50)为2.800 ng/mL,最低检测限(LOD)为0.035 ng/mL;抗体与去甲睾酮的交叉反应率为22.3％,与其他检测化合物的交叉反应很小或忽略不计.羊尿20倍稀释后进行添加回收试验,其添加值与检测值的相关系数为0.985 2.因此,该免疫学方法可用于动物尿液中睾酮残留水平的定量分析.     

莱克多巴胺人工免疫原合成及抗体特性

将莱克多巴胺(RAC)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的RAC-戊二酸酐半醛化合物(RAC-SA);采用混合酸酐法(MA)将RAC-SA与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-RAC和包被抗原OVA-RAC,用红外(IR)、紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,推算分子结合比;用BSA-RAC免疫新西兰白兔,间接ELISA测定多克隆抗体(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,琼脂双扩散试验、WestGold膜杂交试验和交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为24.5∶1;获得了高价、敏感、特异的RAC pAb,为RAC残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

兔抗灭多威多克隆抗体的制备

根据灭多威结构特征将其改造成的新半抗原,分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联作为免疫原和包被原进行抗体制备及ELISA试验,抗血清效价达2.56×105。建立了间接竞争ELISA方法并优化了工作条件,方阵测定确定了包被抗原最佳浓度为10μg/ml,抗血清最佳稀释度为1∶51 200,建立了ELISA标准工作曲线,表明在50~5 000 ng/ml浓度范围内抑制率与灭多威浓度的对数值呈线性关系,检测限为100 ng/ml。     

芜菁花叶病毒的分离鉴定及其多克隆抗体的制备与应用

从呈花叶症状的芥菜病株上分离到毒源,经CP基因克隆、序列分析以及电镜观察鉴定为芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV).利用提纯的病毒免疫新西兰大白兔,获得TuMV多克隆抗体,其效价为1:40000,多抗仅对TuMV起特异性反应.以1:10000稀释度为TuMV多抗最适工作浓度,建立TuMV间接酶联免疫吸附测定法(ID-ELISA),该方法检测到提纯病毒的绝对量约1.765ng.说明本试验所建立的TuMV ID-ELISA检测方法可有效运用于TuMV的检测.     

抗双酚A多克隆抗体的制备

[目的]制备可以识别双酚A（BPA）的多克隆抗体。[方法]通过双酚酸（DPA）与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）以及卵清白蛋白（OVA）偶联制备免疫抗原DPA-BSA和包被抗原DPA-OVA,以DPA-BSA免疫新西兰大白兔获得抗血清,并采用间接竞争酶联免疫吸附（ELISA）检测方法对抗体进行鉴定。[结果]经紫外光谱分析,DPA-BSA和DPA-OVA制备成功。抗血清效价最高达到1∶256 000,50%抑制率（IC50）达17.2 ng/ml。[结论]该研究为建立双酚A的快速筛选方法奠定了基础。     

克伦特罗多克隆抗体的制备与鉴定

以重氮法合成克伦特罗（CL）免疫抗原,以戊二醛法合成包被抗原。免疫新西兰兔制备克伦特罗抗体,建立了克伦特罗酶联免疫吸附分析法（ELISA）,标准曲线具有良好的线性关系,该抗体与沙丁胺醇、特布他林的交叉反应率分别为83.44%和80.23%。表明该抗体可以用于对β-兴奋剂类药物进行多残留快速检测。     

兔抗2,4-D多克隆抗体的制备

采用水溶性碳化二亚胺法(EDC),将2,4-D与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫原2,4-D-BSA和包被原2,4-D-OVA,经紫外分光光度计扫描鉴定。用合成的免疫抗原免疫新西兰大白兔,并用合成的包被原进行ELISA试验对抗血清进行定性定量测定,结果表明,获得的抗血清效价达1.6×105。用所制备的抗血清建立间接竞争ELISA方法。优化了ELISA的工作条件,方阵测定确定了包被抗原最佳浓度(5μg/mL),抗血清最佳稀释度(1∶50 000),并建立了ELISA标准工作曲线。工作曲线表明在50~2 000ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,该法检测底限为50 ng/mL。     

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

 【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50 μg蛋白/只?次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng?mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59 、163.80和166.51 ng?mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng?mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。     

6-苄基腺嘌呤人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA.采用紫外...     

诺氟沙星多克隆抗体的制备

为了制备诺氟沙星(NFLX)抗体,将修饰成功的NFLX-NH2分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备完全抗原,用免疫抗原免疫小鼠,获得了高效价的诺氟沙星多克隆抗体.     

定向偶联制备三肽囊素人工抗原及其多克隆抗体的研制

为研制三肽囊素(Bursin,KHG-NH2,BS)抗体,采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA、OVA)定向偶联,分别制备免疫抗原(BSA-KHG-NH2)和检测抗原(OVA-KHG-NH2)。以BSA-KHG-NH2免疫5只BALB/c小鼠,经4次免疫后,均产生了较高的抗体水平,其中5号小鼠血清抗体效价达1∶125 000。免疫小鼠血清多克隆抗体与检测抗原的结合不仅能被三肽囊素阻断,而且能被GKHG-NH2四肽特异性阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明本试验制备的三肽囊素人工抗原是由载体蛋白的羧基与三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基定向偶联而成。利用小鼠多克隆抗体建立了三肽囊素间接竞争ELISA检测方法,线性范围为15～1 000 ng/mL,IC50为160 ng/mL。     

环丙沙星多克隆抗体的制备

用合成的CPLX-BSA偶联物免疫兔子,制备CPLX多克隆抗体。用ELISA方法检测抗血清效价。结果表明,2只兔子中1只产生了高效价的抗血清,另1只产生的效价较低。说明用合成的CPLX-BSA偶联物免疫兔子可获得高效价的环丙沙星抗血清。     

肌肉生成抑制因子多克隆抗体的制备与鉴定

运用纯化的肌肉生成抑制因子(myostatin,简称MSTN)蛋白为免疫原制备弗氏佐剂疫苗,主动免疫健壮的雄性青年家兔以制备抗血清,运用饱和硫酸胺沉淀法对所制备的抗血清成功地进行粗提．Western-Blot和ELISA检测结果是;当抗原质量浓度为20μg／mL,抗体稀释800倍时,所测的P／N仍大于2,证明抗体的制备是成功的,抗体效价为1：12800,且特异性较高．抗体稀释400倍时,血清抗体D450nm值为0．624,P／N值为5．552．