乳酸杆菌对雏鸡巨型艾美耳球虫感染的防治试验

从理论上讲，任何一种生物物种都存在着与另一些生物物种的生存关系，有的共生，有的制约，有的协同，有的寄生。采用来自于消化道本身的微生物，即“直接饲喂微生物”（directfed microbial，DFM）饲喂动物，防治疾病，已引起人们极大兴趣。雏鸡巨型艾美耳球虫（Emaxima）与肠道乳酸杆菌间相互关系的研究至今未见文献报道。此试验的目的是分析雏鸡感染巨型艾美耳球虫后，其肠道乳酸杆菌变化规律，     

甜菜碱对感染巨型艾美耳球虫雏鸡的生理生化参数影响研究

试验对雏鸡感染巨型艾美耳球虫后在饲料中添加甜菜碱和马杜拉霉素控制其感染过程,并对鸡血液中一些生理生化指标进行了研究。结果表明,雏鸡血液中白细胞,红细胞和血红蛋白的变化对该球虫感染非常敏感,这些指标监测操作简便,可作为评估球虫感染状况的监测指标。并认为感染雏鸡电解质的平衡紊乱是其死亡的主因之一,同时表明甜菜碱的抗球虫作用明显,对机体的电解质平衡有改善作用,而马杜拉霉素在控制虫感染时对机体的电解发质平     

甜菜碱对感染巨型艾美球虫雏鸡生理生化参数的影响

对雏鸡接种巨型艾美球虫前１ｄ,在饲料中分别添加甜菜碱和马杜拉霉素,感染后第５,８,１１和１４ｄ测定鸡血液的有关生理和生化指标。结果表明,雏鸡白细胞,红细胞和血红蛋白的变化对该球虫非常敏感,这些指标可作为评估球虫感染状况的监测指标;并认为感染雏鸡电解质平衡紊乱是导致其死亡的主要原因之一;同时表明甜菜碱的抗球虫作用明显,对机体的电解质紊乱有改善作用,马杜拉霉素在控制球虫感染时对改善机体对电解质紊乱的作     

柔嫩艾美尔球虫实验感染雏鸡体液免疫机制研究

本文通过人工复制的鸡球虫病鸡,利用免疫组化技术等方法,检测了柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)初次感染雏鸡后,盲肠局部和免疫器官中IgG生成细胞数的动态变化。结果表明:攻毒后雏鸡盲肠粘膜、脾脏、法氏囊、盲肠扁桃体中的IgG生成细胞分别于第3、3、3、2d开始增殖,在第12、12、16、9d达到峰值,随后即开始下降,盲肠扁桃体中的IgG生成细胞数在第22d仍高于对照组,且差异显著(P<0.05)。     

雏鸡感染巨型艾美耳球虫后细胞免疫的研究

通过用地塞米松处理鸡和用特异性抗原刺激因子的微量全淋巴细胞转化试验（ＬＰＡ）,研究雏鸡抗Ｅｉｍｅｒｉａｍａｘｉｍａ再感染中细胞免疫现象。结果表明,地塞米松处理可损伤鸡抗Ｅ．ｍａｘｉｍａ再感染的免疫力,这提示了ＣＤ８＋Ｔ细胞,γ－ＩＦＮ及ＩＬ－２等在抗．Ｅｍａｘｉｍａ再感染中的作用,利用Ｅ．ｍａｘｉｍａ卵囊抗原作刺激因子的微量全血ＬＰＡ结果表明,其刺激指数值与鸡抗Ｅ．ｍａｉｘｉｍａ再感染抵抗力有关。     

饲喂转球虫基因功能乳酸杆菌后对雏鸡体重的影响

为了验证转鸡柔嫩艾美耳球虫保护性抗原SO7基因的功能乳酸菌对人工球虫攻击的保护性 ,将这种转球虫SO7基因的功能乳酸杆菌给刚出壳的雏鸡饲喂 ,一周后攻球虫卵囊 5× 1 0 4 个 /只 ,通过对试验雏鸡的体重变化来检测转球虫SO7基因工程乳酸菌的有效性 ,设红、白对照组 ,转基因乳酸菌组和乳酸菌对照组。结果表明 :饲喂转基因乳酸菌组雏鸡 ,在攻击球虫后体重增重未受影响。这为球虫病的防治开辟了一条新的途径     

内源性NO在雏鸡球虫感染中的作用

以腹腔注射途径给予感染柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)雏鸡细菌脂多糖 (L PS)和地塞米松 (Dex) ,用铜离子活化镉还原法检测血清 NO- 2 水平 ,并通过测定 NBT阳性细胞百分率、雏鸡增重、免疫器官的脏器系数、OPG值以及盲肠病变记分等指标 ,探讨了 NO在雏鸡感染球虫过程中的作用。试验结果表明 ,与空白对照组相比 ,给予 L PS可使 NBT阳性细胞百分率明显升高 (P<0 .0 1) ,并使盲肠病变及球虫感染引起的增重下降有所减轻 ,这提示 L PS对雏鸡具一定的保护作用 ;而给予 Dex不仅降低了感染雏鸡血清 NO- 2 的水平、NBT阳性细胞百分率、增重和胸腺的脏器系数 ,还增加了 OPG值和盲肠病变记分 ,说明在雏鸡感染球虫过程中 ,Dex会减少 NO的生成 ,并使雏鸡抗球虫免疫力下降。     

雏鸡感染毒害艾美耳球虫后的体液免疫

采用SPA菌体花环法、间接ELISA法和免疫组织化学法检测毒害艾美耳球虫（E．necatrix）感染雏鸡后，其血液免疫球蛋白含量、B细胞和免疫器官抗体生成细胞数量的动态变化。结果发现：①E．necatrix感染雏鸡后10d血液B细胞数量和IgG、IgM、IgA含量均开始增加，16～18d达到峰值；②感染雏鸡法氏囊、脾脏等免疫器官的抗体生成细胞数量于7～21d不同程度增加，14～18d达最高峰。结果表明，雏鸡体液免疫在抵抗E．necatrix感染中也发挥重要作用。     

人工感染柔嫩艾美耳球虫对雏鸡盲肠正常菌群的影响

在对雏鸡人工感染柔嫩艾美耳球虫后6、8、13、20天,分别对感染雏与未感染雏盲肠内容物中梭杆菌、真杆菌、消化球菌、乳酸杆菌、类杆菌、肠球菌、葡萄球菌和肠杆菌等8种主要正常菌群进行定性、定量分析。结果发现在球虫感染第20天,感染组有益菌如乳酸杆菌的数量低于对照组,差异极显著(P<0.01),有害菌如梭杆菌、葡萄球菌数量感染组高于对照组,其中梭杆菌差异显著(P<0.05),葡萄球菌差异极显著(P<0.01)。     

鸡巨型艾美耳球虫单卵囊分离及雏鸡扩增试验

采用饱和食盐水漂浮法收集就诊病死球虫阳性鸡小肠中段内容物中的球虫卵囊,恒温培养至孢子化后,用2%琼脂薄板进行球虫单卵囊分离,分别感染7只5日龄雏鸡,对据形态学鉴定为巨型艾美耳球虫的分离株进行2代单卵囊分离和雏鸡感染,取其后代以每只1.0×10⁴个卵囊感染10只10日龄雏鸡进行卵囊扩增,获得大量纯种巨型艾美耳球虫卵囊。结果表明,刀片切割琼脂薄板单卵囊分离法操作简便,单卵囊感染成功率较高,准确率达100%,适用于纯种卵囊的分离与扩增。     

中药复方制剂预防鸡巨型艾美耳球虫感染的效果观察

为了探讨常山、青蒿、黄连、大黄、黄芩、黄柏、黄芪、地榆、柴胡等中药组成的不同中药复方制剂预防鸡巨型艾美耳球虫感染的效果,试验设阴性对照组(Ⅰ组)、阳性对照组(Ⅱ组)、中药预防Ⅲ组、中药预防Ⅳ组、中药预防Ⅴ组和中药预防Ⅵ组6个组。结果显示,6个组相对增重率依次为100%、46.65%、84.94%、46.81%、11.37%和30.77%,攻虫后各组死亡率依次为0、20%、10%、0、10%和0,肠道病变记分依次为0、2.4、1、1、1.2和0.8;抗球虫指数(ACI)6个组依次为200、80.25、161.94、121.81、86.67和97.17。结果表明,中药复方制剂Ⅰ预防球虫病效果较好,其他组也有一定的预防作用,但效果不明显。该试验结果为中药复方制剂预防鸡球虫病提供理论依据。     

巨型艾美耳球虫杨凌株对三种抗球虫药物的抗药性研究

用巨型艾美耳球虫杨凌株对14日龄雏鸡进行感染,检测了该虫株对3种常用抗球虫药(球虫精、排球净和克球美)的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定。结果表明,该虫株对克球美有轻度抗药性,对排球净有完全抗药性,对球虫精无抗药性。     

巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)地理株研究Ⅰ.11株巨型艾美耳球虫的分离与基本特征

采用单卵囊分离技术，从江苏、安徽、山东、广东、福建和上海等省(市)10个地区的鸡场及美国的球虫病疫苗中获得了11株纯种球虫。根据下列特征：(1)卵囊的大小、形态和颜色；(2)孢子囊的大小和形态；(3)形状指数(卵囊长宽之比)；(4)虫体肠道中的寄生区；(5)肉眼病变的性质；(6)最早孢子发育时间；(7)最短的潜在期，对这11株纯种球虫作了鉴定。结果表明，11株纯种球虫均为巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima Tyzzer，1929)地理株。应用SPSS软件系统，对各株进行描述性统计和方差分析，结果显示，11株间存在不同程度的差异，而美国株与国内各株均有显著差异。     

不同品种地方鸡对柔嫩艾美球虫的易感性分析

按每只鸡12×10~4个孢子化卵囊的剂量,分别感染20日龄大骨鸡、鹿苑鸡、油鸡和固始鸡,以存活率、相对增重率、血便扣分、病变扣分、卵囊扣分和抗球虫指数为评价指标,分析比较4个地方品种鸡对柔嫩艾美球虫的易感性。试验重复1次。结果显示,4个地方品种鸡对柔嫩艾美球虫的易感性不同。固始鸡对柔嫩艾美球虫易感性最高,表现为感染后的死亡率最高,病变扣分最多,抗球虫指数也最低。油鸡对柔嫩艾美球虫的易感性最低,表现为感染后的死亡率为零,病变扣分和血粪扣分最少,每鸡平均排卵囊数最少,抗球虫指数最高。大骨鸡和鹿苑鸡对柔嫩艾美球虫的易感性相近,位于固始鸡与油鸡之间。     

巨型艾美球虫重组蛋白Gam82-Y和重组质粒pcDNA-gam82的免疫保护效果研究

为研究巨型艾美球虫NT株重组蛋白Gam82-Y和重组质粒pcDNA-gam82对鸡的免疫保护效果,本研究以平均增重、相对增重率及卵囊减少率等作为评价指标,检测结果显示:中剂量重组蛋白佐剂组(0.5 mg-FCA)和中剂量重组蛋白组(0.5 mg)的免疫保护力均低于卵囊免疫组(p＜0.05),但比其他各免疫组高(p＜0.05);重组质粒(pcDNA-gam82)免疫组的平均增重、相对增重率、卵囊减少率等方面与重组蛋白免疫组相同,两者均优于未免疫攻虫组(p＜0.05),但仍未能够达到卵囊免疫组的免疫保护水平(p＜0.05).     

巨型艾美耳球虫偏菱形样蛋白EmRP免疫原性分析

在前期研究中,从巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)cDNA文库中筛选到了免疫保护性抗原偏菱形样蛋白EmRP,本研究为揭示该抗原的免疫保护机理,进一步检测了其免疫原性。以E.maxima卵囊cDNA为模板,用RT-PCR技术扩增EmRP,并构建真核表达质粒pVAX1-EmRP,将其经腿部肌肉注射2周龄的雏鸡,3周龄加强免疫。分别于首次免疫后和加强免疫后1周,采集血清,用ELISA方法检测血清特异性IgG水平,用荧光定量PCR方法(qPCR)检测细胞因子水平,用流式细胞术检测CD4^+T淋巴细胞和CD8^+T淋巴细胞的比例,分析EmRP诱导的免疫反应。序列分析表明,EmRP含有偏菱形样蛋白超家族成员保守区域,为非跨膜蛋白,分子量约为28.4 kD。真核表达质粒pVAX1-EmRP免疫鸡后,与对照组相比,鸡体IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-17等细胞因子转录水平显著提升;CD8^+和CD4^+ T细胞比例显著提高,而血清特异性IgG水平与对照组差异不显著。结果表明,EmRP诱导的免疫保护作用主要是由其诱导的细胞免疫反应实现的,可以作为研制E.maxima新型疫苗的候选抗原。     

11株巨型艾美耳球虫繁殖力的比较研究

用巨型艾美耳球虫扬州株、南通株、连云港株、苏州株、凤阳株、青岛株、福州株、龙岩株、广州株、上海株和美国株孢子化卵囊100个/只或10 000 个/只,经嗉囔接种7 日龄或21 日龄无球虫黄羽肉公雏,以麦克马斯特法对感染后第6 天至第14 天间每天24 h排出的卵囊计数并进行统计分析。结果表明,各虫株的排卵囊量有差异,100个/只卵囊感染7日龄雏鸡时,广州株和凤阳株排卵囊量最多,上海株和苏州株排卵囊量最少;100个/只卵囊感染21 日龄雏鸡时,扬州株排卵囊量最多,上海株排卵囊量最少;10 000 个/只卵囊感染21 日龄雏鸡时,苏州株排卵囊量最多,连云港株和扬州株的排卵囊量最少;排卵囊量随着感染剂量的增加或鸡日龄的增大而增多;在同一感染剂量时,福州株和连云港株增加最多,上海株和苏州株增加最少;在同一感染鸡日龄时,苏州株和上海株增加最多,南通株和扬州株增加最少;各虫株的排卵囊规律极相似,在感染后第7 天排卵囊量达峰值,第8 天、第9 天排出的卵囊量显著减少,第10天排出的卵囊量仅占总量的2%,第14天接近于0%;第6天至第8天排出的卵囊量占总量的87%~99%。     

Eimeria praecox infection ameliorates effects of Eimeria maxima infection in chickens

The effect of Eimeria praecox on concurrent Eimeria maxima infection was studied in susceptible chickens. Clinical signs of coccidiosis were assessed in single E. praecox or E. maxima infections and compared to dual infection with both Eimeria species. Groups infected solely with 10(4)E. maxima oocysts displayed weight gains that were 48% of weight gain in uninfected controls. Weight gain in chickens infected only with 10(4)E. praecox oocysts was 90% of uninfected controls. Average weight gain in chickens infected with both E. maxima and E. praecox was 79% of controls, and showed no significant difference (P>0.05) from weight gain in E. praecox-infected chickens. Feed utilization (feed conversion ratio, FCR) in chickens infected with both species showed no significant difference (P>0.05) from FCR in non-infected controls or chickens infected with E. praecox alone; all showing a significant difference (P<0.05) from FCR in chickens infected solely with E. maxima. Although E. praecox did not appear to have a negative effect on weight gain and FCR, it did cause a significant decrease in serum carotenoids. Analysis of oocysts excreted by chickens during dual infection showed little effect of E. praecox on E. maxima oocyst production.     

巨型艾美耳球虫早熟减毒株的选育

对巨型艾美耳球虫(长春株)经20代的早熟选育,其潜隐期由132h缩短到116h,成为早熟株.该早熟株不经选择传递2代,仍保持了早熟的特性.该早熟株比其亲代株繁殖力下降74%,致病力降低,但仍然保持了其免疫原性.     

巨型艾美耳球虫gam82基因核酸疫苗的构建与免疫原性分析

以重组质粒pGEM-T-gam82为模板,构建巨型艾美耳球虫gam82基因核酸疫苗.采用MTT法与ELISA对该核酸疫苗接种鸡体后淋巴细胞增殖与抗体水平的变化进行检测,结果显示,该核酸疫苗具有一定的免疫原性.