不同解冻温度对陶赛特肉羊冻解后精子活力及存活时间的影响

对陶赛特肉羊的精液经过细管分装冷冻后,用不同的水浴温度进行解冻,通过精子活力和存活时间的比较,寻找出最佳的解冻温度为40~44℃(8 s)水浴解冻。     

不同稀释液及保存温度对猪精子存活时间的影响

随着规模养猪业的发展和优良品种的推广 ,猪的人工授精显示了它的优越性。人工授精大大提高了公猪配种效能 ,扩大了每头优良公猪的利用率 ,降低了公猪饲养成本 ,易施行同期发情和配种计划 ,建立合理的繁育体系 ,有明显经济效益。种公猪性能必须优良 ,精液品质应保证 ,其中精液保存是关键的一环 ,对公猪精液采用哪种稀释液配方及保存温度才能延长精子存活时间 ,本试验就这一问题进行一些探讨。1　材料与方法1 .1　分组1 .1 .1　Ａ组 :Ａ1:基础液 (对照组 ) ,为 5ｇ葡萄糖 ,0 .3 ｇ柠檬酸钠 ,0 .1 ｇ乙二胺四乙酸二钠 ,1 0 0ｍｌ灭菌蒸馏水 ,…     

转基因鲜胚和冻胚对黄牛受胎率的影响

本试验对转基因体细胞克隆胚胎经两种方式(鲜胚体温长途运送和冷冻胚胎复苏)移植到受体牛妊娠和产犊情况进行比较.结果为两组的妊娠率为33.08%和29.32%,出生率为5.70%和5.54%,差异均不显著(P>0.05),说明冻胚解冻后移植与鲜胚长途运输移植的效果无差异,转基因体细胞克隆胚胎低温冻存可应用于实际生产.     

不同冷冻保护剂和投入液氮时温度对冷冻兔胚胎存活的影响

将384个 8～16细胞期的兔胚胎分成四个不同的试验组。用PBS+50％兔血清作为保存液,1.5M的DMSO或甘油作冷冻保护剂,以1℃/分的速度从13～17℃降到-40或-78℃投入液氮。用DMSO和甘油作冷冻保护剂,-40℃投入液氮的两组胚胎解冻后,经体外培养发育成胚泡的比率(分别为35.7％和32.8％)较-78℃投入液氮的两组(分别为22.9％和7.0％)为高。将-40℃投入液氮的两组胚胎解冻后,分别移植给5只受体母兔,受体妊娠率在DMSO组为80.0％,甘油组为60.0％;妊娠20天胎儿存活率分别为>44.9％和>34.0％;仔兔出生率分别为2.04％和22.6％。     

平衡温度、保护剂及时间对卵母细胞减数分裂能力的影响

以小鼠为动物模型，研究延长小鼠卵母细胞在含有冷冻保护剂的液体中的平衡时间，并且降低或提高平衡时的温度是否能影响卵母细胞完成减数分裂的能力。结果表明：1）无论是否有DMSO，0℃平衡15min或60min后卵母细胞的激活率没有明显差异；2）1.5mol/L DMSO液中，0℃平衡15min和60min后卵母细胞激活率低于对照组；3）0℃平衡15min和60min后卵母细胞的激活率与对照组没有差异；4）1.5mol/L的DMSO液体中24℃平衡15min和60min后卵母细胞的激活率显著低于对照组；5）无论是否添加DMSO，无论是24℃平衡还是0℃平衡均没有影响激活卵母细胞的第二极体排出，说明卵母细胞低温平衡时添加DMSO对卵母细胞的激活有一定的影响。     

不同时期鸡胚原始生殖细胞的分离及存活时间的研究

采用Ficoll密度梯度离心，提取第14期(孵化53h)血液、第19期(孵化72h)和第28期(孵化132h)性腺中的PGCs．以比较这3个时期的PGCs在相同的体外培养条件下存活时间的差别。培养基为TCM-199，添加10％的小牛血清，不添加其他的细胞因子，培养后采用台盼蓝染色，以比较其在这种培养液中存活时间的差别。结果发现，第14期提取的PGCs存活时间最短，第19期的最长，第28期的介于两者之间。     

温度和日粮应激对兔免疫反应的影响

为测定长时间热应激和饲料摄入量减少对淋巴细胞增殖和抗体合成的影响，用结核分支杆菌免疫和未免疫的新西兰白公兔在控制的气候条件下单笼饲养２４天。免疫和非免疫兔被分成两个试验组和一个对照组，热应激兔饲养在３３．５℃室温下；日粮限制兔按ＴＳ组兔平均饲料摄入量配对饲喂，维持室温１８℃；对照组维持１８℃并无限量提供饲料。     

牛冷冻精液解冻后在不同温度下的存活时间

牛冷冻精液解冻后在3～8℃、室温及37℃条件下保存,分别于2、4、8、12及24小时,观察其活力变化。结果表明:环境温度对精子的存活时间影响很大,活力的下降速度有明显差异。     

左旋咪唑对温度变动下兔应激的影响

温度突变使机体的细胞免疫功能降低,左旋咪唑是一种免疫调节剂,对免疫力低下,尤其是细胞免疫功能低下者,有很好的增强作用。通过对温度突变前后体温、体重、红白细胞总数、Ｔ淋巴细胞百分率、血糖浓度的测定表明,实验组和对照组比较,Ｔ淋巴细胞百分率、血糖浓度、红细胞总数差异显著（Ｐ〈０．０５）,白细胞总数差异不显著（Ｐ〉０．０５）。实验组体重缓慢上升,而对照组先下降后上升。实验组体温变化不大。综合表明,左旋咪     

Full‐Term Development of Rabbit Embryos Produced by ICSI with Sperm Frozen in Liquid Nitrogen without Cryoprotectants

The aim of the present study was to establish the technology of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) in rabbit by using the sperm frozen without cryoprotectants. Observation under an electron microscope revealed that the rabbit spermatozoa frozen without cryoprotectants had severe damage especially in the plasma membrane and junction between head and tail. However, after being injected into the oocytes, the sperm frozen without cryoprotectants retained the capability of supporting the cleavage and development of the ICSI oocytes, with no significant difference from that of fresh sperm, although the development of ICSI embryos derived from either frozen sperm or fresh sperm is much lower than that of in vivo‐fertilized zygotes. When additional artificial activation was applied following ICSI, the rates of cleavage and blastocyst formation of ICSI oocytes were significantly increased when compared with the oocytes without additional activation. Yet, the cell numbers in blastocysts were not significantly different between the activation and non‐activation group. After embryo transfer, four offspring were obtained from the oocytes microinjected with the sperm frozen without cryoprotectants. The technology established by this study may facilitate exploring the ICSI‐based transgenic method in rabbit and broaden the application of ICSI technique in related field.     

转基因兔胚胎玻璃化冷冻保存的研究

在２５℃条件下,将兔体外受精精子载体转基因兔桑椹胚置于含有４０％乙二醇、１８％Ｆｉｃｏｌ、０．３ｍｏｌ蔗糖的ｍＰＢＳ溶液（ＥＦＳ４０）中平衡２分钟,然后直接投入液氮,成功地进行了玻璃化冷冻保存。解冻后桑椹胚发育至囊胚和孵化囊胚的比例分别为６５．８１％和３９．２４％,与未经冷冻的鲜胚发育比例（７１．０５％和４３．４２％）相比,没有明显的差异。７８枚经玻璃化冷冻和解冻的桑椹胚移植给５只受体,其中２只妊娠,共产下８只活仔兔。     

影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素

试验对影响玻璃化冷冻兔胚胎效果的一些因素进行探讨，以找出理想的玻璃化冷冻方法。在测试的５种玻璃化溶液中，含３５％乙二醇（ＥＧ）和１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的溶液（ＶＳ１）对胚胎的毒性最小。用ＶＳ１冷冻桑椹胚和囊胚的理想程序是：在室温下使胚胎分别在２０％ＥＧ和３５％ＥＧ中平衡２、３分钟后，移入ＶＳ１中，０．５分钟内（囊胚也可在２分钟后）投入液氮中冷冻。桑椹胚的存活率为９１．７％（３３／３６），囊胚的存活率为９７．１％（３３／３４）～９７．３％（３６／３７）。８～１６细胞胚胎的理想冷冻程序为：在室温下使胚胎在２０％ＥＧ、３５％ＥＧ中平衡２、３分钟，移入４℃的３７％ＥＧ＋１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中平衡２分或１０分钟后冷冻，胚胎存活率分别为１００％（３７／３７）、８６．１％（３１／３６）。     

兔超排及SPF桑椹胚超低温保存的研究

采用EFS40、EFS20、mEFS40、mEFS20冷冻液对供试兔桑椹胚的冷冻保存进行了探索,旨在提高冷冻胚胎的复苏率。选取三个方案进行试验。结果表明:三个方案的复苏率分别为17.1%、69.6%和36.1%。孵化率分别为12.9%、60.9%、18.4%,方案二的复苏率和孵化率显著高于方案一、三(P<0.05),通过显微镜观测也证实方案二的冷冻胚胎的形态恢复良好。试验证明使用方案二对供试兔胚胎冷冻可以保持较高的复苏率。     

兔超排及SPF桑椹胚超低温保存的研究

采用EFS40、EFS20、reEFS40、mEFS20冷冻液对供试兔桑椹胚的冷冻保存进行了探索,旨在提高冷冻胚胎的复苏率。选取三个方案进行试验。结果表明：三个方案的复苏率分别为17．1％、69．6％和36．1％。孵化率分别为12．9％、60．9％、18．4％,方案二的复苏率和孵化率显著高于方案一、三（P〈0．05）,通过显微镜观测也证实方案二的冷冻胚胎的形态恢复良好。试验证明使用方案二对供试兔胚胎冷冻可以保持较高的复苏率。     

如何提高仔幼兔成活率

兔是仅次于小鼠最常用的实验动物 ,它广泛用于各种科学研究。仔幼兔阶段易发生感染性和非感染性疾病 ,是兔的一生中最难饲养的时期 ,这是育成兔成活率低的主要原因之一。为了提高仔幼兔的成活率 ,只有采取综合措施 ,抓好仔幼兔饲养中的每一个环节 ,才能提高仔幼兔的成活率。1　搞好环境卫生每天清扫兔舍 ,打扫粪便 ,清洗饲具 ,对兔舍及饲具要定期消毒 ,巢箱要清洗暴晒 ,垫草要干燥清洁 ,没有异味 ,经常通风换气 ,确保空气新鲜。2　加强母兔饲养管理首先要抓好母兔妊娠期与哺乳期的饲养管理。母兔在妊娠期应给予营养丰富 ,无污染 ,含有多种维…     

影响绵羊冻胚移植妊娠率的因素分析

本研究对胚胎质量、胚胎移植数量、胚胎发育阶段、冷冻方法、移植方法及饲养管理水平等因素对移植产羔率的影响进行研究,以提高绵羊胚胎移植效率。结果表明:采用1.5mol/L乙二醇做冷冻保护剂对胚胎进行常规冷冻,冻前A级胚胎冷冻/解冻后可用胚率、存活率、降级率均高于B级,差异极显著(P<0.01)。移植1枚冷冻解冻后A级、B级或2枚(A+B)胚胎的受体移植产羔率分别为44.48%、46.84%和44.81%。经χ2检验分析,三者之间无显著差异(P>0.05)。移植双胚的受体双羔率为22(%53/241),以胚胎为单位计算,产羔率仅为33.40%。A级囊胚和桑椹胚的产羔率之间无显著差异(P>0.05)。1.5 mol/L乙二醇常规冷冻保存的体内胚胎移植产羔率高于EFS40玻璃化冷冻保存,但经统计学分析,二者无显著差异(P>0.05)。子宫手术移植和腹腔内窥镜法子宫移植之间产羔率不具统计学差异(P>0.05)。在牧场条件下大规模移植的平均产羔率为43.95%,范围在20%￣70%之间,受体饲养管理水平对绵羊移植产羔率有较大影响。     

受体牛不同处理方法冷冻胚胎移植效果研究

选择本地黄牛及其杂交牛为受体,在集中补饲添加维生素和微量元素的混合精料50～60天后,分别采用一次注射PG、二次注射PG、CIDR PG、CIDR PG VE四种方法进行同期发情处理,并设自然发情组作移植效果比较。结果4种同期发情处理后的发情率分别为:70.00%、85.71%、88.57%、86.70%,一次注射PG法的同期发情率明显(P<0.01)低于其它3种处理方法;二次注射PG、CIDR PG、CIDR PG VE及自然发情组的移植受胎率分别为:51.85%、52.00%、47.06%和47.34%,这几组间差异不显著(P>0.05),但它们的移植受胎率均明显(P<0.01)高于受胎率为38.89%的一次注射PG组。     

受体牛不同处理方法同期发情与冷冻胚胎移植效果研究

选择本地黄牛及其杂交牛为受体,在集中补饲添加维生素和微量元素的混合精料50~60 d后,分别采用一次注射PG、二次注射PG、CIDR PG、CIDR PG VE4种方法进行同期发情处理,并设自然发情组作移植效果比较。结果4种同期发情处理后的发情率分别为:70.00%、85.71%、88.57%、86.70%,一次注射PG法的同期发情率明显(P<0.01)低于其它3种处理方法;二次注射PG、CIDR PG、CIDR PG VE及自然发情组的移植受胎率分别为:51.85%、52.00%、47.06%和47.34%,这几组间差异不显著(P>0.05),但它们的移植受胎率均明显(P<0.01)高于受胎率为38.89%的一次注射PG组。     

不同受体牛对黑毛和牛冷冻胚胎移植的效果

[目的]选择不同品种牛,利用同期发情和自然发情后作为受体牛,进行日本和牛冻胚移植研究。[方法]选择奶牛20头和南德温杂种肉牛41头作为受体牛,利用CIDR+PG做人工同期发情处理,发情后的受体牛移植和牛冻胚。统计分析受体牛的同期发情率和移植后的妊娠率。[结果]试验结果表明奶牛和南德温杂种肉牛的受体牛同期发情率分别为90.00%和85.36%,差异显著(P<0.05);在同一牛场场使用不同品种受体牛进行冻胚移植试验结果表明,15头奶牛和27头南德温杂种肉牛受体牛妊娠率分别为46.67%和48.14%,差异不显著(P>0.05)。[结论]只要符合胚胎移植受体牛要求,奶牛和南德温杂种肉牛均可作为和牛胚胎移植受体牛。