来源于猕猴桃的柑橘叶斑驳病毒的RT-PCR检测及外壳蛋白基因序列分析

柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV)为柑橘病毒属(Citrivirus)代表种。本研究采用RT-PCR技术从我国栽培猕猴桃上首次检测到CLBV,总检出率为13.3%。测定了5个CLBV分离物的外壳蛋白基因(coat protein gene,cp)序列,全长均为1 092核苷酸(nt),分离物间cp基因核苷酸和编码氨基酸序列相似性分别为83.2%~99.7%和91.9%~98.9%,这些分离物与新西兰报道的CLBV猕猴桃分离物M3-A核苷酸序列相似性仅为83%左右,与来源于柑橘及近缘种的CLBV分离物cp基因核苷酸序列相似性为84%~86%。在基于该病毒cp基因核苷酸序列的系统进化树中,本研究所测定的CLBV猕猴桃分离物与新西兰报道的除M3-A外的猕猴桃分离物聚在同一组群。研究结果为进一步明确CLBV在我国猕猴桃上的侵染和危害特点及建立该病毒的分子检测技术提供了重要信息。     

猕猴桃植株中柑橘叶斑驳病毒实时荧光定量PCR检测技术的建立及应用

 柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus, CLBV)在陕西省栽培猕猴桃中发生普遍。为监测CLBV发生情况,本研究建立了CLBV的实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。该方法特异性强,可准确检测目的病毒,标准曲线斜率为-3.378,决定系数R²=0.997 9,扩增效率为97.7%,比普通RT-PCR灵敏度高100倍,可用于猕猴桃植株CLBV的批量检测或低丰度病毒样本(如猕猴桃休眠枝条)的检测。为苗木携带CLBV病毒的早期诊断、果园病毒病预测预报和防控奠定了基础。     

侵染猕猴桃的柑橘叶斑驳病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备及检测应用

柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV)是β线形病毒科(Betaflexiviridae)柑橘病毒属(Citrivirus)的代表种,前期研究表明CLBV在陕西栽培猕猴桃中广泛发生.为进一步简化CLBV的检测,并探究其致病机制,通过RT-PCR扩增得到CLBV猕猴桃分离物外壳蛋白(c...     

利用实时荧光定量PCR技术检测樱桃叶斑驳病毒

樱桃叶斑驳病毒(Cherry mottle leaf virus,CMLV)是南美洲樱桃上重要的病害之一。本研究针对Genbank上公布的该病毒的核酸序列,人工合成了CMLV(AF170028.1)6741～7322 nt的核酸序列并连接载体,构建了阳性标准质粒,进行实时荧光定量PCR(Fluorescence quantitative,FQ-PCR)检测。实验结果表明,本研究设计的利用FQ-PCR检测CMLV的引物及探针特异性良好,经灵敏度检测,最低检测浓度为23 copies/μL,比普通PCR检测灵敏度高100倍。该FQ-PCR检测方法为樱桃叶斑驳病毒的防控提供了重要的技术支持。     

棉花曲叶病毒研究进展

棉花曲叶病毒(Cotton leaf curl virus,CLCuV)是我国的进境检疫性有害生物,严重危害棉花生长,在巴基斯坦和印度的棉花产区已造成毁灭性灾害。该病毒主要由烟粉虱传播,寄主范围广泛。2006年在广东首次发现棉花曲叶病毒(CLCuV)入侵我国危害朱槿,2010年有报道证实CLCuV已侵染广西南宁试验田的棉花。我国是棉花生产大国,该病毒一旦扩散传播到棉花主产区,后果将不堪设想。本文对CLCuV的变异、国内外分布和流行趋势、影响棉花曲叶病流行的因素、病毒对棉花的品质和产量的影响及病害治理等方面进行综述,并探讨了棉花曲叶病毒研究存在的问题及有效防止该病毒传播和扩散的措施。     

甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因的分子变异

应用单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)技术结合核苷酸序列测定的方法,对我国甘薯主产区11个省份的甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)外壳蛋白(CP)基因的分子变异情况进行了研究.结果表明,SPFMV CP基因的RT-PCR产物表现了较丰富的图谱类型,50个分离物共产生9种主要的SSCP带型;对显示不同带型的20个样品的CP基因进行了序列测定和进化树分析,CP基因核苷酸序列一致性为77.2％～99.9％.说明这些样品的SPFMV的CP基因存在较大的分子变异,可划分为EA、RC、O和C4个株系.     

香石竹斑驳病毒检疫技术进展

自1955年发现香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus——CarMoV)以来,至今已有27个国家和地区报道这个病毒。由于它对香石竹的侵染率高,危害严重,引起各国高度重视,已有南非、意大利、马耳他、新西兰、东非等国家将这种病害列为禁止入境的检疫对象或列为限制进口对象。我国自1983年上海首次从荷兰引进香石竹幼苗中检出 CarMov(带毒率     

香石竹斑驳病毒( CarMV) 主要基因的分子变异分析

 香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus, CarMV)是侵染香石竹的主要病毒之一。本试验从12 个香石竹品种中获得CarMV 分离物,通过RT-PCR 扩增包含p7、p9、CP 3 个主要基因的片段,并对扩增产物进行克隆测序。通过序列比对发现CarMV 的p7、p9、CP 3 个基因有较高的稳定性,p7 基因核苷酸序列相似性为98. 10% ,氨基酸序列相似性为97. 81% ,其中氨基酸的第11 和14 位存在显著差异;p9 基因核苷酸序列的相似性为98. 80% ,氨基酸序列相似性为99. 13% ,氨基酸序列在第4 差异明显;CP 基因核酸序列相似性为97. 58% ,氨基酸的相似性为98. 43% ,氨基酸序列的第164 和331 位的变异存在相关性,整个CP 变异位点比较分散。证实p7 和p9 的变异位点主要集中在暴露与寄主互作相关的N 端,推测这是导致病毒变异,与寄主互作变异的重要位点。     

大豆种传菜豆荚斑驳病毒的研究进展

近年来随着我国大豆进口量激增,国内检疫机构多次从美国进口大豆中检出大豆种传病毒菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)。该病毒是我国植物检疫对象,我国为非疫区,了解和掌握该病毒的生物学特性、为害及其检测技术等方面研究进展和口岸检疫措施与防治办法非常重要。对此,做了综述。     

警惕茄斑驳皱缩病毒入侵

茄斑驳皱缩病毒（eggplant mottled crinkle virus）是一种严重威胁茄子（Solanum melongena）、辣椒（Capsicum annuum）、天竺葵（Pelargonium hortorum）、梨（Pyrus communis）等的番茄丛矮病毒属（Tombusvirus）病毒,在日本、印度、意大利、中国台湾等地均有发生,可导致严重减产,而我国大陆尚无发生报道。本文概述了该病原物的分类地位、传播方式及检疫措施,并提出我国相应防疫策略。     

柑橘黄龙病研究进展

柑橘黄龙病是1种系统性侵染的毁灭性病害.近年来,柑橘黄龙病在我国部分柑橘产区为害加重,巳成为制约柑橘产业健康发展的关键因素之一.为了进一步了解该病的发生、发展规律,制定科学、有效的防治技术方案,为农业生产服务,对该病的发生与为害状况、症状表现、防治技术等方面的研究成果进行了概述.     

PCR方法检测美人蕉黄斑驳病毒

美人蕉黄斑驳病毒病是危害美人蕉的重要病害之一,我国目前尚无该病发生的报道.本文以健康和感病植株为材料,进行总DNA的提取和PCR扩增,从感病植株中扩增出与目的片段大小相符的产物,而健康植株中则未扩增出.PCR扩增产物经克隆、测序后证实,与已报道的美人蕉黄斑驳病毒(Cannayellow mottle virus,CaYMV)序列同源性高达97%～99%.经优化反应条件,建立了稳定的美人蕉黄斑驳病毒PCR检测方法.     

制备免疫吸附电镜检测甘薯羽状斑驳病毒样品

 甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)可经蚜虫、摩擦、嫁接方式传播,是Y病毒组的一个成员。受此病毒感染的甘薯叶片上形成羽状褪绿斑,脉间褪绿斑点以及紫色环斑,有的品种出现紫色条纹。在甘薯块根上,有的呈严重纵向褐色龟裂,有的呈横向螺纹状木质化,有的块根内部形成木栓化,是危害甘薯最严重的病毒病害,可使甘薯严重退化及减产。无论是甘薯的抗病毒育种、病毒病害的防治,还是脱毒、无病毒甘薯种薯生产都离不开病毒的检测。灵敏的免疫吸附电镜(ISEM)检测方法被应用于各种病毒的检测中。     

应用斑点免疫法检测香石竹斑驳病毒

本文应用斑点免疫法(dotimmunobinding,简称DIB)检测了进口香石竹幼苗中的香石竹斑驳病毒。其中1990年从日本引进的材料检测了10个品种,全部呈阳性反应;1991年从荷兰引进材料检测的10个品种中有4个品种表现阴性反应,6个品种表现阳性反应。DIB检测结果与电镜观察结果高度一致,即DIB检测为阳性的材料在电镜下都可观测到病毒粒体,而DIB阴性反应的样品在电镜下检测不到粒体的存在。     

我国草莓斑驳病毒研究鉴定

 作者采集6省13市病样73株。经鉴定带SMoV的67株,占样本的91.78%。采取指示植物小叶嫁接法及蚜虫分离和传播病毒试验,并辅以病毒提纯,人工摩擦接种草本植物,病毒粒子电镜及超薄切片观察等手段加以确证。在辽宁省田间获得一种草莓中瘤钉毛蚜(Chaetosiphon sp.)以及棉蚜和桃蚜均传播本病毒,传播率依次为70%,40%及33%(最高率),系半持久性传播。病毒提纯制荆最大吸收值在260nm处,最小吸收值在240nm处。A260/280=1.21。电镜观测病毒粒子为球形,直径28~30nm,病叶超薄切片观察,在细胞质里有晶状球形颗粒,直径约25nm,排列整齐。以分离物(M-3)提纯制剂为抗原所制备的抗血清与有关病样呈阳性反应。试验证实了国内SMoV的发生和分布。     

利用转录增强技术检测草莓斑驳病毒

为了提高检测草莓斑驳病毒(Strawberry mottle virus,SMoV)的灵敏度和稳定性,探索转录增强技术检测SMoV。在SMoV基因组3′端非编码区的保守区域设计引物,利用带有T7启动子序列的引物进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),再利用T7RNA聚合酶对PCR产物进行体外转录,最后直接通过电泳检测转录产物。结果表明,利用转录增强技术可稳定检测SMoV,灵敏度高于常规RT-PCR;T7启动子序列加在正义引物或反义引物上都可以有效检测。     

柑橘潜叶蛾的发生及检疫控制对策

文章介绍了柑橘潜叶蛾的发生危害特点,并有针对性地提出了柑橘潜叶蛾的检疫控制对策。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)主要危害葫芦科作物,已被世界上许多国家和地区列为检疫性有害生物。CGMMV目前在我国23个省、市、区已有报道发生和危害,严重影响葫芦科作物的生产;近年来该病害在国内外呈现迅猛扩展的趋势并对生产造成危害。本文综述了防治该病害的种子处理、化学及生物防治、嫁接以及转基因等分子生物学方法;分析了CGMMV与寄主黄瓜互作研究的最新进展,对小分子RNA参与调控寄主对CGMMV病毒的防控策略提出了展望,并概述了下一代测序技术、基因编辑技术在植物新病毒的检测、鉴定以及培育抗病新品种等方面的应用。     

玉米褪绿斑驳病毒入侵辽宁省风险简析

介绍了玉米褪绿斑驳病毒的地理分布、寄主、为害情况及传播途径,并结合上述特点对该病毒入侵辽宁省的潜在风险做了简要分析。