HOPX基因过表达对鸡前脂肪细胞增殖的影响

【目的】构建鸡HOPX基因（homeodomain only protein X）全长编码区（coding region sequence, CDS）的真核表达载体,转染鸡原代前脂肪细胞,探讨HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响。【方法】利用Primer Premier 5.0软件设计鸡HOPX基因CDS区上、下游引物,以AA肉鸡腹部脂肪组织的cDNA为模板,采用PCR扩增、克隆鸡HOPX基因全长CDS区,并将其亚克隆至真核表达载体（pCMV-HA vector）,获得HOPX基因的真核表达载体pCMV-HA-HOPX。采用双酶切鉴定、测序及Western blotting方法分析鉴定pCMV-HA-HOPX。采用胶原酶法分离培养12日龄AA商品肉仔鸡腹部脂肪组织原代前脂肪细胞,瞬时转染pCMV-HA-HOPX,转染6 h时后消化细胞,按照每孔50 000个细胞数接种12孔培养板,并在细胞贴壁0、24、48和72 h,分别采用显微镜观察和CCK-8细胞增殖检测试剂盒分析HOPX基因过表达对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响;同时,利用TRIzol法提取组织和细胞总RNA,并反转录合成cDNA,采用Real-time RT-PCR方法分析细胞增殖标志基因Cyclin D1和PCNA的mRNA表达。【结果】测序结果显示,鸡HOPX基因的全长CDS区大小为222 bp,与NCBI发布的鸡HOPX基因mRNA序列（NM_204556）一致;利用HA标签抗体的Western blotting分析显示,真核表达载体pCMV-HA-HOPX能够表达出预期大小的蛋白分子（约9.5kD）,表明鸡HOPX基因的真核表达载体pCMV-HA-HOPX构建成功。显微镜观察发现,转染pCMV-HA-HOPX载体的细胞（HOPX过表达组）在细胞贴壁后培养24和48 h的细胞数量低于转染pCMV-HA vector空载体（空载体对照组）的细胞数量;CCK-8检测分析发现,转染pCMV-HA-HOPX载体细胞的吸光度值（OD值）在细胞贴壁后培养24、48和72 h都极显著低于空载体对照组（P＜0.01）。与细胞增殖检测结果相一致,细胞增殖标志基因表达检测分析发现,在细胞贴壁后培养24 h后,HOPX过表达组细胞Cyclin D1基因的mRNA表达量显著低于空载体对照组（P＜0.05）;在细胞贴壁后培养48 h时,HOPX过表达组的PCNA基因的mRNA表达量显著低于空载体对照组（P＜0.05）;在细胞贴壁后培养72 h时,HOPX过表达组的PCNA和Cyclin D1基因的表达量均极显著低于空载体对照组（P＜0.01）。【结论】HOPX基因过表达在体外抑制鸡原代前脂肪细胞的增殖。     

鸡HOPX基因的克隆及表达分析

前期研究发现,HOPX基因在鸡脂肪组织高表达,为了解该基因在脂肪发育过程中的作用,采用RT-PCR方法,扩增和克隆鸡HOPX基因全长CDS区,并进行序列分析;采用real-time RT-PCR和半定量RT-PCR的方法,开展了HOPX基因的组织表达谱分析、HOPX基因在东北农业大学肉鸡高、低脂双向选择品系脂肪组织发育过程中的表达差异分析以及鸡脂肪细胞分化过程中的表达分析。研究结果显示,鸡HOPX基因的全长CDS区为222 bp,编码73个氨基酸。HOPX基因在鸡的多种组织中表达,其中,在脂肪组织中的表达量最高;在高、低脂系肉鸡的脂肪组织生长发育过程中,HOPX基因的表达均随年龄增长而上升,且高脂系鸡HOPX基因的表达量高于低脂系;在鸡脂肪细胞分化过程中,HOPX基因的表达呈上升趋势。HOPX基因的表达分析结果提示,该基因在鸡脂肪组织生长发育过程中发挥作用。     

脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞分化中脂代谢基因mRNA表达的影响

采用RT-PCR技术,分别研究短链和长链脂肪酸及P38 MAPK通路抑制剂SB20358对小鼠前体脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达的影响及其调控机制.结果表明:短链脂肪酸可提高PPARγ2和C/EBPα mRNA表达量(P<0.05),而长链脂肪酸上调PPARγ2、C/EBPα、FAS、SREBP-1c mRNA表达量(P<0.05),但脂肪酸对TGH表达量影响不显著(P>0.05);当P38MAPK抑制剂存在时,PPARγ2、FAS和SREBP-1c mRNA表达量显著下降(P<0.05),而C/EBPα和TGH表达量变化不显著(P>0.05).表明脂肪酸可通过P38MAPK通路促进PPARγ2增量表达从而促进小鼠前体脂肪细胞分化.     

鸡YAP1基因在不同生长发育时期卵泡中的时空表达分析

为探讨YAP1基因在鸡卵泡生长发育中的调控作用,以150 d海兰褐蛋鸡为供试材料,采用相对定量RT-PCR方法对YAP1基因在鸡卵巢组织不同发育时期卵泡中的mRNA转录水平进行检测分析,并用免疫组织化学方法对YAP1蛋白质分子在鸡前等级卵泡中的时空表达模式进行蛋白定位分析。结果表明:鸡YAP1基因mRNA在卵巢间质、前等级卵泡和不同等级化的卵泡中均有表达,但在不同等级的卵泡中表达差异不显著(P0.05),呈现出组成型表达的特点。鸡YAP1蛋白质分子主要在卵巢间质组织、前等级卵泡卵母细胞和颗粒细胞中有表达,但在膜层细胞中未检测到其表达信号。此结果表明,YAP1分子可能主要以自分泌或旁分泌的方式在前等级卵泡的生长发育过程中发挥着重要调节作用。     

鸡体脂肪及其控制的研究进展

鸡体脂肪及其控制的研究进展李辉（新疆农业大学，乌鲁木齐，８３００５２）鸡机体中的脂肪对维持生命、生长和生产是不可缺少的。但是，体内沉积脂肪过多会造成饲料极大的无形浪费。饲料消耗的回归研究表明，在正常的营养和环境条件下，代谢体重、体增重和总蛋重的差异，...     

羽速基因对0～20周龄固始鸡生长发育的影响

对 0～ 2 0周龄固始鸡快、慢羽纯系生长发育的研究结果表明 :羽速基因对固始鸡早期的生长发育有一定的影响 ,初生重、2周龄、4周龄、8周龄慢羽系鸡体重高于快羽系鸡 ,且初生重和 4周龄体重达显著水平(P <0 .0 5 ) ;羽速基因对固始鸡育成公鸡体重有极显著影响 ,8周龄快羽系公鸡体重极显著小于慢羽系公鸡 (P<0 .0 1 )。但 1 0～ 2 0周龄 ,快羽系公鸡各周龄体重均极显著地大于慢羽系公鸡 (P <0 .0 1 ) ;羽速基因对固始鸡1 8周龄和 2 0周龄的育成母鸡体重有极显著影响 ,快羽系母鸡体重极显著地低于慢羽系母鸡 ,对 8～ 1 6周龄母鸡的体重无显著影响。     

鸡生长发育早期骨骼肌IGF1R mRNA表达规律研究

以生长速度不同的花山麻鸡和清远麻鸡为试验素材,采用实时荧光定量PCR方法检测鸡9、12、16、21胚龄(E9 d、E12 d、E16 d、E21 d)和出雏后7日龄(7 d)时胸肌和腿肌中IGF1R mRNA表达变化情况,并与肌肉质量进行相关性研究。结果发现,21胚龄时,花山麻鸡和清远麻鸡胸肌质量都出现了显著降低,腿肌质量持续增长。花山麻鸡胸肌IGF1R mRNA表达呈前高后低趋势,9胚龄时表达量最高,之后显著降低并维持在较低的水平,出雏后7日龄时表达量再次下降;清远麻鸡在胸肌中的表达则呈“波浪形”,9胚龄和16胚龄表达量升高,其他日龄表达量显著降低。腿肌中,花山麻鸡IGF1R mRNA表达量在16胚龄之后显著降低;清远麻鸡腿肌IGF1R mRNA表达呈依次递减模式,各时间点之间差异显著(P<0.05)。品种间各个时间点胸肌和腿肌IGF1R mRNA表达量均呈显著差异(P<0.05)。两个品种骨骼肌IGF1R mRNA表达与胸肌、腿肌质量均呈极显著相关(P<0.01)。以上结果初步揭示了生长发育早期不同品种鸡胸肌和腿肌IGF1R基因表达发育变化趋势和品种差异,为深入研究IGF1R基因在鸡肌肉发育中的调控机理提供基础资料。     

MYCN基因在鸡成肌细胞和胸肌组织表达及生长发育中变化

MYCN是癌基因中的核蛋白类调控基因.在前期采用Illumina60kSNP芯片开展的胴体性状的全基因组关联(GWAS)研究中发现,MYCN基因与胸肌、腿肌重达显著相关.为进一步验证该基因在肌肉发育调控中的作用,采用Q-PCR技术,系统检测成肌细胞增殖分化期、胚胎发育后期和出生至98日龄肌肉组织中MYCN基因的mRNA表达量,并比较12个组织的特异性表达差异.结果表明,在鸡成肌细胞增殖、分化过程中,MYCN基因mRNA表达量在分化期显著高于增殖期(P＜0.01),并随诱导分化时间的延长表达量上升;在胚胎期14～21胚龄,mRNA表达量随胚龄的延长而持续上升,18至21胚龄变化显著(P＜0.01);在出生至98日龄生产发育阶段,在0～14日龄的表达量呈急剧下降趋势(P＜0.01),14日龄后变化不显著(P＜0.05).通过12个组织特异性表达分析,MYCN在胸肌、腿肌中的表达量仅次于大脑和下丘脑中枢神经系统中的表达水平.综合各发育阶段的结果表明,MYCN基因参与了肌肉组织发育的调控,其功能主要作用在鸡胚胎发育后期至出生后14日龄之内.该研究为阐明鸡肌肉生长发育的遗传机制提供了理论依据.     

鸡胰岛素样生长因子受体基因对胚胎发育的影响

以广东温氏集团培育的黄羽肉鸡种蛋胚胎为研究对象,并以与人和小鼠胚胎发育相关的胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor type II receptor,IGF2R)基因为候选基因,进行了SNP位点的筛选和多态性的检测,探讨了IGF2R的变异对胚胎死亡的影响。在IGF2R第34外显子中发现2个SNP位点,对具有AlwNⅠ酶切位点的SNP位点进行了PCR-RFLP检测,分析了胚胎IGF2R的SNP位点PCR-RFLPs基因型在死亡和正常发育胚胎中分布特征。经2χ检验,鸡基因IGF2R第34外显子AlwNⅠ-RFLP基因型在死亡和正常发育胚胎中存在显著差异,在死亡的胚胎中基因型AT的频率(0.326)显著地高于正常发育胚胎的频率(0.077)。     

影响鸡肌内脂肪的重要候选基因研究进展

心脏型脂肪酸结合蛋白（Heart fatty acid binding acid, H-FABP）、脂肪型脂肪酸结合蛋白（Adipocyte fatty acid binding protein, A-FABP）和细胞外脂肪酸结合蛋白（Extracellular fatty acid binding protein, Ex-FABP）对鸡肌内 脂肪性状的影响越来越引起研究者的关注。在总结、回顾近年来鸡肌内脂肪性状研究进展的基础上,从H-FABP、AFABP 、Ex-FABP 基因功能、基因单核苷酸多态性以及两基因聚合基因型效应等方面,详细介绍和阐述了其与肌内脂 肪含量的关系,并提出未来鸡肌内脂肪性状的3 个重要候选基因研究需要解决的问题,对鸡肌内脂肪性状的3 个重 要候选基因的研究进行综述,为优质鸡的遗传育种工作提供新的思路和突破口。     

硼中毒对固始鸡生长性能及胸腺发育的影响

120只 1日龄固始鸡随机分为 2组, 试验组在饮水中添加 400mg·L-1硼。每周每组取鸡 10只, 颈静脉放血致死,取胸腺, 称重, 制作石蜡切片, 光镜观察。实验结果表明: (1 ) 试验组胸腺重及胸腺 /体重比显著低于同周龄对照组(P<0 05), 3、5、6周龄胸腺重及 1、2、3、5周龄胸腺 /体重比极显著低于对照组 (P<0 01); (2) 试验组 1、2周龄鸡胸腺明显萎缩, 间质显著增多, 实质急剧退化, 胸腺细胞急剧减少或空竭, 胸腺小体增多、增大; (3) 3周龄起, 试验组大多鸡胸腺发育呈恢复状态, 6周龄, 胸腺组织结构基本恢复。以上结果提示, 添加 400mg·L-1硼的饮水对固始鸡的生长与胸腺的发育, 尤其是胸腺早期发育, 有明显抑制和毒性作用。     

基于基因调控网络对鸡胚皮肤发育的枢纽基因和关键通路分析

为挖掘脊椎动物胚胎发育过程中皮肤调控模式的改变,以鸡胚作为模型,利用来源于NCBI数据库的SRA数据子库中胚胎发育第6～21天的皮肤组织RNA-Seq数据进行聚类分析,在基因共表达网络、信号通路、蛋白互作网路3个层面基于网络拓扑属性逐步挖掘核心基因集,并分析核心基因集在不同发育阶段的互作网络变化.结果表明:1)鸡胚皮肤...     

大肠埃希菌LPS感染对乌鸡脂肪代谢及相关调控基因表达的影响

【目的】研究大肠埃希菌脂多糖(LPS)感染对乌鸡脂肪代谢及相关调控基因转录表达的影响。【方法】将120只35日龄乌鸡随机分为对照组和3个试验组(低剂量LPS组、中剂量LPS组、高剂量LPS组),试验组乌鸡每48 h注射1次不同浓度的大肠埃希菌LPS生理盐水溶液,剂量为1 mL/(只.次),低、中、高剂量LPS组乌鸡的LPS用量分别为0.25,0.5,1 mg/(kg.次),对照组注射等量生理盐水,持续2周。每次注射后12 h,用温度计测量鸡只泄殖腔温度;35,42,49日龄时称鸡体质量;49日龄时,各组随机选取10只鸡翅下静脉采血,分离血清,试剂盒检测血脂指标和脂解酶的活性,然后屠宰,取胸部肌肉、腿部肌肉和腹部脂肪计算脂肪沉积率,定量PCR检测脂肪和肌肉中脂肪代谢调控基因和脂肪酸转运调控基因的转录表达情况。【结果】试验期内LPS处理组乌鸡的泄殖腔温度极显著高于对照组;与对照组相比,LPS处理组乌鸡生产性能极显著下降;脂肪沉积量减少,肌间脂肪、皮下脂肪和腹部脂肪的含量明显降低;血清中总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度极显著下降,而甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)浓度极显著升高;LPS处理组乌鸡血清中的脂蛋白脂酶、肝脂酶和脂肪酶的活性均极显著高于对照组。定量PCR检测表明,LPS处理组乌鸡肌肉和脂肪中的脂肪合成基因FAS、ACC以及控制脂肪酸氧化的CPT-ⅠmRNA水平都显著下降,且FAS/CPT-ⅠmRNA表达水平的比率明显降低;而调控脂肪分解的LPL和控制能量稳态的PPARα的mRNA水平在低剂量LPS组明显升高,但在高剂量LPS组又显著降低;LPS处理组乌鸡的脂肪酸转运调控基因FATP1、FATP4随着LPS剂量的增大而显著降低,FABP和FAT/CD36mRNA在低剂量LPS组显著升高,但随着LPS剂量升高,其表达又降低。【结论】低剂量LPS处理减弱了乌鸡体内的脂肪生成和脂肪酸的氧化,强化了脂质的分解,而高剂量LPS全面抑制了脂肪的代谢。     

微波处理对盐水鸡肉品质的影响

探讨微波处理对冷冻盐水鸡肉品质的影响以鸡胸肉加工的冷冻盐水鸡肉为原料进行微波功率微波 时间鸡肉厚度的3 因素3 水平解冻热处理的正交试验结果表明微波处理对冷冻盐水鸡肉品质有明显影响对 鸡肉硬度的影响极显著,对水分含量食盐含量耐咀性的影响显著对硫代巴比妥酸值微波损失弹性、粘聚性的 影响不显著,通过正交直观分析和方差分析得出冷冻盐水鸡肉食用前微波加热处理的最佳工艺为院微波功率700 W微波时间3 min,鸡肉厚度1 cm。     

BMP15基因在不同品种鸡卵泡中的表达规律

以淮南麻黄鸡和邵伯鸡为试验素材,研究骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)基因在2个群体卵泡颗粒层和膜层中的表达模式及差异。结果表明,在颗粒层中,BMP15在2个群体的卵泡不同发育时期表达模式均呈先增加后降低的趋势,发育到小黄卵泡(small yellow follicle,SFY)时期呈现表达高峰,显著高于其他各等级卵泡的表达量(P0.05,P0.01),之后表达量显著下降;不同时期同一等级卵泡颗粒层中的表达均表现为24周高于43周,小黄卵泡时期表现为24周显著高于43周(P0.05)。在膜层中,BMP15在2个品种的卵泡不同发育时期表达模式均呈"低→高→低"的趋势,表达高峰出现在小黄卵泡(SYF)时期,显著高于其他各等级卵泡的表达量(P0.05)。不同时期同一等级卵泡膜层中的表达基本相似,均表现为24周表达量高于43周,在小黄卵泡(SYF)时期膜层表达量表现为24周显著高于43周(P0.05)。BMP15基因的表达量在各级卵泡的颗粒层和膜层在2个群体间差异不显著。综合BMP15在2个群体不同时期卵泡的颗粒层和膜层中的表达模式研究表明,BMP15在鸡的卵泡发育过程中的表达存在时间、品种和组织差异性。     

植物血凝素对鸡免疫功能的影响

选用罗曼蛋公鸡270羽,随机分为9组,连续3次肌肉注射不同剂量植物血凝素(PHA)后,对其血清蛋白、免疫器官指数及新城疫的攻毒保护效果进行检测.结果表明:肌注2.4 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高鸡的血液生化指标(P<0.05),极显著提高对鸡新城疫的保护率(P<0.01);肌注1.2 mg/kg.bw PHA组与对照组相比,可显著提高胸腺指数和新城疫攻毒保护率(P<0.05).